簡介：原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含獲得廣西醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名諍一Y沁簽字日期跏薛夠月矽日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即在校期間論文的知識產(chǎn)權(quán)屬廣西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本論文的部分或全部內(nèi)容，可以采用影印、復(fù)印或其它手段保存、匯編本論文，學(xué)校可以向國家有關(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。同意廣西醫(yī)科大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。、／、，學(xué)位論文作者簽名毋一；主、導(dǎo)師簽字翻奄簽字日期H，S年。明矽日簽字日期新舜以月巧日目錄英文縮略詞1摘要5ABSTRACT9第一章SPARC慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定15前言151材料與方法1611材料1612方法232實驗結(jié)果343討論38參考文獻(xiàn)40第二章SPARC基因?qū)β殉舶┝馨徒Y(jié)高轉(zhuǎn)移細(xì)胞SKOV3一PM4增殖、轉(zhuǎn)移的影響42前言421材料與方法4211材料4212方法一432實驗結(jié)果483討論53參考文獻(xiàn)56

簡介：大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中圖分類號密級基因X高表達(dá)對OLK細(xì)胞的生物學(xué)影響B(tài)IOLOGICALEFFECTSOFGENEXOVEREXPRESSINGONOLKCELL肖慶春計學(xué)位論文44頁表格0個插圖10幅指導(dǎo)教師董巖副教授申請學(xué)位級別碩士學(xué)位培養(yǎng)單位大連醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院學(xué)科專業(yè)口腔醫(yī)學(xué)完成時間二O一六年四月答辯委員會主席大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于請在以下相應(yīng)方框內(nèi)打“√“1．保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。2．不保密時。作者簽名商京備日期Ⅵ．6年Y月百日導(dǎo)師簽名氣友日期伽L6年R月V3ET

簡介：背景MICRNAS（小分子RNA，MIRNAS）是一類全長約為2125個核苷酸的非編碼單鏈小RNA分子，MIRNA可以識別特定的靶MRNA，轉(zhuǎn)錄以后信使RNA可以調(diào)節(jié)基因的表達(dá)水平，從而參與調(diào)控細(xì)胞的生長、增殖、分化、凋亡等生命活動。內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤為甲狀腺癌，其在惡性腫瘤中約占3％，已躍居頭頸部惡性腫瘤的首位，女性發(fā)病較多。近年來各國報道甲狀腺癌發(fā)病率的增長多以PTC為主。由于PTC早期多無明顯癥狀，常常導(dǎo)致患者就診時已經(jīng)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或已侵犯周圍器官和組織。因此，探索PTC有效的治療靶點、尋找更安全有效的治療途徑一直是提高PTC生存率和生存質(zhì)量所亟待解決的難題。在本實驗前期的研究中，應(yīng)用高通量的MICRNA微陣列篩選不同分期的PTC組織和癌旁正常組織中差異表達(dá)的MICRNA時發(fā)現(xiàn)，MIR146B5P在早期和中晚期PTC組織中均呈明顯高表達(dá)，同時隨著腫瘤分期的增加，其表達(dá)水平有升高的趨勢，提示其在PTC發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。MIR146B位于10Q2432，與MIR146A具有高度的序列同源性。HE及SHEU等通過基因芯片技術(shù)及RTPCR方法研究發(fā)現(xiàn)MIR146B在PTC組織中過表達(dá)。KIM、XING及CHOU等發(fā)現(xiàn)MIR146B在BRAF基因突變組織中表達(dá)明顯升高，BRAF基因突變與PTC的侵襲性有關(guān)，這可能是MIR146B在PTC中過表達(dá)的一個分子機(jī)制。但目前尚未有關(guān)于MIRNA146B5P與PTC細(xì)胞生物學(xué)影響及相關(guān)機(jī)制的相關(guān)報道，通過本課題的研究，可望獲得MIR146B5P對PTC的生物學(xué)行為影響的可靠證據(jù)，為確立MIR146B5P作為PTC診斷和預(yù)后監(jiān)測的生物學(xué)指標(biāo)及治療靶點奠定理論基礎(chǔ)。本次實驗通過對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC1細(xì)胞株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染使MIR146B5P過表達(dá)，之后通過CCK8、劃痕實驗、TRANSWELL小室侵襲實驗以及流式細(xì)胞儀檢測對比轉(zhuǎn)染前后PTC的增殖、凋亡、周期以及遷移、侵襲能力的變化。從而探討MIR146B5P過表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)展的關(guān)系及MIR146B5P在甲狀腺乳頭狀癌中的作用機(jī)制。目的本實驗通過慢病毒載體構(gòu)建和慢病毒包裝并通過慢病毒侵染試驗，使得HSAMIR146B5P在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC1細(xì)胞株中得到穩(wěn)定高表達(dá)，這個試驗為接下來進(jìn)一步研究MIR146B5P過表達(dá)對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC1增殖、凋亡、遷移、侵襲等生物學(xué)特性的影響打下堅實的基礎(chǔ)。方法1慢性毒質(zhì)粒的構(gòu)建（1）構(gòu)建MIR146B5P過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒（2）將過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC1，獲取MIR146B5P穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞單克隆2MIR146B5P對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響（1）觀察MIR146B5P過表達(dá)對TPC1細(xì)胞增殖的影響CCK8法檢測MIR146B5P過表達(dá)后可以明顯促進(jìn)TPC1細(xì)胞的增殖，實驗組和對照組的細(xì)胞數(shù)均有增加，但實驗組的細(xì)胞增殖更加明顯（P（2）分析MIR146B5P過表達(dá)對TPC1細(xì)胞周期和凋亡的影響通過流式細(xì)胞儀分析技術(shù)，可以看到實驗組和對照組的細(xì)胞凋亡率之間有明顯差異，實驗組細(xì)胞凋亡率減少更為明顯。（3）研究MIR146B5P過表達(dá)對TPC1細(xì)胞遷移能力的影響劃痕實驗觀察過表過MIR146B5P的細(xì)胞，細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)，TRANSWELL小室侵襲實驗觀察細(xì)胞的侵襲能力明顯增強(qiáng)。結(jié)果（1）經(jīng)慢病毒包裝侵染將MIR146B5P轉(zhuǎn)染至甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC1中，細(xì)胞數(shù)都有所增加，但轉(zhuǎn)染組的TPC1細(xì)胞增殖的更加明顯。（P（2）CCK8法和流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染MIR146B5P基因后可以明顯促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC1的增殖，實驗組和對照組的TPC1細(xì)胞數(shù)都有所增加，但實驗組的TPC1細(xì)胞數(shù)增加更加顯著。（P（3）流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率實驗組和空載組、對照組相比較細(xì)胞凋亡減少明顯，差異顯著。（P（4）劃痕實驗觀察轉(zhuǎn)染MIR146B5P后穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MIR146B5P中，24H、48H、72H遷移細(xì)胞數(shù)量均高于空載體組和對照組，轉(zhuǎn)染MIR146B5P后TPC1細(xì)胞的遷移細(xì)胞明顯增加（P結(jié)論經(jīng)過慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MIR146B5P后，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞經(jīng)過CCK8、劃痕實驗、以及流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測TPC1細(xì)胞的增殖得到促進(jìn)，凋亡減少，遷移、侵襲能力明顯增強(qiáng)。提示在TPC1細(xì)胞中MIR146B5P與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)展相關(guān)，MIR146B5P的過表達(dá)可以促進(jìn)TPC1細(xì)胞的異常增殖，這種作用可能是MIR146B5P通過調(diào)控某種抑制基因靶蛋白來實現(xiàn)的，抑制基因尚有待于進(jìn)一步分析和研究。

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。，，0，一_、、J研究生簽名互感導(dǎo)師簽章務(wù)蓬級鋤寒毫委葛一，’捷、隧。多，月；L目河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名互彪遢岫爭軍“章阿∞糾師尋中文摘要II_17F在胃癌組織中的表達(dá)及其對胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響摘要目的檢測IL一17F在胃癌中的表達(dá)，探討IL一17F促進(jìn)胃癌進(jìn)展的作用機(jī)制。方法1采用RTPCR和WESTERNBLOT方法分別檢測IL一17FMRNA和蛋白在胃癌患者癌組織和癌旁對照組織中的表達(dá)，分析其與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。2采用MTT法，檢測不同濃度外源性IL17F1NG／ML、10NG／ML、100NG／ML、200NG／M1對SGC7901細(xì)胞的增殖活性的影響。3用RTPCR和WESTERNBLOT方法檢測IL17FSIRNA基因沉默后SGC7901細(xì)胞中IL17F的MRNA和蛋白表達(dá)情況。4采用WESTERNBLOT分別檢測沉默IL17R基因后，IL17F作用SGC7901細(xì)胞后空載體轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染組中細(xì)胞STAT3的表達(dá)情況；阻斷TPL2活性后，IL一17F作用SGC7901細(xì)胞后，細(xì)胞STAT3表達(dá)的情況。5采用細(xì)胞劃痕實驗和TRANSWELL侵襲實驗分別檢測，IL一17R基因沉默前后和TPL2抑制劑TKI處理前后，IL17F對SGC7901細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的影響。6采用ELISA法檢測，IL17R基因沉默前后和TPL2抑制劑TKI處理前后，IL17F對SGC7901細(xì)胞分泌IL6、IL8和VEGF的影響。結(jié)果LRTPCR實驗結(jié)果顯示，與癌旁對照組織相比，胃癌組織內(nèi)IL17F、VEGF和IL6MRNA表達(dá)顯著增高O628602448VS0155300286、02965O0527VS01438___00295、0455501897VS0235700695并且IL17FMRNA表達(dá)水平與VEGF和IL6MRNA表達(dá)水平明顯相關(guān)P001。2WESTERNBLOT實驗結(jié)果顯示，與癌旁對照組織相比，胃癌組織內(nèi)IL17F蛋白表達(dá)顯著增高03861士01978VSO1347圭00563P鋤05。

簡介：分類號R7379UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文論文題目DAPT及阿霉素對人乳腺癌及阿霉素對人乳腺癌MDAMB231細(xì)胞生物學(xué)活性的影響細(xì)胞生物學(xué)活性的影響作者姓名李志路李志路申請學(xué)位級別碩士碩士學(xué)科、專業(yè)名稱外科學(xué)外科學(xué)論文答辯年月2015年5月2015年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）劉勝春劉勝春教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌乳腺外科重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌乳腺外科重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱ΜGMICROGRAM微克RPMREVOLUTIONSPERMINUTE每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)PRPROGESTERONERECEPT孕激素PBSPHOSPHATEBUFFEREDSOLUTION磷酸鹽緩沖液PAGEPOLYACRYLAEGELELECTROPHESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳ODOPTICDENSITY光密度MMMILLIMETER毫米MLMILLILITER毫升MINMINUTE分鐘HRPHSERADISHPEROXIDASE辣根過氧化物酶HHOUR小時FCMFLOWCYTOMETRY流式細(xì)胞術(shù)FBSFETALBOVINESERUM胎牛血清EGFREPIDERMALGROWTHFACTRECEPT表皮生長因子受體DNADEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸BCL2BCELLLYMPHOMAGENE2BCL2基因DOXDOXUBICIN阿霉素CCK8CELLCOUNTINGKIT8細(xì)胞計數(shù)試劑盒HER2HUMANEPIDERMALGROWTHFACTRECEPT2表皮生長因子受體2TNBCTRIPLENEGATIVEBREASTCANCER三陰性乳腺癌GSIGAMMASECRETASEINHIBITΓ分泌酶抑制劑DMSODIMETHYLSULPHOXIDE二甲基亞砜ECLENHANCEDCHEMILUMINESCENCE增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光PIPROPIDIUMIODIDE碘化丙啶FITCFLUESCEINISOTHIOCYANATEISOMER異硫氰酸熒光素

簡介：學(xué)校代碼10459學(xué)號或申請?zhí)?01312443384密級公開碩士學(xué)位論文應(yīng)用CRISPRCAS9技術(shù)敲除食管鱗癌EC109細(xì)胞系DMRT2基因及其生物學(xué)功能的初步探究作者姓名王圓導(dǎo)師姓名秦艷茹教授學(xué)科門類醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱腫瘤學(xué)培養(yǎng)院系鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院完成時間2016年5月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進(jìn)行實驗研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明的引用內(nèi)容外，本論文不包括其他任何個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的科研成果。對本論文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體均在文中以明確的方式表明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵循此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月

簡介：授予單位代碼授予單位代碼10089學(xué)號或申請?zhí)枌W(xué)號或申請?zhí)?0133227中國圖書分類號中國圖書分類號R7398碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文專業(yè)專業(yè)學(xué)位學(xué)位MIRNA222對口腔鱗癌細(xì)胞株對口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC15生物學(xué)功能影生物學(xué)功能影響的研究的研究研究生生趙江輝趙江輝導(dǎo)師師陳彥平陳彥平教授教授專業(yè)業(yè)口腔醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)二級學(xué)院二級學(xué)院河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院2012016年3月HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要4英文縮寫8研究論文MIRNA222對口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC15生物學(xué)功能影響的研究前言9材料與方法10結(jié)果14附圖16附表19討論20結(jié)論24參考文獻(xiàn)25綜述口腔癌中MIRNA的研究進(jìn)展28致謝38個人簡歷39

簡介：第一章人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取、培養(yǎng)及鑒定目的建立一種簡單可行的人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取、分離、培養(yǎng)方法。方法通過人嗅黏膜組織貼壁法體外分離、培養(yǎng)嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞，在倒插顯微鏡下，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)用流式細(xì)胞儀檢測及觀察其細(xì)胞表面標(biāo)記物再在體外誘導(dǎo)其向脂肪細(xì)胞和骨細(xì)胞，應(yīng)用油紅O染色、茜素紅染色分別鑒定脂肪組織脂滴和骨組織鈣鹽沉積。結(jié)果體外培養(yǎng)的人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞在形態(tài)上以梭形為主，細(xì)胞排列呈放射狀，細(xì)胞增殖迅速。間充質(zhì)干細(xì)胞陽性標(biāo)記物CD73、CD90、CD105人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞高表達(dá)，造血干細(xì)胞標(biāo)記物CD34、CD45不表達(dá)。在特定條件下可定向誘導(dǎo)分化為脂肪組織、骨組織。免疫熒光染色提示，所培養(yǎng)的人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)NESTIN和STRO1。結(jié)論人嗅黏膜組織塊貼壁培養(yǎng)法是一種操作簡便的有效的方法，通過此方法培養(yǎng)出的細(xì)胞符合間充質(zhì)干細(xì)胞的一般鑒定標(biāo)準(zhǔn)，表達(dá)嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)志物NESTIN、STRO1。第二章人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究目的全面了解人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性。方法1人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞，分離、純化、培養(yǎng)、傳代（方法同第一章）2透射電子顯微鏡和掃描電子顯微鏡下觀察其超微結(jié)構(gòu)3加入神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基（DMEMF12培養(yǎng)基2％B2720ΜGL的表皮生長因子20ΜGL的堿性成纖維生長因子）觀察嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞成球特性4為進(jìn)一步了解其生長特性，采用MTT法測定并繪制出嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的生長曲線5流式細(xì)胞儀測定并分析其細(xì)胞周期6在體外誘導(dǎo)其向神經(jīng)元分化，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、WESTERNBLOT、電鏡及膜片鉗等方法鑒定誘導(dǎo)后的細(xì)胞神經(jīng)元Β微管蛋白ΒTUBULIN、膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP和神經(jīng)微管相關(guān)蛋白2MAP2的表達(dá)，觀察分化后的細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞電生理特性。結(jié)果嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)顯示細(xì)胞表面有許多的微絨毛，可有兩種不同的細(xì)胞形態(tài)具有成球特性且表達(dá)NESTIN，生長曲線結(jié)果提示人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞符合干細(xì)胞正常生長特征且細(xì)胞增殖較活躍流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期檢測表明，嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞有80％以上細(xì)胞處于GOG1期神經(jīng)元特定誘導(dǎo)后，嗅黏膜間充質(zhì)于細(xì)胞高表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)記物MAP2、TUBULIN，具有尼氏小體和鉀離子通道。結(jié)論人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞具有間充質(zhì)干細(xì)胞的一般生物學(xué)特性，在特定條件下嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞還可誘導(dǎo)為有部分成熟神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和電生理活性的神經(jīng)元，可作為神經(jīng)修復(fù)的理想種子細(xì)胞。

簡介：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BONEMARROWDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLSBMSCS）是一類具有多向分化潛能（MULTIPLEDIFFERENTIATIONPOTENTIALITY）的成體干細(xì)胞，能向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及肌細(xì)胞等方向進(jìn)行分化。因其具有取材方便、增殖快速、低免疫原反應(yīng)、能夠分化為多種細(xì)胞、分泌多種生物活性因子以及向損傷組織遷移等優(yōu)點，目前成為細(xì)胞、基因治療以及組織工程等領(lǐng)域方面的研究熱點。在細(xì)胞治療和組織修復(fù)的研究中，BMSCS的誘導(dǎo)分化顯得尤為重要。BMSCS處于復(fù)雜的流體微環(huán)境中，許多研究證明力學(xué)因素在BMSCS的分化過程中起著重要的作用。力生長因子（MECHANOGROWTHFACTMGF）是近年來新發(fā)現(xiàn)的組織受損或受力學(xué)刺激過程中表達(dá)的一種胰島素樣生長因子（INSULINLIKEGROWTHFACTIGF1）選擇性剪接變體。實驗證明MGF及MGFE結(jié)構(gòu)域24肽（羧基端24肽，MGFE）在保護(hù)受損組織和細(xì)胞、促進(jìn)損傷修復(fù)方面起重要的作用。目前，已有關(guān)于MGF在細(xì)胞分化方面的研究，但MGF在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（HBMSCS）的分化過程中起著怎樣的作用尚不清楚。本文首先研究了MGFE對HBMSCS增殖和遷移的影響，在此基礎(chǔ)上著重研究MGF及MGFE對HBMSCS分化的影響，繼而研究何種因素在MGFE誘導(dǎo)HBMSCS的分化過程中起主要調(diào)控作用。本文的主要工作和研究結(jié)果如下①MGFE對HBMSCS增殖和遷移的影響首先，通過可控的FX4000T細(xì)胞應(yīng)力加載系統(tǒng)對HBMSCS施加12％，1HZ的等雙軸周期性力學(xué)刺激，利用REALTIMERTPCR（REALTIMEREVERSETRANION–POLYMERASECHAINREACTION）技術(shù)檢測MGFE的表達(dá)。結(jié)果顯示，力學(xué)加載并未對MGFE基因的表達(dá)產(chǎn)生影響。隨后，檢測外源性添加MGFE對HBMSCS細(xì)胞增殖和遷移的影響。結(jié)果顯示MGFE對細(xì)胞的增殖速率具有一定的延緩作用。TRANSWELL和創(chuàng)傷愈合實驗檢測顯示25NGML和50NGML的MGFE能明顯促進(jìn)細(xì)胞的遷移，100NGML的MGFE與對照組相比細(xì)胞的遷移沒有明顯變化。RTPCR與WESTERNBLOT實驗結(jié)果顯示MGF能促進(jìn)環(huán)氧合酶2（CYCLOOXYGENASE2COX2）MRNA和蛋白的表達(dá)，COX2抑制劑NS398能延緩MGF誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移速率，說明MGF可能通過誘導(dǎo)COX2的表達(dá)促進(jìn)HBMSCS的遷移。以上實驗結(jié)果表明力學(xué)加載并未對HBMSCS中MGF的表達(dá)產(chǎn)生影響；外源性添加MGFE能促進(jìn)細(xì)胞的遷移，延緩細(xì)胞的增殖速率。②MGFE對HBMSCS向成骨、成脂肪及成軟骨方向分化的影響為研究MGFE對HBMSCS分化的作用，分別配制成骨、成脂肪及成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基并作為對照組，以加入20NGMLMGFE的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為實驗組，分別進(jìn)行了成骨、成脂肪及成軟骨方向分化的檢測。培養(yǎng)過程中誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基每三天更換一次，MGFE每天添加一次。實驗結(jié)果如下1）通過堿性磷酸酶（ALKALINEPHOSPHATASEALP）活性檢測，ALP染色和茜素紅染色（ALIZARINREDSSTAINING）研究了MGFE在HBMSCS向成骨分化中的作用。2）通過油紅O（OILREDO）染色以及RTPCR技術(shù)研究了MGFE在HBMSCS向成脂肪分化中的作用。3）通過免疫熒光染色及酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA）技術(shù)研究MGFE在HBMSCS向成軟骨方向分化中的作用。以上實驗的研究結(jié)果表明分別向成骨、成脂肪、成軟骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加MGFE能顯著促進(jìn)HBMSCS向成骨、成脂肪、成軟骨方向分化，這為后續(xù)的研究提供了基礎(chǔ)依據(jù)。③過表達(dá)MGF對HBMSCS向成骨及成脂肪方向分化的影響為進(jìn)一步研究MGF在HBMSCS分化中的作用，由INVITROGEN公司構(gòu)建含有MGF基因的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入大腸桿菌中擴(kuò)增，隨后轉(zhuǎn)染到HBMSCS中。將轉(zhuǎn)染MGF基因的HBMSCS分別在成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基和成脂肪分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以空白質(zhì)粒為對照，分別進(jìn)行茜素紅和油紅O組織化學(xué)染色。RTPCR實驗結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后的HBMSCS中MGF的表達(dá)明顯升高。成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)7天后，茜素紅染色顯示誘導(dǎo)后的細(xì)胞產(chǎn)生大量鈣沉積；成脂肪誘導(dǎo)分化培養(yǎng)7天后，油紅O染色結(jié)果顯示誘導(dǎo)后的細(xì)胞含有較多的脂肪油滴。以上實驗結(jié)果表明MGF轉(zhuǎn)染后的HBMSCS分別在成骨、成脂肪分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)后其向成骨、成脂肪細(xì)胞分化的能力明顯增強(qiáng)。④MGFE通過延遲細(xì)胞周期促進(jìn)HBMSCS的分化為研究MGFE誘導(dǎo)HBMSCS分化的調(diào)節(jié)機(jī)制，利用流式細(xì)胞技術(shù)（FLOWCYTOMETRYASSAY）檢測MGFE對細(xì)胞周期的影響，并通過RTPCR技術(shù)檢測相關(guān)周期蛋白CYCLINE和CYCLINDEPENDENTKINASE（CDK2）的表達(dá)情況。流式檢測結(jié)果顯示生長培養(yǎng)基中添加MGFE24小時后，G1期細(xì)胞數(shù)量明顯增加，說明MGFE將細(xì)胞周期阻滯在G1期，G1期時間延長。RTPCR結(jié)果顯示MGFE處理24小時后細(xì)胞周期蛋白CYCLINE、CDK2MRNA表達(dá)水平明顯下降。以上實驗結(jié)果表明MGFE可能通過減少細(xì)胞周期蛋白CYCLINE、CDK2的表達(dá)，將細(xì)胞周期阻滯在G1期，從而向有利于細(xì)胞分化的方向發(fā)展。綜上所述，本文研究了周期性力刺激對HBMSCS中MGF表達(dá)的影響，MGFE對細(xì)胞增殖、遷移的影響，并著重研究了MGF在HBMSCS分化中的作用。結(jié)果表明MGF能促進(jìn)HBMSCS的遷移，并通過延遲細(xì)胞周期促進(jìn)HBMSCS的分化。這為MGF在細(xì)胞治療和組織工程中的應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)。

簡介：目的本實驗通過觀察不同濃度17Β雌二醇對體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞（HUMANPERIODONTALLIGAMENTCELLS，HPDLCS）的增殖、堿性磷酸酶活性以及細(xì)胞周期的影響，探討17Β雌二醇影響人牙周膜細(xì)胞生物學(xué)特性的有效濃度，為將17Β雌二醇作為一種新型的誘導(dǎo)劑應(yīng)用于正畸治療提供生物學(xué)依據(jù)。方法選取因正畸治療需要拔除的健康前磨牙，在無菌條件下刮取牙周膜組織，采用組織塊結(jié)合酶消化法進(jìn)行原代培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長至鋪滿瓶底約12時進(jìn)行首次傳代，從而獲得大量可供實驗用的種子細(xì)胞。取第4代對數(shù)生長期人牙周膜細(xì)胞爬片，進(jìn)行波形絲蛋白VIM和角蛋白CK免疫組織化學(xué)染色鑒定細(xì)胞來源，倒置顯微鏡下觀察。將處于對數(shù)生長期的第4代人牙周膜細(xì)胞用于實驗，細(xì)胞隨機(jī)分為6組5個實驗組和1個對照組。實驗組在相應(yīng)的有細(xì)胞孔內(nèi)分別加入含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液配置的終末濃度分別為105、106、107、108、109MOLL的17Β雌二醇。對照組在相應(yīng)的有細(xì)胞孔內(nèi)加入含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。每天換液以維持藥物濃度恒定。1、MTS比色法檢測17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞增殖的影響實驗組和對照組PDLCS分別于培養(yǎng)24H、48H、72H和7D時隨機(jī)取出一個96孔培養(yǎng)板，向所測孔內(nèi)加入30ΜLMTS，在37℃，5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育4H，酶標(biāo)儀上測定490NM下各孔的吸光度值。2、BCIPNBT法檢測17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響實驗組和對照組PDLCS經(jīng)17Β雌二醇誘導(dǎo)7D后，吸棄原培養(yǎng)液，PBS洗滌23遍，4％多聚甲醛固定1H，PBS洗滌23遍，每孔加入1MLBCIPNBT工作液，室溫避光放置30MIN，吸棄工作液，PBS洗滌23遍，自然光下拍照。3、流式細(xì)胞術(shù)檢測17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞細(xì)胞周期的影響實驗組和對照組PDLCS在培養(yǎng)96H后進(jìn)行細(xì)胞周期實驗，按照細(xì)胞周期試劑盒說明書操作，進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果1、體外分離培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞抗波形絲蛋白多克隆抗體VIM在細(xì)胞中呈陽性表達(dá)，抗細(xì)胞角蛋白CK呈陰性表達(dá)，證實細(xì)胞的間葉源性，而非上皮源性，符合實驗要求。2、與對照組相比，在一定濃度范圍內(nèi)17Β雌二醇能促進(jìn)人牙周膜細(xì)胞的增殖、提高堿性磷酸酶活性及推進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，其中以濃度為108MOLL的17Β雌二醇作用最為明顯。結(jié)論1、采用組織塊結(jié)合酶消化法可成功培養(yǎng)出人牙周膜細(xì)胞，培養(yǎng)所得細(xì)胞生長狀態(tài)良好，形態(tài)為長梭形，可復(fù)層生長，符合實驗要求。2、一定濃度范圍內(nèi)的17Β雌二醇對人牙周膜細(xì)胞增殖、分化有一定的誘導(dǎo)作用，提示了17Β雌二醇作為一種新型的誘導(dǎo)劑應(yīng)用于牙周組織改建、修復(fù)、再生等組織工程領(lǐng)域的可行性。

簡介：原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含獲得廣西醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名謝簽字魄渺年多月M學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即在校期間論文的知識產(chǎn)權(quán)屬廣西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本論文的部分或全部內(nèi)容，可以采用影印、復(fù)印或其他手段保存、匯編本論文，學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。同意廣西醫(yī)科大學(xué)可以用不同的方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或者部分內(nèi)容。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名J≥孕刁簽字日期沙，多年二月F口日鋤張氫強(qiáng)簽字日期砂，Y年莎月，。日＼課題基金來源1國家自然科學(xué)基金項目號81160262課題名稱小肝癌合并膽管癌栓起源于肝干細(xì)胞的實驗研究負(fù)責(zé)人黎樂群2國家自然科學(xué)基金項目號81260331課題名稱COX一2調(diào)控MICRORNA21影響肝癌干細(xì)胞生物學(xué)特性及機(jī)制研究負(fù)責(zé)人向邦德

簡介：學(xué)校代碼10459學(xué)號或申請?zhí)?01212443312密級公開碩士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)CCDC67轉(zhuǎn)染甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞生物學(xué)活性的鑒定本課題受國家自然科學(xué)基金（81372863）資助作者姓名許建輝導(dǎo)師姓名殷德濤學(xué)科門類醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱外科學(xué)（普通外科）培養(yǎng)院系第一附屬醫(yī)院完成時間2015年3月原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日

簡介：本文通過研究FOXO1對于心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用，從而揭示FOXO1的功能是誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷還是保護(hù)損傷的心肌細(xì)胞，還是兩個兼有。同時進(jìn)一步研究心肌細(xì)胞特異性缺失FOXO1促進(jìn)氧化應(yīng)激導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制和FOXO1過表達(dá)通過促進(jìn)細(xì)胞自噬降低細(xì)胞凋亡的機(jī)制，本研究對于尋找抗心肌缺血再灌注損傷的藥物治療靶點，提高心肌梗死治療療效意義重大目的1通過過氧化氫培養(yǎng)心肌細(xì)胞模擬過氧化自由基對心肌細(xì)胞損傷，檢測過氧化氫對心肌細(xì)胞凋亡的影響，檢測FOXO1在蛋白、MRNA以及磷酸化水平的變化。以探討FOXO1對于心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用。2利用轉(zhuǎn)染技術(shù)使FOXO1沉默，用不同濃度FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，檢測FOXO1MRNA的含量、細(xì)胞凋亡比例。在200UM過氧化氫培養(yǎng)后，用不同濃度FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，檢測CASPASE3含量、PARP含量、CASPASE3活性、自噬囊泡的形成以及及LC3Ⅱ與LC3Ⅰ的比值，以探討FOXO1與過氧化氫培養(yǎng)下心肌細(xì)胞凋亡和自噬的相關(guān)機(jī)制。方法1細(xì)胞系處理方法培養(yǎng)人類心肌細(xì)胞系H9C2，不同濃度過氧化氫培養(yǎng)細(xì)胞來模擬細(xì)胞受到氧化自由基損傷的模型，將培養(yǎng)好的H9C2細(xì)胞放置于0UM、50UM、100UM、200UMH2O2混合氣體中培養(yǎng)24到48小時。2過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測細(xì)胞凋亡H9C2心肌細(xì)胞用0UM和200UM過氧化氫分別培養(yǎng)24小時和48小時后，用ANNEXINⅤFITC和碘化丙啶對H9C2心肌細(xì)胞進(jìn)行染色，然后用流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測，細(xì)胞凋亡的結(jié)果用凋亡細(xì)胞比全部細(xì)胞進(jìn)行表示。3過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測CASPASE3和PARP蛋白以及CASPASE3活性表達(dá)。0UM和200UM過氧化氫分別培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞24小時和48小時，通過蛋白免疫印跡電泳法檢測CASPASE3和PARP蛋白表達(dá)，通過熒光電泳法檢測H9C2心肌細(xì)胞的CASPASE3活性的表達(dá)，4過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測FOXO1蛋白水平和FOXO1磷酸化表達(dá)0UM、50UM、100UM、200UM過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后，用蛋白免疫印跡試驗檢測FOXOⅠ蛋白水平和FOXO1磷酸化表達(dá)。5過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測FOXO1MRNA水平表達(dá)0UM、50UM、100UM、200UM過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后，用實時反轉(zhuǎn)錄PCR檢測FOXO1MRNA水平表達(dá)。6用FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞，使FOXO1沉默通過轉(zhuǎn)染方法沉默F(xiàn)OXO1，用濃度為25NM、50NM的FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞，未用FOXO1SPECIFICSIRNA只有脂質(zhì)體處理的作為對照組。7FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，檢測FOXO1MRNA水平表達(dá)用25NM、50NMFOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，用實時反轉(zhuǎn)錄PCR檢測FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照組FOXO1MRNA水平。8FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，檢測細(xì)胞凋亡用25NM、50NMMFOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后，用ANNEXINⅤFITC和碘化丙啶對H9C2心肌細(xì)胞進(jìn)行染色，然后用流式細(xì)胞分析儀檢測FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞組和空白對照組的細(xì)胞凋亡。9200UM過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達(dá)。200UM過氧化氫分別培養(yǎng)25NM、50NMFOXO1SPECIFICSIRNA心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，通過熒光電泳法檢測CASPASE3活性的表達(dá)，通過蛋白免疫印跡電泳法檢測CASPASE3和PARP蛋白表達(dá)。10過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測細(xì)胞自噬統(tǒng)計學(xué)處理全部數(shù)據(jù)采用SPSS130軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，多組間不同組別間差異比較采用方差分析，有統(tǒng)計學(xué)意義后進(jìn)行兩兩比較，采用LSD進(jìn)行多重兩兩比較，兩組間比較采用雙尾T檢驗，顯著性水平設(shè)定為005，當(dāng)P值小于005，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測細(xì)胞凋亡隨著過氧化氫培養(yǎng)濃度的增加、培養(yǎng)時間的延長，細(xì)胞凋亡增加。23過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測CASPASE3和PARP蛋白以及CASPASE3活性表達(dá)。隨著過氧化氫培養(yǎng)濃度的增加、培養(yǎng)時間的延長，CASPASE3和PARP蛋白以及CASPASE3活性表達(dá)增加。3過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞后檢測FOXO1蛋白水平、FOXO1MRNA水平和FOXO1磷酸化表達(dá)用0UM、50UM、100UM、200UM過氧化氫培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，F(xiàn)OXO1蛋白水平、FOXO1MRNA水平組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與以上規(guī)律相反，H9C2心肌細(xì)胞在用0UM、50UM、100UM、200UM濃度的過氧化氫培養(yǎng)下，隨著過氧化氫濃度的增高，F(xiàn)OXO1的磷酸化水平逐步升高，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，磷酸化程度與過氧化氫濃度呈計量依賴性。4FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞組和空白對照細(xì)胞組FOXO1MRNA的表達(dá)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞組FOXO1MRNA的表達(dá)低于空白對照細(xì)胞組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001，隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度的增大，F(xiàn)OXO1MRNA的含量逐漸減小，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001。5FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞凋亡檢測FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞組細(xì)胞凋亡高于空白對照組間，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度的增大，細(xì)胞凋亡升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。6200UM過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達(dá)。200UM的過氧化氫培養(yǎng)下的FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞的CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達(dá)均高于空白對照組P＜005。隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度增高而增高，CASPASE3活性以及CASPASE3和PARP蛋白表達(dá)增高，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。7過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞和空白對照細(xì)胞后，檢測細(xì)胞自噬200UM過氧化氫可以明顯誘導(dǎo)對照組細(xì)胞自噬囊泡的形成（綠色熒光蛋白陰性點），200UM過氧化氫培養(yǎng)下，50NMFOXO1SPECIFICSIRNA細(xì)胞組自噬囊泡低于對照組（綠色熒光蛋白陰性點），200UM過氧化氫培養(yǎng)下，50NMFOXO1SPECIFICSIRNA細(xì)胞組的GFPLC3、LC3ⅡLC3Ⅰ低于對照組P＜005。即FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞組降低過氧化氫誘導(dǎo)自噬P＜001結(jié)論1過氧化氫損傷心肌細(xì)胞造模成功，并將心肌細(xì)胞FOXO1沉默（用FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞）。2隨著過氧化氫濃度的升高和培養(yǎng)時間的延長，心肌細(xì)胞凋亡、CASPASE3、PARP蛋白水平及CASPASE3活性升高，呈劑量依賴性。提示過氧化氫誘導(dǎo)凋亡。3過氧化氫培養(yǎng)心肌細(xì)胞，F(xiàn)OXO1在蛋白和MRNA的水平未發(fā)生變化，隨著過氧化氫的濃度增高，F(xiàn)OXO1磷酸化水平升高，提示過氧化氫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡可能是通過促FOXO1磷酸化，進(jìn)而抑制FOXO1對心肌細(xì)胞的修復(fù)作用。4在200UM過氧化氫培養(yǎng)后，隨著FOXO1SPECIFICSIRNA轉(zhuǎn)染濃度增高，細(xì)胞凋亡比例、CASPASE3含量、PARP含量以及CASPASE3活性增高。提示FOXO1沉默促進(jìn)過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡，進(jìn)而說明FOXO1抑制過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。5200UM過氧化氫誘導(dǎo)對照組細(xì)胞自噬囊泡的形成，過氧化氫培養(yǎng)FOXO1SPECIFICSIRNAH9C2轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，自噬囊泡減少、LC3ⅡLC3Ⅰ降低。提示過氧化氫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞自噬，F(xiàn)OXO1沉默降低過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬，進(jìn)而說明FOXO1增強(qiáng)過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬。

簡介：論文題目厶漚性盛佳腸挫經(jīng)王細(xì)胞佳處量差的實驗研究塑生物堂掛選扭拯答辯委員會主席廑達(dá)星數(shù)援浙江太堂醫(yī)堂院阻屆‘』L童醫(yī)院答辯委員會成員陳肖鳴教授溫劃醫(yī)科太堂附屬箍二醫(yī)院王夏鉉熬援濕劃醫(yī)型太堂基礎(chǔ)匡堂院溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文英文縮略詞表英文縮寫英文名稱中文名稱ENSCSENTERICNEURALSTEMCELLSBRDU5BROMO2DEOXYURIDINEGFAPGLIALFIBRILLARYACIDICPROTEINVUJ一1NCSCSNEURONALCLASSIII13TUBULINNEURALCRESTSTEMCELLSENSENTERICNERVOUSSYSTEMCCK8CELLCOUNTINGKIT8RETREARRANGEDDURINGTRANSFECTIONGDNFGLIALCELLLINEDERIVEDNEUROTROPHICFACTORSOX10SRYBOXCONTAININGGENE10EDNRBENDOTHELINRECEPTORTYPEBET3ENDOTHELIN一3ACHEACETYLCHOLINESTERASENADPHDNOSNICOTINAMIDEADENINEDINUCLEOTIDEPHOSPHATEDIAPHORASENITRICOXIDESYNTHASEPBSPHOSPHATEBUFFEREDSOLUTIONIODINTEGRALOPTICALDENSITYDMEMDULBECCO’SMODIFIEDEAGLEMEDIUM腸神經(jīng)干細(xì)胞5一溴脫氧尿嘧啶核苷膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白神經(jīng)元特異性13III微管蛋白神經(jīng)嵴干細(xì)胞腸神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞增殖檢測盒膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子酪氨酸激酶受體膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子STY盒家族基因10內(nèi)皮素受體B內(nèi)皮素3乙酰膽堿酯酶還原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黃遞酶一氧化氮合酶磷酸鹽緩沖液積分光密度達(dá)爾伯克氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。一虢訓(xùn)P羲徘驊嚳莖I紫河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名憫辛導(dǎo)師簽章繆1YI巳弘導(dǎo)師簽章礦屺廂，少心年廠月27日中文摘要SIRNA沉默XIAP基因?qū)侨饬鯩G63細(xì)胞生物學(xué)特性的影響摘要目的骨肉瘤是一種臨床常見的好發(fā)于青少年的成骨性惡性腫瘤，它惡性程度高，預(yù)后比較差。隨著化學(xué)療法、手術(shù)技術(shù)、骨重建等方法的進(jìn)展，5年總生存率明顯提高。阿霉素ADRIAMYCIN，ADM、順鉑DIAMMINEDICHLOROPLANTINUM，DDP是抗骨肉瘤的最有效藥物，但腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥性是影響化療療效的主要原因。許多化療藥物通過誘導(dǎo)凋亡抗腫瘤生長。XIAP是凋亡調(diào)節(jié)因子家族中對凋亡調(diào)節(jié)作用最強(qiáng)的分子之一，同時是唯的CASPASES抑制劑。研究顯示它在多種惡性腫瘤中上調(diào)表達(dá)，并與腫瘤化療耐藥及預(yù)后差緊密相關(guān)。RNAI是近年來發(fā)展起來的新技術(shù)，SIRNA已經(jīng)成為繼反義核酸、核酶之后基因治療的又一新武器。為此，我們合成特異性干擾XIAP基因的SIRNA，并在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG63細(xì)胞，觀察其對骨肉瘤細(xì)胞生長抑制以及細(xì)胞侵襲性的影響，以及對骨肉瘤MG63細(xì)胞ADM藥物敏感性及耐藥性的影響，從而為新的骨肉瘤的治療方法提供實驗依據(jù)。方法1根據(jù)XIAP基因已知序列化學(xué)合成1條含2123個堿基的SIRNAXIAPSIRNA及陰性對照SIRNANEG；用化學(xué)合成的XIAPSIRNA轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG63細(xì)胞，通過RTPCR方法和流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后MG63細(xì)胞XIAPMRNA和蛋白水平的表達(dá)情況，進(jìn)一步觀察轉(zhuǎn)染前后骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖抑制的改變，流式細(xì)胞術(shù)和MTT法進(jìn)一步檢測轉(zhuǎn)染前后MG63細(xì)胞的凋亡及ADM對轉(zhuǎn)染前后骨肉瘤MG63細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50，觀察化學(xué)合成的特異性XIAPSIRNA對骨肉瘤細(xì)胞增殖抑制的影響以及對骨肉瘤MG63細(xì)胞ADM藥物敏感性的影響。2統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS130進(jìn)行分析處理，采用T檢驗和單因素方差分析，如多組間兩兩比較采用Q檢驗，以P005認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果