簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)R782．1密級(jí)公開(kāi)微納形貌鉭及鉭／羥基磷灰石涂層對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)活性的影響EFFECTSOFTANTALUMANDTANTALUM／HYDROXYAPATITECOATINGWITHMICRO／NANOSTRUCTUREONTHEBIOACTIVITYOFBONEMESENCHYMALSTEMCELL作者姓名路榮建學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)導(dǎo)師劉洪臣教授答辯委員會(huì)主席夕Ⅵ∥～論文答辯日期二。一五年五月二十八日基金資助國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃863計(jì)劃編號(hào)2015AA033502院校地址北京市復(fù)興路28號(hào)郵政編碼100853豫阢辦玩目錄縮略詞表???????????????????????????1中文摘要???????????????????????????3英文摘要???????????????????????????7前言???????????????????????????13正文???????????????????????????15實(shí)驗(yàn)一純鈦表面微納形貌鉭涂層的制備及其表面特性研究?????151．材料和方法???????1OOOGOO????????????152．結(jié)果????????????????????????183．討論????????????????????????21實(shí)驗(yàn)二微納形貌鉭涂層對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)活性的影響???231．材料和方法????????????????????????232．結(jié)果????????????????????????313．討論????????????????????????40實(shí)驗(yàn)三純鈦表面微納形貌鉭／羥基磷灰石復(fù)合涂層的制備及其表面特性研究???????????????????????431．材料和方法????????????????????????432．結(jié)果????????????????????????453．討論????????????????????????50實(shí)驗(yàn)四微納形貌鉭／羥基磷灰石復(fù)合涂層對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)活性影響??????????????????????521．材料和方法????????????????????????522．結(jié)果????????????????????????583．討論????????????????????????65全文總結(jié)???????????????????????????67參考文獻(xiàn)???????????????????????????68文獻(xiàn)綜述??????????????????????????77個(gè)人簡(jiǎn)歷及研究成果??????????????????????85致謝????????????????????????????86

簡(jiǎn)介：造血干細(xì)胞（HEMATOPOIETICSTEMCELLS）是一類(lèi)異質(zhì)性的、具有自我更新和多向血細(xì)胞分化潛能的成體干細(xì)胞。根據(jù)來(lái)源不同，其可分類(lèi)為骨髓造血干細(xì)胞，臍血造血干細(xì)胞胎肝造血干細(xì)胞和外周血造血干細(xì)胞。因外周血造血干細(xì)胞（PBHSC）具有采集方法簡(jiǎn)便，短期內(nèi)可重復(fù)采集，受者輸注后造血、免疫功能重建快，且植入率高等優(yōu)點(diǎn)，在移植和細(xì)胞免疫治療方面發(fā)揮日益重要的作用。微泡MV是細(xì)胞分泌的亞微米雙層膜結(jié)構(gòu)，包括從內(nèi)涵體分泌的外泌體，以及從絕大多數(shù)細(xì)胞膜表面分泌的微粒。其含有母體細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、MRNA以及MICRNA等成分，通過(guò)與其它細(xì)胞融合，將其內(nèi)容物釋放到靶細(xì)胞，影響其功能，從而在不同細(xì)胞間信息傳遞過(guò)程中發(fā)揮重要作用。微泡可由多種細(xì)胞分泌，并廣泛分布于血漿、唾液、乳汁、汗液等各種體液中。不僅正常細(xì)胞可分泌微泡，腫瘤細(xì)胞也可以分泌微泡在腫瘤病人的體液中可以檢測(cè)到微泡。因此在生理和病理狀態(tài)下不同細(xì)胞分泌的微泡是一個(gè)混合的群體。微泡隨著細(xì)胞的來(lái)源、數(shù)量、大小和抗原成分的變化而不同。外周血造血干細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)造血恢復(fù)等作用。因?yàn)槲⑴輲в心阁w細(xì)胞的信息，所以我們推斷外周干來(lái)源的微泡可能也具有同樣的功能。而且研究表明，微泡沒(méi)有或者具有很小的免疫原性，如果其具有一定的功能，可具有廣泛的臨床應(yīng)用。但是，目前對(duì)外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡研究甚少。本研究旨在對(duì)外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡進(jìn)行生物學(xué)特性探究，尤其對(duì)其免疫調(diào)節(jié)和促造血功能加以探索。研究目的提取并鑒定正常人外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡，并研究其生物學(xué)特性包括探究正常人外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡的免疫調(diào)節(jié)功能及對(duì)造血集落形成的影響。研究?jī)?nèi)容將正常人外周血造血干細(xì)胞提取并培養(yǎng)，從培養(yǎng)上清中提取出外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡并鑒定，研究其生物學(xué)特性探究正常人外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞是否具有免疫調(diào)節(jié)功能及正常人外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡是否對(duì)造血集落形成有影響研究方法（1）利用密度梯度離心法分離正常人動(dòng)員后外周血造血干細(xì)胞，收集培養(yǎng)第48小時(shí)上清液，超速離心法分離提取微泡（2）通過(guò)電子顯微鏡觀察微泡形態(tài)；采用BICINCHONINICACIDBCA法標(biāo)定微泡數(shù)量；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物；（3）將微泡與正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMNC）共培養(yǎng)12H后，通過(guò)共聚焦掃描電鏡觀察微泡與單個(gè)核細(xì)胞的作用方式；共培養(yǎng)48H后采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法ELISA）法檢測(cè)上清中IL2IL6IL8IL10IFNΓ及TNFΑ的分泌量；共培養(yǎng)48H后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群及T細(xì)胞激活變化；共培養(yǎng)48H后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同亞群細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子染色情況；（4）采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基檢測(cè)微泡及微泡與單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后上清液對(duì)外周血造血干細(xì)胞集落形成的影響。研究結(jié)果通過(guò)密度梯度離心法可提取出動(dòng)員后外周血造血干細(xì)胞。利用超速離心法可成功提取出外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡。透射電子顯微鏡觀察分離得到的微泡為卵圓形膜性小囊泡。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)得微泡高表達(dá)其特異性標(biāo)志CD638586％并帶有其母體細(xì)胞標(biāo)志如干細(xì)胞標(biāo)志CD343352，T細(xì)胞標(biāo)志CD34398、CD45RA2354、CD45RO683，NK細(xì)胞標(biāo)志CD563232等。共聚焦掃描電鏡顯示微泡可以與外周血單個(gè)核細(xì)胞相融合并促進(jìn)其分泌IL6IL8，IL10與TNFΑ細(xì)胞因子。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示T細(xì)胞亞群及T細(xì)胞激活無(wú)明顯改變。胞內(nèi)因子染色結(jié)果表明CD4CD8CD11C細(xì)胞內(nèi)因子無(wú)明顯改變。集落培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明微泡及微泡與單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后上清液很可能具有促進(jìn)造血集落形成的作用。研究結(jié)論外周血造血干細(xì)胞來(lái)源的微泡具有免疫調(diào)節(jié)及可能促進(jìn)造血集落形成的作用。

簡(jiǎn)介：冠狀動(dòng)脈疾?。–AD）是目前嚴(yán)重威脅人類(lèi)身體的重大疾病之一，在病變部位置入藥物洗脫支架（DESS）是迄今最好的治療方法，可減少血管再狹窄的幾率，但再狹窄率（ISR）并沒(méi)有完全消除，因此，再狹窄的預(yù)防和治療成為心血管疾病研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。如何實(shí)現(xiàn)快速內(nèi)皮化和抑制平滑肌過(guò)度增生是目前預(yù)防再狹窄面臨的兩大挑戰(zhàn)。本文通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探究新一代抗腫瘤藥物托瑞米芬（T）對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECS）和血管平滑肌細(xì)胞（VSMCS）的細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其作用機(jī)制。本文主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下①T影響內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為。研究表明T能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖且隨著T濃度增大其抑制作用也逐漸加強(qiáng)；顯著促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞的早期凋亡，晚期凋亡及細(xì)胞壞死；抑制內(nèi)皮細(xì)胞的分裂并將細(xì)胞阻滯在G0G1期；延遲了內(nèi)皮細(xì)胞的粘附時(shí)間卻并未影響其粘附總數(shù)；顯著抑制細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和遷移行為；≥75ΜM的T可以明顯地改變細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。②T影響內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)制。免疫熒光和免疫印記雙重驗(yàn)證的方法檢驗(yàn)PCNA、P53及RHOROCK信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量。研究結(jié)果表明T濃度愈高，PCNA的表達(dá)量明顯降低，暗示T抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用就愈明顯；而P53的表達(dá)隨T濃度的增加而增加，說(shuō)明T是通過(guò)促進(jìn)P53的表達(dá)而加速細(xì)胞的凋亡；T顯著抑制了整合素INTEGRINΒ1及RHO的表達(dá)，進(jìn)而降低了ROCK信號(hào)通路中下游因子MLC和PMLC的表達(dá)水平。說(shuō)明T可能是通過(guò)INTEGRINΒ1RHOROCKPMLC信號(hào)通路抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移行為。③T影響平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為。研究表明該藥物也能抑制平滑肌細(xì)胞增殖且隨著濃度增大抑制作用逐漸增強(qiáng)；顯著促進(jìn)了平滑肌細(xì)胞的早期凋亡，晚期凋亡及細(xì)胞壞死；抑制平滑肌細(xì)胞的分裂并將細(xì)胞阻滯在G0G1期；延遲了平滑肌細(xì)胞的粘附時(shí)間并影響其粘附總數(shù)；顯著抑制平滑肌細(xì)胞群體的運(yùn)動(dòng)和遷移行為；高濃度的T可以明顯改變細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。④T影響平滑肌細(xì)胞的機(jī)制。采用免疫熒光和免疫印記雙重驗(yàn)證的方法分別對(duì)PCNA，P53及RHOROCK信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量進(jìn)行分析，并運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)T影響平滑肌細(xì)胞的調(diào)亡行為作進(jìn)一步的探討。結(jié)果表明隨著T濃度增高，PCNA表達(dá)量明顯降低，抑制平滑肌細(xì)胞增殖的作用就愈明顯；而P53的表達(dá)隨T濃度的增加而增加，說(shuō)明T是通過(guò)促進(jìn)P53的表達(dá)而加速細(xì)胞的凋亡；高濃度T促進(jìn)了平滑肌線粒體膜電位下降進(jìn)而使釋放的活性氧水平升高，激活CASPASE3及9，最終促進(jìn)了平滑肌細(xì)胞的凋亡。遷移機(jī)制的研究結(jié)果表明T顯著抑制了整合素INTEGRINΒ1及RHO的表達(dá)，進(jìn)而降低了ROCK信號(hào)通路中下游因子MLC和PMLC的表達(dá)水平。說(shuō)明T可能是通過(guò)INTEGRINΒ1RHOROCKPMLC信號(hào)通路抑制細(xì)胞的遷移行為。

簡(jiǎn)介：不同剛度三維脫細(xì)胞支架的制備及其對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文（學(xué)術(shù)學(xué)位）學(xué)生姓名李貴指導(dǎo)教師楊力教授呂永鋼教授專業(yè)生物學(xué)學(xué)科門(mén)類(lèi)理學(xué)重慶大學(xué)生物工程學(xué)院二O一七年四月重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要I摘要目的本文擬通過(guò)制備不同剛度的三維THREEDIMENSION3D脫細(xì)胞基質(zhì)DECELLULARIZEDEXTRACELLULARMATRIXDECM離體模擬人乳腺腫瘤組織微環(huán)境，探究基質(zhì)剛度對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞MDAMB231細(xì)胞活力和細(xì)胞浸潤(rùn)等生物學(xué)行為的影響。方法構(gòu)建干擾和過(guò)表達(dá)賴氨酰氧化酶LYSYLOXIDASELOX基因的慢病毒載體，并分別轉(zhuǎn)染乳腺腫瘤細(xì)胞MDAMB231細(xì)胞，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)QUANTITATIVEREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTIONQPCR和免疫印跡WESTERNBLOT檢測(cè)LOXMRNA與蛋白的表達(dá)。將表達(dá)不同量LOX的MDAMB231細(xì)胞注射裸鼠腋窩皮下，成瘤后經(jīng)脫細(xì)胞方法得到3DDECM支架，并使用材料試驗(yàn)機(jī)測(cè)得其彈性模量。使用掃描電子顯微鏡觀察DECM顯微結(jié)構(gòu)。通過(guò)石蠟切片及組織學(xué)染色進(jìn)一步檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)EXTRACELLULARMATRIXECM重要組分。在不同剛度DECM進(jìn)行再細(xì)胞化，利用LIVEDEAD染色及MTS檢測(cè)1、4、7與10天的細(xì)胞活力，通過(guò)蘇木素伊紅HEMATOXYLINEOSINHE染色檢測(cè)再細(xì)胞化7天后細(xì)胞浸潤(rùn)。最后通過(guò)QPCR檢測(cè)再細(xì)胞7天后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化EPITHELIALMESENCHYMALTRANSITIONEMT間質(zhì)標(biāo)志物波形蛋白VIMENTIN和轉(zhuǎn)錄因子SNAIL1以及I型膠原COLLAGENI、纖連蛋白FIBRONECTIN與LOXMRNA的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)脫細(xì)胞法形成的不同剛度3DDECM完好保存了ECM組分與結(jié)構(gòu)，再細(xì)胞化實(shí)驗(yàn)表明這種不同剛度的3DDECM對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞MDAMB231細(xì)胞的生物學(xué)行為具有重要影響。①Q(mào)PCR與WESTERNBLOT結(jié)果表明轉(zhuǎn)染干擾LOX慢病毒載體的MDAMB231細(xì)胞中LOX基因與蛋白的表達(dá)被顯著抑制，而過(guò)表達(dá)組中LOX表達(dá)量明顯提升。②組織學(xué)染色結(jié)果表明各組DECM中細(xì)胞被完全脫去，而且完整保持了ECM結(jié)構(gòu)及膠原、糖胺聚糖等主要組分。③掃描電子顯微鏡及力學(xué)性能測(cè)定結(jié)果表明對(duì)照組DECM孔隙率為4847527，剛度為324039KPA；低剛度組的DECM孔隙率為增加為6812574，剛度減小為257026KPA；相反地，高剛度組的DECM孔隙率減小為3268430，剛度增加為491031KPA。④再細(xì)胞化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MDAMB231細(xì)胞可浸潤(rùn)至不同剛度的支架內(nèi)部并且生長(zhǎng)狀態(tài)良好。⑤QPCR結(jié)果表明高剛度組脫細(xì)胞基質(zhì)促進(jìn)MDAMB231LOXMRNA的表達(dá)；低剛度組脫細(xì)胞基質(zhì)促進(jìn)VIMENTINMRNA的表達(dá)，抑制FIBRONECTINMRNA的表達(dá)。

簡(jiǎn)介：山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文用于細(xì)胞內(nèi)具有重要生物學(xué)意義的活性小分子物種的高選擇性識(shí)別的新型熒光探針的合成研究及其在生物體系中的應(yīng)用姓名于法標(biāo)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)分析化學(xué)指導(dǎo)教師唐波20090405近紅外熒光活性物種檢測(cè)成的機(jī)理常見(jiàn)的有光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移、電荷轉(zhuǎn)移激發(fā)態(tài)、單體一激基締合、熒光共振能量轉(zhuǎn)移、電子能量轉(zhuǎn)移。為了實(shí)現(xiàn)高選擇性、高靈敏度快速識(shí)別和檢測(cè)生物體內(nèi)的礦、C1’和FE2，并使之達(dá)到可視化的目的，本論文開(kāi)展了以下兩方面的工作一設(shè)計(jì)合成了一種近紅外中性PH值熒光探針。探針結(jié)構(gòu)采用“熒光團(tuán)一橋體一受體’’設(shè)計(jì)模式，通過(guò)光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移機(jī)理來(lái)操控?zé)晒鈴?qiáng)度的增減。在結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)策略基礎(chǔ)上，我們選擇了具備有高吸光系數(shù)的七甲川花菁CY染料作為熒光團(tuán)，4’一芐胺基2，2’67，2_三聯(lián)吡啶TPY為質(zhì)子受體。通過(guò)PH滴定實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)此探針可用于監(jiān)測(cè)生理PH值微小的波動(dòng)。經(jīng)測(cè)定，探針的P‰約為710。在PH值670790范圍內(nèi)，熒光強(qiáng)度對(duì)H濃度變化有強(qiáng)的依賴性和迅速響應(yīng)靈敏性，并且在此范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度和PH值之間有著良好的線性關(guān)系。此探針可以在生化體系中有效地避開(kāi)生物自發(fā)熒光和生物內(nèi)源性物種的干擾。同時(shí)探針也展現(xiàn)出高靈敏性、良好的光穩(wěn)定性和優(yōu)異的胞膜穿透性等優(yōu)點(diǎn)。本文成功地實(shí)現(xiàn)了對(duì)HEPG2細(xì)胞和HL7702細(xì)胞內(nèi)H原位監(jiān)測(cè)成像。二設(shè)計(jì)合成了一種連有三聯(lián)毗啶基團(tuán)的磺酸花菁結(jié)構(gòu)的熒光分子探針用于選擇性檢測(cè)生物體內(nèi)的FE2和C1。。探針的工作原理是基于探針金屬離子陰離子絡(luò)合配位和重原子的三重態(tài)熒光淬滅效應(yīng)。探針本身有強(qiáng)的熒光，在氯離子存在下與FE2絡(luò)合后，導(dǎo)致磺酸花菁的熒光猝滅，而且熒光強(qiáng)度的猝滅程度分別與FE2的濃度和CL。的濃度成一定的比例關(guān)系。探針在與FE2和CL’反應(yīng)前后的顏色由藍(lán)色變?yōu)樽仙?，?shí)驗(yàn)結(jié)果顯示探針對(duì)FE2和CL。有高度的選擇性。據(jù)此，我們分別固定了FE2和CL‘濃度，成功地實(shí)現(xiàn)了對(duì)FE2和C1。的分別檢測(cè)，探針的熒光強(qiáng)度變化分別與亞鐵離子和氯離子的濃度呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。探針對(duì)介質(zhì)的酸堿度不敏感，熒光性質(zhì)穩(wěn)定。該探針成功用于血漿和血清中FE2和CL’的選擇性檢測(cè)。選擇性實(shí)驗(yàn)表明該探針是檢測(cè)生物體內(nèi)FE2和CL’的理想近紅外熒光探針。關(guān)鍵詞氫離子氯離子亞鐵離子近紅外熒光探針共聚焦顯微成像比色法II

簡(jiǎn)介：本研究成功建立了雞胚原始生殖細(xì)胞PRIMDIALGERMCELLS，PGCS的體外培養(yǎng)體系，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。探討了雞胚PGCS減數(shù)分裂過(guò)程及精子發(fā)生相關(guān)基因表達(dá)量的變化。分離培養(yǎng)8W綿羊的羊水干細(xì)胞AMNIOTICFLUIDSTEMCELLS，AFSCS并鑒定其生物學(xué)特性，為AFSCS應(yīng)用于組織工程學(xué)及細(xì)胞移植治療提供理論依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)1使用在孵化箱中孵化55D的雞胚進(jìn)行PGCS的分離。在體視顯微鏡下小心剝離出雞胚兩側(cè)性腺，剪碎后使用0125％胰蛋白酶002％EDTA吹打消化，然后接種在培養(yǎng)皿中使用HDMEM培養(yǎng)，并添加10％胎牛血清FETALBOVINESERUM，F(xiàn)BS，1MM丙酮酸鈉，1％GLUTAMAX，5NGMLSCF，5NGMLLIF，10NGMLBFGF，10NGMLIGF等因子促進(jìn)PGCS的增殖及抑制分化。培養(yǎng)24H后，可在顯微鏡下觀察到PGCS克隆團(tuán)的出現(xiàn)，此時(shí)的飼養(yǎng)層為雞胚性腺基質(zhì)細(xì)胞。48H后顯微鏡下觀察到PGCS克隆團(tuán)數(shù)量增多，體積變大，呈典型的鋪路石樣。繼代培養(yǎng)時(shí)使用雞胚成纖維細(xì)胞CHICKENEMBRYOFIBROBLAST，CEF飼養(yǎng)層。無(wú)論是CEF飼養(yǎng)層還是雞胚性腺基質(zhì)細(xì)胞都能夠PGCS保持穩(wěn)定的未分化狀態(tài)。在本研究中PGCS可在體外連續(xù)培養(yǎng)2個(gè)月，經(jīng)AKP和PAS染色鑒定為陽(yáng)性形態(tài)上PGCS較一般細(xì)胞大，折光性強(qiáng)RTPCR、免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定IMMUNOCYTOCHEMISTRY和流式細(xì)胞分析FLOWCYTOMETRYFCM結(jié)果顯示，PGCS對(duì)生殖細(xì)胞及胚胎干細(xì)胞EMBRYONICSTEMCELL，ESCS的特異性標(biāo)志物呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。2雞胚PGCS在骨形態(tài)發(fā)生蛋白BONEMPHOGEICPROTEINS，BMPS、激活素AACTIVINA和維甲酸RETINOICACID，RA的作用下可啟動(dòng)減數(shù)分裂過(guò)程，進(jìn)而在BOVINEPITUITARYEXTRACT，BPE、FOLLICLESTIMULATINGHMONE，F(xiàn)SH和睪酮TESTOSTERONE，T的促進(jìn)下誘導(dǎo)生成精子。從QPCR結(jié)果可證明這些激素促進(jìn)了PGCS向精子的分化。3在無(wú)菌狀態(tài)下使用注射器抽取8W綿羊胚胎羊水10ML，并以1500RPM的速度離心15MIN使細(xì)胞富集于離心管底部，最終將細(xì)胞接種至12孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基選擇DMEMF12添加10NGMLBFGF。羊水中含有多種細(xì)胞類(lèi)型，不同類(lèi)型的細(xì)胞形態(tài)也不盡相同。傳代時(shí)選擇長(zhǎng)梭形細(xì)胞占多數(shù)的那一孔進(jìn)行傳代操作。消化條件為025％胰蛋白酶002％EDTA于375℃培養(yǎng)箱中消化1MIN。在經(jīng)過(guò)數(shù)次傳代細(xì)胞純度較高時(shí)，對(duì)AFSCS的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。RTPCR及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示AFSCS既表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物又表達(dá)胚胎干細(xì)胞特異性標(biāo)志物。生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AFSCS的增長(zhǎng)呈現(xiàn)典型的S型。核型分析結(jié)果顯示綿羊AFSCS染色體數(shù)目為2N54，形態(tài)正常未發(fā)生變異。將AFSCS向成脂、成骨、成軟骨三個(gè)方向進(jìn)行誘導(dǎo)，特異性染色結(jié)果及RTPCR檢測(cè)都說(shuō)明成功誘導(dǎo)生成了脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞。表明AFSCS擁有向三個(gè)胚層分化的潛能。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)分類(lèi)號(hào)R78密級(jí)密級(jí)公開(kāi)公開(kāi)研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）模擬微重力效應(yīng)與XRAY輻射對(duì)人MEC1細(xì)胞生物學(xué)的影響論文題目（外文）論文題目（外文）THEBIOLOGICALEFFECTSOFHUMANMEC1CELLSSIMULATEDBYMICROGRAVITYXRAYRADIATION研究生姓名研究生姓名王衛(wèi)平學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)口腔醫(yī)學(xué)口腔修復(fù)學(xué)研究方向研究方向口腔修復(fù)學(xué)學(xué)位級(jí)別學(xué)位級(jí)別碩士校內(nèi)校內(nèi)導(dǎo)師姓名導(dǎo)師姓名、職稱職稱何祥一教授校外導(dǎo)師姓名校外導(dǎo)師姓名、職稱職稱黨秉榮副研究員論文工作論文工作起止年月起止年月2015年10月至2016年12月論文提交日期論文提交日期2017年4月論文答辯日期論文答辯日期2017年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期2017年6月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市I模擬微重力效應(yīng)與XRAY輻射對(duì)人MEC1細(xì)胞生物學(xué)的影響中文摘要中文摘要目的目的通過(guò)研究模擬微重力效應(yīng)與XRAY輻射后黏液表皮樣癌MUCOEPIDERMOIDCARCINOMA，MEC細(xì)胞生物學(xué)的影響，探討模擬微重力效應(yīng)應(yīng)用于在臨床的可行性。方法方法按設(shè)定條件的不同進(jìn)行分組，即空白對(duì)照組（C），XRAY輻射組（X），模擬微重力組（M），模擬微重力XRAY輻射組（XM）。輻照劑量為0，05，1，2，4GY。根據(jù)CCK8法來(lái)觀察XM組與X組中MEC1細(xì)胞相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)的差異來(lái)分析其增殖能力的變化；通過(guò)平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)計(jì)算XM組與X組細(xì)胞形成的克隆數(shù)，并統(tǒng)計(jì)出各自的克隆形成率以此反映MEC1細(xì)胞的生長(zhǎng)活力的差異；利用TRANSWELL細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)根據(jù)MEC1細(xì)胞數(shù)量的變化分析模擬微重力效應(yīng)對(duì)其侵襲力的影響；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)并計(jì)算XM組與X組MEC1細(xì)胞各分期占整個(gè)細(xì)胞周期的比例并以此來(lái)探討其意義。結(jié)果結(jié)果1）XM組MEC1細(xì)胞在24H時(shí)平均OD值分別為0559，0489，0474，0357，0321均小于X組（P005）。2）XM組MEC1細(xì)胞的克隆形成率平均為383，30233，16667，8533，4134均小于X組（P005）。3）XM組MEC1細(xì)胞在24H時(shí)侵襲細(xì)胞數(shù)平均為10267，90，72，55，3933均少于X組（P005）。4）XM組MEC1細(xì)胞在24H時(shí)，G2M期所占的比例分別為258，3003，348，5096，5957與X組相比有明顯阻滯（P005）。結(jié)論結(jié)論模擬微重力效應(yīng)與XRAY輻射對(duì)人MEC1細(xì)胞的增殖及侵襲能力均起到了抑制作用并可增強(qiáng)其放射敏感性，這為研究模擬微重力效應(yīng)應(yīng)用于臨床提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞模擬微重力效應(yīng)，XRAY射線，人MEC1細(xì)胞

簡(jiǎn)介：EFFECTSOFESTROGEN，ANDROGENONTHEBIOLOGICALFUNCTIONOFCHICKENOSTEOCLASTBYZHUJIESUPERVISORPROHOUJIAFAATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSF0RTHEMASTERDEGREEOFTHEAGRONOMYCOMPLETEDINMAY，2009COMMENCENMENTINJUN，2009原創(chuàng)性聲明LLLLLILL／LL／／L／／LLL／LLLIILIIILL／LLIIILIIILLRLFULY1763106本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作、所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者需親筆簽名采斑砷年6月9日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并’向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密口，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密彤請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“4”學(xué)位論文作者需親筆簽名采捷導(dǎo)師需親筆簽，卿占月夕日緲呷年彩月哆日

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)密級(jí)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬白細(xì)胞介素一34PIL34的分子克隆、表達(dá)和生物學(xué)活性驗(yàn)證MOLECULARCLONING，EXPRESSIONANDBIOACTIVITYVERIFICATIONOFPORCINEINTERLEUKIN一34PIL一34研究生胡彝指導(dǎo)教師陳煥春院士指導(dǎo)小組陳煥春院士方六榮教授肖少波副教授江云波副教授專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向動(dòng)物病原分子生物學(xué)和基因工程獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士獲得學(xué)位時(shí)間2010年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二OO年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書(shū)學(xué)能論文否如需保密，解密時(shí)間年月日是否保密獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定與我一同工作的同態(tài)對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說(shuō)明，并表示了謝意。研究生簽名塌斯時(shí)間。。，D年占月，7日學(xué)位論文使用授權(quán)書(shū)本人完全了解“華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存。使用學(xué)位論文的規(guī)定”，印學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電予版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容J‰。注保密學(xué)位論文在解密后適用于本授權(quán)書(shū)學(xué)夠謄名塌畸導(dǎo)師麟膳蝣。簽名日期■DLO年‘月I，日簽名日期≯矽年多月，，日

簡(jiǎn)介：CLONING，EXPRESSION●ANDBIOACTIVITYANALYSISOFGOATINTERLEUKIN一1PANDINTERLEUKIN一6BYLIXUEZHAOSUPERVISEDBYPROFLIXIANGRUIATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEMASTERDEGREEOFAGRONOMYINVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINMAY2010COMMENCEMENTINJUNE2010原創(chuàng)性聲明LIIIIIIIIIIIIIIIIIIIILY1764649本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文巾已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含F(xiàn)T何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者需親筆簽名孿曾移‘紗T年6月F口學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。』甲L款UNLL，在一年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密函。請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“4”學(xué)位論文作者需親筆簽名孿寫(xiě)2否矽年占月T1日導(dǎo)師需親筆簽名沙、暉B月T舊

簡(jiǎn)介：STUDYONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFBOVINEMSCSANDDIFFERENTIATINGINTOCADIOCYTE／NVITROTHESISSUBMITTEDTOQINGDAOAGRICULTURALUNIVERSITYINFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEDEGREEOFMASTEROFAGRONOMYAUTHORGONGYICHAOCOLLEGEOFANIMALSCIENCEANDVERTERINARYMEDICINESUPERVISORPROFDONGYAJUANPROFBAIXUEJINQINGDAOCHINAJUNE，200933牛MSCS的生物特性檢測(cè)174討論21試驗(yàn)二5AZA誘導(dǎo)MSCS分化為心肌細(xì)胞的分子生物學(xué)檢測(cè)241材料和方法2411主要試劑及溶液的配制和染色方法2412試驗(yàn)儀器242試驗(yàn)方法2421牛骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化2522逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR鑒定253結(jié)果一2831誘導(dǎo)后形態(tài)學(xué)變化2832心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化率2833RTPCR反應(yīng)，294討論J32結(jié)論34參考文獻(xiàn)35附錄41附錄A主要試劑一41附錄B試驗(yàn)儀器42附錄C主要溶液配制方法43附錄D細(xì)胞染色液的配制及染色方法JJ44附錄E細(xì)胞冷凍和復(fù)蘇方法46

簡(jiǎn)介：浙江師范大學(xué)碩士學(xué)位論文假高粱（SORGHUMHALEPENSE）及其3個(gè)近緣種細(xì)胞學(xué)和種子生物學(xué)比較姓名李娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)植物學(xué)指導(dǎo)教師郭水良印麗萍20090601及其近緣種的鑒別。綜上所述，基于種子生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)及紫外光譜指標(biāo)，可以提高對(duì)假高粱及其近緣種鑒別的正確率。關(guān)鍵詞假高粱；黑高粱；高粱；蘇丹草；形態(tài)學(xué)；萌發(fā)；核型分析；細(xì)胞學(xué)指標(biāo)；光譜；鑒定

簡(jiǎn)介：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文雪松性別決定的細(xì)胞學(xué)機(jī)理及花粉生物學(xué)特性研究姓名尹海燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)園林植物與觀賞園藝指導(dǎo)教師豐震趙蘭勇20090601雪松性別決定的細(xì)胞學(xué)機(jī)理及花粉生物學(xué)特性研究染色體中僅有一條染色體具有隨體。研究顯示第9對(duì)染色體可能與性別分化有關(guān)。⑥雪松不同性別株的平均臂比，染色體長(zhǎng)度比相差不大，但也有區(qū)別。雪松雄株的平均臂比大于雌株，雌株大于雌雄同株。而染色體長(zhǎng)度比，雄株大于雌株，雌株大于雌雄同株。根據(jù)平均臂比反應(yīng)其原始性，染色體長(zhǎng)度比反應(yīng)其核型的對(duì)稱性，得出雪松不同性別株之間的進(jìn)化性從原始到進(jìn)化雌雄同株一雌株一雄株。2對(duì)雪松雄株、雌雄同株的花粉進(jìn)行生活力及儲(chǔ)藏條件研究。①?gòu)幕ǚ凵盍ι喜荒芸闯鲂詣e差異，即花粉研究不能解決雪松的性別決定機(jī)理。②在撒粉盛期采集的花粉萌發(fā)率要高于未開(kāi)放、剛剛開(kāi)放、及撒粉末期。花粉的采集時(shí)間集中在上午9001400，下午采集也可以。采集是選用密封較好的紙袋。③花粉萌發(fā)的最佳溫度為20℃；最適宜的培養(yǎng)基為培養(yǎng)基II10％蔗糖2％瓊脂O01％硼酸。④雪松花粉的最佳貯藏條件為冷藏、干燥。不同的貯藏條件及貯藏期與花粉生活力有明顯的關(guān)系。隨著貯藏期的延長(zhǎng)生活力主要呈下降趨勢(shì)。在不同的貯藏條件及貯藏期，生活力變化情況不盡相同，以4℃冷藏花粉生活力的下降速度最慢，室內(nèi)黑暗條件下貯藏，花粉生活力下降最快，一個(gè)月左右?guī)缀鯙榱?，室溫自然條件保存的花粉生活力下降次之。冷藏條件下貯藏，3個(gè)月后仍保持較高萌發(fā)率，一年后仍有一定的生活力。綜合花粉生活力研究，影響花粉萌發(fā)率的重要因子為培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基類(lèi)型以及花粉的貯藏條件和貯藏時(shí)期。3雪松球花在樹(shù)體上的分布規(guī)律。研究表明，雪松雄球花在樹(shù)冠不同方向的水平分布上存在差異，南部樹(shù)冠球花分布最多。在垂直分布上也存在差異，主要分布在樹(shù)冠中下部，其中中部分布量最大。雌球花主要分布在樹(shù)冠的中上部。雪松的傳粉機(jī)制主要以風(fēng)作為媒介。4通過(guò)對(duì)泰城成齡雪松進(jìn)行性別比例調(diào)查發(fā)現(xiàn)①泰城成齡雪松多數(shù)分布在校園老校區(qū)、醫(yī)院、政府大院、修筑較早的街道。②泰城雪松雌株2

簡(jiǎn)介：REGULARIONOFDHEAONHEPATICLIPIDMETABOLISMINBROILCHICKENSANDITSCELLULARMOLECULARMECHANISMSINVOLVEDBYXUETANGSUPERVISORPROFZOUSIXIANGADISSERTATIONSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORDOCTORDEGREEOFBASICVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINMARCH2009COMMENCEMENTINJUNE2009原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。淞姍C(jī)一攀聲毒。凈∑只蝴學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密口，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密Z請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“寸，山沁肛眥，L1LJ年年伊伊、承刁＼∥孫陟簽可筆親名需簽／，者筆作親文需淪0位師學(xué)導(dǎo)

簡(jiǎn)介：農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜花粉發(fā)育及細(xì)胞生物學(xué)特性研究STUDIEDONTHEPOLLENDEVELOPMENTCYTOBIOLOGICALACTERISTICSOFCUCUMBERCUCUMISSATIVUSL陳芬芬作物延邊大學(xué)學(xué)校代碼10184分類(lèi)號(hào)分類(lèi)號(hào)密級(jí)UDC學(xué)號(hào)2014050276延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜花粉發(fā)育及細(xì)胞生物學(xué)特性研究STUDIEDONTHEPOLLENDEVELOPMENTCYTOBIOLOGICALACTERISTICSOFCUCUMBERCUCUMISSATIVUSL研究生姓名陳芬芬培養(yǎng)單位延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱金東淳副教授學(xué)科專業(yè)作物研究方向植物生殖生物學(xué)論文提交日期2016年5月24日