簡(jiǎn)介：學(xué)校代號(hào)10532學(xué)號(hào)S132220001密級(jí)湖南大學(xué)碩士學(xué)位論文長(zhǎng)非編碼RNA基因Z38對(duì)人乳腺癌細(xì)胞BT549生物學(xué)特性的影響湖南大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名噸司翻、吼沙形年廠月／日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)湖南大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于‘1、保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密囹。請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“、／”黧一枚C點(diǎn)她蹦星靳簽名茲脅根C虹期≥勺，占年名月／日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R7342密級(jí)公開UDC616編號(hào)10299Z1314006JIANGSUUNIVERSITY專業(yè)專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文學(xué)位碩士學(xué)位論文THESISFPROFESSIONALMASTERDEGREE碩士碩士類別類別臨床臨床醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士論文題目論文題目尼古丁尼古丁對(duì)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞及肺癌對(duì)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞及肺癌細(xì)胞株細(xì)胞株A549生物學(xué)生物學(xué)特性影響的研究特性影響的研究學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)臨床臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)檢驗(yàn)診斷學(xué)作者作者姓名姓名李濤指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師孫曉春曉春答辯日期答辯日期2016年6月12日分類號(hào)R7342密級(jí)公開UDC616編號(hào)10299Z1314006碩士學(xué)位論文尼古丁對(duì)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞及肺癌細(xì)胞株尼古丁對(duì)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞及肺癌細(xì)胞株A549A549生物學(xué)生物學(xué)特性影響的研究特性影響的研究EFFECTSOFNICOTINEONTHEBIOLOGICALACTERISTICSOFHUMANUMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLLUNGCANCERCELLLINEA549作者姓名李濤指導(dǎo)教師孫曉春副教授小組成員胡嘉波教授；朱偉教授申請(qǐng)學(xué)位碩士學(xué)科專業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文提交日期2016年4月13日論文答辯日期2016年6月12日學(xué)位授予單位江蘇大學(xué)學(xué)位授予日期2016年6月20日答辯委員會(huì)主席周紅教授評(píng)閱人

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多軟骨細(xì)胞與軟骨單位在海藻酸鈉中立體共培養(yǎng)生物學(xué)-力學(xué)特性分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：貴朗中亟學(xué)院頑塵學(xué)伍篼艾學(xué)號(hào)20131”研究生姓名陳金火指導(dǎo)教師梁培育教授專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合臨床外答辯時(shí)間二O一六年五月量田史醫(yī)堂瞳塑±堂僮途塞貴陽中醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文相關(guān)聲明原創(chuàng)性聲明本文聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表論文中撰寫過的研究成果，也不包含為獲得貴陽中醫(yī)學(xué)院或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確說明。作者愀日期Ⅵ7陡南月以百關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說明本文了解貴陽中醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其他手段保存學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或貴州省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。

簡(jiǎn)介：授予單位代碼授予單位代碼10089學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)枌W(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?0132419中國中國圖書分類號(hào)圖書分類號(hào)R7351碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文科學(xué)學(xué)位科學(xué)學(xué)位TIMTIM3在人食管癌在人食管癌組織組織中的表達(dá)及其對(duì)食管癌細(xì)胞生物中的表達(dá)及其對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響和學(xué)特性的影響和作用作用機(jī)制的研究機(jī)制的研究20162016年3月研究生滿宏偉滿宏偉導(dǎo)師師單保恩單保恩教授教授王玲副教授副教授專業(yè)業(yè)免疫免疫學(xué)二級(jí)學(xué)院二級(jí)學(xué)院河北醫(yī)科大學(xué)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院第四醫(yī)院HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要5英文縮寫10研究論文TIM3在人食管癌組織中的表達(dá)及其對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響和作用機(jī)制的研究引言11第一部分TIM3在人食管癌組織中的表達(dá)及臨床意義前言13材料與方法15結(jié)果22附圖24附表28討論30小結(jié)32參考文獻(xiàn)33第二部分TIM3對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其促進(jìn)食管癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究前言36材料與方法38結(jié)果52附圖57附表70討論73小結(jié)76參考文獻(xiàn)77結(jié)論80綜述T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白3在腫瘤免疫中的研究進(jìn)展81致謝92個(gè)人簡(jiǎn)歷93

簡(jiǎn)介：目的丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS是引起肝臟疾病的重要病原體，感染者大部分發(fā)展為慢性感染，最后可導(dǎo)致肝纖維化，肝硬化和肝癌，而且目前還沒有有效的疫苗來預(yù)防HCV的感染。聚乙二醇化干擾素?。≒EGYLATEDINTERFERONΑ，PEGIFN?。┖屠晚f林RIBAVIRIN，RBV是治療丙肝的最佳藥物，但仍有約為30％50％的HCV感染者對(duì)該聯(lián)合抗病毒治療無效。HCVCE蛋白是病毒感染肝細(xì)胞后第一個(gè)表達(dá)的蛋白，在感染的靶細(xì)胞和患者的血清中均可檢測(cè)到其存在。HCVCE蛋白不僅參與病毒顆粒的組裝，還可與靶細(xì)胞不同蛋白相互作用調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的功能，包括細(xì)胞的增殖，生長(zhǎng)，凋亡等。固有免疫應(yīng)答是機(jī)體抵抗病原微生物入侵的第一道防線，肝臟組織中的庫否氏細(xì)胞是重要的固有免疫應(yīng)答細(xì)胞，屬于定居的巨噬細(xì)胞，參與機(jī)體的免疫防御。目前認(rèn)為，巨噬細(xì)胞是一類異質(zhì)性很強(qiáng)的細(xì)胞群體，在組織微環(huán)境中可被刺激分化為具有不同功能的細(xì)胞亞群。包括經(jīng)典活化的M1巨噬細(xì)胞、旁路活化的M2巨噬細(xì)胞、腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞等。本室前期結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)，HCVCE蛋白可刺激巨噬細(xì)胞THP1分泌促炎和抑炎因子，因此，本研究擬通過收集HCVCE蛋白作用的THP1上清，從不同的角度觀察培養(yǎng)上清對(duì)正常肝細(xì)胞株L02、肝癌細(xì)胞株HEPG2、SMCC7721的增殖、遷移、侵襲以及對(duì)干擾素作用的影響，并初步探討其機(jī)制，為進(jìn)一步研究HCVCE蛋白對(duì)巨噬細(xì)胞活性的影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1、構(gòu)建與表達(dá)重組HCVCE蛋白從JFH1株HCV2A全長(zhǎng)基因質(zhì)粒上通過PCR的方法擴(kuò)增HCVCE基因，連接至PMD18T載體上，測(cè)序正確后，經(jīng)BAMHⅠ，HINDⅢ雙酶切，與PET28A相連，構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒PET28AHCVCE，雙酶切鑒定。經(jīng)IPTG37℃誘導(dǎo)獲得表達(dá)CE蛋白的包涵體，經(jīng)純化，復(fù)性和濃縮后，行SDSPAGE和WESTERNBLOT鑒定。2、獲得HCVCE蛋白作用的巨噬細(xì)胞MTHP1培養(yǎng)上清PMA10NGML誘導(dǎo)人單核細(xì)胞株THP1分化為巨噬細(xì)胞MTHP1，HCVCE蛋白以20ΜGML刺激MTHP124H后收集上清，離心。80℃保存?zhèn)溆?。同時(shí)設(shè)PBS陰性對(duì)照組與加HCVCE蛋白無細(xì)胞的空白對(duì)照組。3、觀察細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)行為的影響將收集的細(xì)胞培養(yǎng)上清用完全培養(yǎng)基20％或50％稀釋后分別培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞L02、肝癌細(xì)胞HEPG2或SMMC7721細(xì)胞1）通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)CCK8法，劃痕實(shí)驗(yàn)，TRANSWELL細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)及克隆增殖實(shí)驗(yàn)觀察稀釋后的培養(yǎng)上清對(duì)上述肝細(xì)胞細(xì)胞增殖，遷移能力的影響2）通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)三種肝細(xì)胞株MMP2和MMP9基因的表達(dá)變化3）WESTERNBLOT檢測(cè)三種肝細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子NFΚBP65及MAPKS通路相關(guān)蛋白ERK，JNK，P38的表達(dá)。4、觀察細(xì)胞培養(yǎng)上清和IFNΑ對(duì)肝細(xì)胞增殖的影響在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中分別培養(yǎng)L02、HEPG2和SMCC7721三種肝細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁后更換培養(yǎng)基（含IFNΑ1000U孔），1H后加入不同組分的細(xì)胞培養(yǎng)上清，使各孔終體積均為200UL，分別在刺激肝細(xì)胞24H、48H時(shí)檢測(cè)其增殖變化。以了解在CE蛋白作用的THP1產(chǎn)物對(duì)干擾素抗病毒作用的影響。設(shè)組情況如下CE蛋白作用的THP1的細(xì)胞培養(yǎng)上清IFNΑ刺激組為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)設(shè)IFNΑ單獨(dú)刺激組、CE蛋白作用的THP1細(xì)胞培養(yǎng)上清刺激組、THP1的細(xì)胞培養(yǎng)上清IFNΑ刺激組為對(duì)照組。結(jié)果1、構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒PET28AHCVCE（含有2個(gè)HIS標(biāo)簽），經(jīng)BAMHⅠHINDⅢ雙酶切后瓊脂糖凝膠電泳有約575BP大小片段存在，測(cè)序結(jié)果顯示與GENBANK記載序列一致。2、獲得原核表達(dá)重組蛋白HCVCE，純化后經(jīng)SDSPAGE電泳和WESTERNBLOT結(jié)果顯示獲得分子量約為21KD的單一條帶，并測(cè)得其濃度為05ΜGΜL。3、HCVCE蛋白作用的MTHP1細(xì)胞培養(yǎng)上清明顯促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲1）與對(duì)照組相比，50％稀釋的細(xì)胞培養(yǎng)上清時(shí)可促進(jìn)L02、HEPG2以及SMMC7721細(xì)胞的增殖P＜0052在劃痕實(shí)驗(yàn)和遷移試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，20％稀釋的細(xì)胞培養(yǎng)上清能夠明顯促進(jìn)SMMC7721細(xì)胞的遷移P＜001，50％稀釋的細(xì)胞培養(yǎng)上清可明顯促進(jìn)L02細(xì)胞的遷移P＜001，兩種濃度的細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)HEPG2細(xì)胞的遷移無影響。在平板克隆形成試驗(yàn)中，對(duì)三種細(xì)胞均無明顯影響。4、HCVCE蛋白作用的MTHP1細(xì)胞培養(yǎng)上清可干擾IFNΑ抑制肝細(xì)胞增殖的作用與對(duì)照組相比，IFN?。?000U孔）可明顯抑制肝細(xì)胞的增殖，而CE蛋白作用的MTHP1的細(xì)胞培養(yǎng)上清能夠干擾IFNΑ的這種抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞的增殖。5、實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示與純粹的MTHP1的細(xì)胞培養(yǎng)上清和HCVCE空培養(yǎng)基對(duì)照組相比，20％稀釋的核心蛋白刺激下的MTHP1上清作用可顯著促進(jìn)SMMC7721細(xì)胞MMP9的表達(dá)P＜005L02和HEPG2細(xì)胞MMP9和MMP2的表達(dá)水平與對(duì)照組相比并無顯著變化。6、CE蛋白作用MTHP1細(xì)胞培養(yǎng)上清作用SMMC7721細(xì)胞，檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，WESTERNBLOT結(jié)果顯示，與PBS作用MTHP1的細(xì)胞培養(yǎng)上清和HCVCE空培養(yǎng)基對(duì)照組相比，CE蛋白作用MTHP1細(xì)胞培養(yǎng)上清后可使PERK的表達(dá)明顯降低，P38的表達(dá)并無明顯變化，磷酸化的NFΚB65表達(dá)升高。結(jié)論1、成功構(gòu)建、表達(dá)了HCVCE蛋白。2、HCVCE蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清可促進(jìn)L02、HEPG2、SMMC7721的增殖促進(jìn)L02、SMMC7721的遷移可能與NFΚB存在一定關(guān)聯(lián)。3、HCVCE蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清可降低L02、HEPG2、SMMC7721對(duì)IFNΑ的敏感性。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R73密級(jí)題單位代碼10312學(xué)號(hào)20131607霸索匿斜泰J擎碩士學(xué)位論文指導(dǎo)教師但毽數(shù)拯完成時(shí)間三Q二盍生重月南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶影晌胃癌細(xì)胞的生物學(xué)功能和患者預(yù)后1中文摘要1前言5第一部分尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶在胃癌組織中的表達(dá)及預(yù)后影響7材料71、TCGA數(shù)據(jù)庫一72、組織標(biāo)本一83、實(shí)驗(yàn)試劑一84、實(shí)驗(yàn)儀器一95、引物9方法1O1、總RNA的提取TRIZOL法102、逆轉(zhuǎn)錄C￡NA1O3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR114、組織芯片的制備115、免疫組化分析125、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析13結(jié)果15一、TCGA數(shù)據(jù)庫分析15二、卜小M4T在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況15三、NNMT的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系15四、NNMT的表達(dá)與胃癌預(yù)后的關(guān)系16第二部分尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶影響胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能26材料26一、實(shí)驗(yàn)材料一261、細(xì)胞株與培養(yǎng)基262、實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑263、WESTEMB10T相關(guān)試劑274、SIRNA及細(xì)胞轉(zhuǎn)染相關(guān)試劑一275、與細(xì)胞功能學(xué)有關(guān)的實(shí)驗(yàn)試劑一276、相關(guān)培養(yǎng)基及溶液的配置28二、實(shí)驗(yàn)儀器及耗材29方法311、細(xì)胞培養(yǎng)312、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)MRNA表達(dá)313、WESTERNBLOT蛋白測(cè)定334、NANSWELL小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲和遷移355、碘化丙錠PI單染法檢測(cè)細(xì)胞周期366、CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力367、細(xì)胞轉(zhuǎn)染368、生物信息學(xué)分析379、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)3710、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析一38

簡(jiǎn)介：肌腱損傷和肌肉損傷是體育運(yùn)動(dòng)中常見的運(yùn)動(dòng)性疾病，影響運(yùn)動(dòng)員機(jī)能水平和運(yùn)動(dòng)能力的發(fā)揮，成為臨床醫(yī)學(xué)和運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)的主要研究問題。干細(xì)胞在個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育和病理組織再生修復(fù)中具有重要作用。干細(xì)胞發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性的研究為肌腱和肌肉生理、病理機(jī)制的研究提供了基礎(chǔ)，同時(shí)為干細(xì)胞促進(jìn)損傷的修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本研究主要建立了肌腱干細(xì)胞和肌肉衛(wèi)星細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)體系，研究其生物學(xué)特性，建立肌腱損傷和肌肉損傷小鼠動(dòng)物模型，研究干細(xì)胞在運(yùn)動(dòng)性損傷修復(fù)中的作用，得到以下結(jié)果1采用I型膠原酶消化分離胎牛和仔豬跟腱來源肌腱干細(xì)胞，分離后的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下分別傳代至43代和11代；分別通過RTPCR和免疫組織化學(xué)檢測(cè)法對(duì)兩個(gè)物種來源的肌腱干細(xì)胞進(jìn)行特異性標(biāo)記物鑒定；免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，細(xì)胞對(duì)COLLAGENⅠ、COLLAGENⅢ、CD105、CD44、TENINCTNMD、NUCLEOSTEMIN等均表達(dá)陽性；RTPCR結(jié)果顯示，不同傳代次數(shù)的細(xì)胞均表達(dá)COLLAGENⅠ和COLLAGENⅢ，不表達(dá)COLLAGENⅡ，表明所分離的細(xì)胞為肌腱干細(xì)胞；對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性鑒定；在體外通過不同誘導(dǎo)液，將肌腱干細(xì)胞分別誘導(dǎo)成成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，RTPCR檢測(cè)到軟骨細(xì)胞特異性基因均陽性表達(dá)；2采用I型膠原酶和胰酶聯(lián)合消化法消化仔豬脛骨前肌肌肉組織，分離的細(xì)胞接種后通過差速培養(yǎng)法純化并培養(yǎng)至12代，通過RTPCR和免疫組織化學(xué)檢測(cè)鑒定細(xì)胞均表達(dá)MYOD，MOYGENIN，PAX7，CMET，PCNA和NANOG，對(duì)分離純化后的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性和多分化潛能研究。3采用心臟毒素（CTX）構(gòu)建小鼠肌肉損傷模型，石蠟病理切片顯示肌肉正常組織被破壞，血清學(xué)檢測(cè)肌肉中肌酸激酶（CK）含量明顯超出正常范圍，對(duì)肌肉衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞示蹤劑（CMDIL）標(biāo)記后移植到損傷部位，組織學(xué)和血清學(xué)結(jié)果顯示肌肉損傷有所恢復(fù)；通過I型膠原酶誘導(dǎo)的小鼠肌腱損傷制備小鼠肌腱損傷模型，石蠟切片顯示肌腱膠原排列紊亂，肌腱基質(zhì)嚴(yán)重破壞，對(duì)肌腱干細(xì)胞用CMDIL標(biāo)記，將標(biāo)記后的細(xì)胞注射到小鼠肌腱損傷位點(diǎn)，觀察組織學(xué)和血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果顯示細(xì)胞移植治療組損傷肌腱有良好修復(fù)；綜上所述，本文介紹了肌腱損傷、肌肉損傷和干細(xì)胞研究進(jìn)展，在體外成功分離、培養(yǎng)了胎牛、仔豬跟腱來源TDSCS和仔豬肌肉衛(wèi)星細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性和多分化潛能進(jìn)行了研究；通過干細(xì)胞體外移植治療，損傷的小鼠肌腱和肌肉組織得到恢復(fù)初步為以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的細(xì)胞療法治療損傷、促進(jìn)組織再生修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多IGF1剪接變異體IGF1Ec對(duì)成肌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及相關(guān)機(jī)理研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)JIANGSUUNIVERSITY學(xué)術(shù)型學(xué)術(shù)型碩士學(xué)位論碩士學(xué)位論文THESISFORACADEMICMASTERDEGREE碩士類別學(xué)術(shù)型論文題目慢病毒介導(dǎo)的ZIC1基因過表達(dá)對(duì)乳腺癌MDAMB231細(xì)胞生物學(xué)行為的影響學(xué)科專業(yè)外科學(xué)作者姓名汪華兵指導(dǎo)教師丁厚中答辯日期20160611

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文NOTCHNOTCH信號(hào)報(bào)告系統(tǒng)在前列腺腫瘤細(xì)胞系信號(hào)報(bào)告系統(tǒng)在前列腺腫瘤細(xì)胞系中的建立的建立及TRIM59TRIM59在乳腺癌中生物在乳腺癌中生物學(xué)功能功能的研究的研究碩士研究生秦麗霞學(xué)號(hào)1137219286導(dǎo)師高維強(qiáng)指導(dǎo)老師申海蓮申請(qǐng)學(xué)位碩士學(xué)科腫瘤學(xué)所在單位仁濟(jì)醫(yī)院答辯日期2016年4月授予學(xué)位單位上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄第一部分NOTCHNOTCH信號(hào)報(bào)告系統(tǒng)在前列腺腫瘤細(xì)胞系中的建立Ⅰ摘要ⅠABSTRACTABSTRACTⅡ第一章緒論111NOTCH的研究進(jìn)展1111NOTCH的發(fā)現(xiàn)及分子結(jié)構(gòu)1112NOTCH信號(hào)通路的簡(jiǎn)介1113NOTCH在腫瘤中的研究進(jìn)展2114NOTCH在前列腺癌中的研究進(jìn)展312本論文的研究目的和意義4第二章實(shí)驗(yàn)材料和方法621實(shí)驗(yàn)材料6211儀器材料6212試劑材料7213生物材料8214溶液配制822實(shí)驗(yàn)方法8221細(xì)胞培養(yǎng)8222DNA片段膠回收9223酶切目的片段與載體10224連接構(gòu)建重組質(zhì)粒10225轉(zhuǎn)化11226質(zhì)粒抽提11227質(zhì)粒轉(zhuǎn)染13228病毒包裝13229病毒感染152210RNA提取152211RNA反轉(zhuǎn)錄162212實(shí)時(shí)熒光定量PCR162213流式細(xì)胞儀分選細(xì)胞182214統(tǒng)計(jì)分析和作圖軟件18第三章結(jié)果1931構(gòu)建NOTCH報(bào)告重組慢病毒質(zhì)粒載體1932在HEK293T細(xì)胞中檢測(cè)PLVX8XCSLACGFP系統(tǒng)具有NOTCH信號(hào)特異性1933LNCAP8XCSLACGFP穩(wěn)定細(xì)胞株的建立及檢測(cè)22

簡(jiǎn)介：I碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文腎上腺素腎上腺素Β受體對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)受體對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控作用控作用學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)藥理學(xué)藥理學(xué)作者姓名作者姓名楊薪潔楊薪潔指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師陳紅陳紅專教授教授答辯日期答辯日期2015年4月24日

簡(jiǎn)介：塵螨是引起變應(yīng)性疾病的主要變應(yīng)原，用塵螨變應(yīng)原提取物進(jìn)行臨床檢測(cè)和特異性免疫治療應(yīng)用廣泛。然而塵螨提取物受原材料和提取技術(shù)等因素的影響，在蛋白成分、含量及純度等方面差異性大，直接影響了臨床診斷的準(zhǔn)確性以及特異性免疫治療的療效和安全性。本研究中，我們拋開對(duì)變應(yīng)原本身的研究，用塵螨變應(yīng)原陽性患者血清中針對(duì)塵螨的特異性IGE抗體為釣餌，進(jìn)行由果到因的反推。通過噬菌體展示隨機(jī)肽技術(shù)進(jìn)行陰陽雙重篩選，得出與塵螨特異性IGE結(jié)合的模擬肽。首先用塵螨變應(yīng)原IGE陰性的過敏患者血清中IGE進(jìn)行陰性篩選排除IGE保守的重鏈結(jié)合肽，再用塵螨陽性患者血清中IGE為釣餌，得到和IGE抗體高變區(qū)結(jié)合的塵螨B細(xì)胞線性以及構(gòu)象表位模擬肽庫。為了驗(yàn)證篩選的塵螨B細(xì)胞表位模擬肽的體內(nèi)生物學(xué)功能，我們利用戶塵螨誘發(fā)的變應(yīng)性鼻炎伴支氣管哮喘小鼠模型，觀察所篩選的塵螨B細(xì)胞表位模擬肽1，2與3對(duì)小鼠模型氣道炎癥的治療作用，為進(jìn)一步研制和開發(fā)塵螨特異性免疫治療的B細(xì)胞表位疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。一、與塵螨IGE結(jié)合的噬菌體的篩選1、噬菌體的親和篩選以塵螨IGE陰性的過敏患者血清IGE為誘餌進(jìn)行陰性篩選，獲得不能結(jié)合的噬菌體，然后再以塵螨陽性患者血清IGE抗體為誘餌進(jìn)行陽性篩選，選出能夠結(jié)合的噬菌體。在篩選過程中，通過降低釣餌的濃度、減少釣餌與肽庫作用時(shí)間、增加洗脫強(qiáng)度，去除不能與塵螨IGE結(jié)合和與塵螨IGE結(jié)合較弱的噬菌體，經(jīng)三輪篩選后得到富集程度較高的分別與塵螨IGE特異性結(jié)合的噬菌體克隆。2、挑選與IGE特異性結(jié)合的噬菌體克隆從經(jīng)過陰性和陽性篩選后的洗脫物中隨機(jī)挑選出100個(gè)噬菌體單克隆，通過ELISA技術(shù)進(jìn)一步鑒定其與塵螨IGE結(jié)合的特異性，結(jié)果得到84個(gè)能與塵螨IGE特異性結(jié)合的噬菌體。3、DNA測(cè)序與多肽合成將84個(gè)噬菌體克隆進(jìn)行DNA測(cè)序后，除去相同序列以及克隆無效的序列，最后獲得44個(gè)噬菌體克隆。將這44個(gè)噬菌體單克隆的DNA序列與塵螨主要變應(yīng)原分子DERP1，DERP2，DERP5與DERP7的三維結(jié)構(gòu)通過軟件比對(duì)，將3個(gè)特異性強(qiáng)且氨基酸序列與塵螨主要變應(yīng)原比對(duì)性高的噬菌體單克隆合成模擬肽。二、戶塵螨模擬環(huán)肽對(duì)實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎伴支氣管哮喘模型的作用以戶塵螨誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎伴哮喘的小鼠為模型，觀察3個(gè)合成模擬肽在體內(nèi)對(duì)變應(yīng)性鼻炎伴支氣管哮喘的干預(yù)作用，設(shè)正常對(duì)照組，變應(yīng)性鼻炎伴哮喘模型組以及模擬肽干預(yù)組123。100ΜL戶塵螨提取液滴鼻致敏后，正常對(duì)照組以生理鹽水滴鼻激發(fā)，模型組與模擬肽干預(yù)組以100ΜL戶塵螨提取液激發(fā)。模擬肽干預(yù)組采用合成肽（500ΜG合成肽200ΜLPBS）溶液皮下注射連續(xù)給藥干預(yù)（1次天）4天。再次激發(fā)后處死小鼠，進(jìn)行一系列觀察與檢測(cè)，結(jié)果如下1、模擬肽干預(yù)組小鼠的抓鼻、流清涕、打噴嚏的癥狀明顯改善，無口唇發(fā)紺、喘氣以及呼吸頻率加快等癥狀。2、模擬肽干預(yù)組氣道阻力較模型組明顯降低。3、模擬肽干預(yù)組鼻黏膜上皮細(xì)胞完整，無柱狀和杯狀細(xì)胞增生，黏膜下層無腺體增生、無中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，僅有少量嗜酸性粒細(xì)胞；模擬肽干預(yù)組肺組織血管與支氣管炎癥浸潤(rùn)明顯減少、氣道上皮結(jié)構(gòu)好轉(zhuǎn)。4、模擬肽干預(yù)組1、2、3鼻黏膜上皮IL25MRNA、IL33MRNA水平明顯低于模型組；模擬肽干預(yù)組肺組織中IL25MRNA、IL33MRNA水平明顯低于模型組。5、模擬肽干預(yù)組鼻腔與支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞均顯著低于模型組。6、鼻腔灌洗液模擬肽干預(yù)組IL4水平明顯低于模型組，干預(yù)組2、3IL10水平明顯高于模型組，干預(yù)組3中IL25水平明顯低于模型組，干預(yù)組IFNΓ水平明顯高于模型組；肺泡灌洗液模擬肽干預(yù)組IL4水平明顯低于模型組，干預(yù)組1、3IL10水平明顯高于模型組，干預(yù)組IL25水平明顯低于模型組，干預(yù)組1、2中IL33水平明顯低于模型組，干預(yù)組1、3中IFNΓ水平明顯高于模型組。7、模擬肽干預(yù)組血清戶塵螨特異性IGE抗體水平明顯低于模型組，而IGG1抗體水平則明顯高于模型組。綜上所述，應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)成功篩選到塵螨B細(xì)胞表位模擬肽，且篩選到的模擬肽能顯著減輕塵螨誘導(dǎo)小鼠變應(yīng)性氣道炎癥的病理損傷，改善癥狀，有效抑制鼻腔與肺組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，減少促炎細(xì)胞因子的分泌，降低塵螨特異性IGE水平，提高保護(hù)性抗體IGG1水平。本研究為進(jìn)一步研制和開發(fā)塵螨特異性免疫治療的表位疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：目的觀察不同程度酸性條件對(duì)成人髓核間充質(zhì)干細(xì)胞（NPMSCS）生物學(xué)活性的作用，發(fā)掘椎間盤的可能退變機(jī)制。方法篩選6例脊柱側(cè)凸需矯形手術(shù)患者，留取手術(shù)過程中摘除的6個(gè)PFIRRMANNⅠ級(jí)或Ⅱ級(jí)腰椎椎間盤，用膠原酶消化髓核組織，分離細(xì)胞，體外培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)。選擇培養(yǎng)的P2代細(xì)胞，運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞等表面抗原標(biāo)志物；使用分化誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)成骨、成軟骨、成脂細(xì)胞，2周后分別染色液對(duì)誘導(dǎo)的細(xì)胞染色，觀察細(xì)胞三系分化能力。參照國際干細(xì)胞治療協(xié)會(huì)（ISCT）給出的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCS）的判定準(zhǔn)則，綜合鑒定分離的細(xì)胞。使用不同PH值的培養(yǎng)基培養(yǎng)P2代細(xì)胞后，用CCK8法檢測(cè)不同培養(yǎng)時(shí)間的細(xì)胞增殖能力，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同PH培養(yǎng)基作用的細(xì)胞凋亡率，使用實(shí)時(shí)熒光定量（RTPCR）檢測(cè)P2代細(xì)胞“干性”基因及酸離子通道家族蛋白基因表達(dá)情況。結(jié)果分離的P0代細(xì)胞均貼培養(yǎng)瓶底壁生長(zhǎng)。分離培養(yǎng)P2代細(xì)胞表面抗原檢測(cè)示高表達(dá)CD90、CD105、CD73，三者表達(dá)比例分別達(dá)96％、95％、94以上，卻低表達(dá)CD45、CD34、HLADR（均低于4）。通過使用特殊染色劑染色結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)中分離得到的細(xì)胞均可向骨、脂肪及軟骨細(xì)胞方向分化。參照ISCT制定MSCS的判定準(zhǔn)則，認(rèn)為這種細(xì)胞是NPMSCS。CCK8檢測(cè)結(jié)果示分離得到的細(xì)胞在不同PH培養(yǎng)液培養(yǎng)后1、3天不同組細(xì)胞吸光度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）；5天后各組細(xì)胞吸光度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P結(jié)論不同層次的PH酸環(huán)境條件下培養(yǎng)成人NPMSCS3天增殖能力未見顯著變化，作用5天后可以看出低PH環(huán)境明顯抑制NPMSCS的增殖能力以及基因表達(dá)，加快細(xì)胞凋亡，而且這種作用隨著PH降低越明顯。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)密級(jí)密級(jí)研究生學(xué)位論文CARD9在乳腺癌在乳腺癌組織組織中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響細(xì)胞生物學(xué)行為的影響論文題目（中文）論文題目（中文）論文題目（外文）論文題目（外文）THEEXPRESSIONOFCARD9INBREASTCANCERTISSUESITSFUNCTIONSONTHEBIOLOGICALBEHAVIOFBREASTCANCERCELLS研究生姓名研究生姓名孫振學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)生物學(xué)生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究方向研究方向腫瘤細(xì)胞生物學(xué)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)學(xué)位級(jí)別學(xué)位級(jí)別碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱陳學(xué)忠陳學(xué)忠主任醫(yī)師主任醫(yī)師，蘇海翔，蘇海翔研究員研究員論文工作論文工作起止年月起止年月2014年9月至月至2017年3月論文提交日期論文提交日期2017年3月論文答辯日期論文答辯日期2017年5月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市ICARD9在乳腺癌在乳腺癌組織組織中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響生物學(xué)行為的影響摘要乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且趨向于年輕化。雖然，近年來，乳腺癌的早期診斷、手術(shù)方式、放射治療以及靶向治療方面已取得很大進(jìn)展，但預(yù)后仍然較差，靶向藥物效率低且價(jià)格昂貴。研究乳腺癌發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制，探索新的分子靶標(biāo)仍然是乳腺癌研究和臨床中需要解決的難題之一。胱天蛋白酶募集域蛋白9（CASPASERECRUITMENTDOMAINCONTAININGPROTEIN9，CARD9）是一個(gè)重要的銜接蛋白，通過蛋白間的相互作用調(diào)節(jié)NFΚB等信號(hào)通路，在胃B細(xì)胞淋巴瘤、腎癌、丙型肝炎病毒相關(guān)的肝細(xì)胞癌及結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要角色，但其在乳腺癌中的表達(dá)及對(duì)乳腺癌發(fā)生發(fā)展的影響尚未見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和WESTERNBLOTTING技術(shù)分別檢測(cè)乳腺癌癌組織、癌旁組織、乳腺癌細(xì)胞、正常乳腺細(xì)胞中CARD9MRNA和蛋白的表達(dá)情況，分析CARD9表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征間的關(guān)系。通過WST1法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、劃痕實(shí)驗(yàn)研究CARD9高表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、周期、侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響。分析CARD9表達(dá)和NFΚB信號(hào)通路激活的相關(guān)性，初步探討CARD9在乳腺癌中的作用機(jī)制。結(jié)果表明乳腺癌組織中CARD9MRNA（P＜001）和蛋白（P0012）表達(dá)水平顯著高于癌旁組織；乳腺癌T47D細(xì)胞（P0021）和MCF7細(xì)胞（P0014）中CARD9MRNA表達(dá)水平高于正常乳腺細(xì)胞HS578BST；乳腺癌ZR751細(xì)胞中CARD9MRNA（P0003）和蛋白（P0015）表達(dá)水平均高于正常乳腺細(xì)胞HS578BST。CARD9蛋白表達(dá)與腫瘤大小和雌激素受體（ER）表達(dá)有關(guān)（P值均＜005）。CARD9高表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖（P＜005），但對(duì)細(xì)胞凋亡、周期、侵襲和轉(zhuǎn)移未見顯著性影響。乳腺癌組織中P50（P＜005）和PIKK?。≒＜001）蛋白的表達(dá)水平高于癌旁組織，而且乳腺癌組織中CARD9MRNA表達(dá)與P50（R0622P＜0001）、P65（R0392P0005）、IL1Β（R0685P＜0001）和IL12（R0556P＜0001）MRNA表達(dá)間呈正相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果揭示了CARD9在乳腺癌組織中的表達(dá)情況及其與乳腺癌臨床病理學(xué)的關(guān)系。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，CRAD9很可能通過激活NFΚB信號(hào)通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖從而參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。這些研究結(jié)果有助于深入了解CRAD9在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及治療中的潛在價(jià)值，為CARD9成為乳腺癌新的治