簡介：近年來微波已經(jīng)廣泛應用于工業(yè)、醫(yī)學、通信等領域為此人們開展了大量的研究探討其生物學作用眼睛是微波作用于人體的一個重要靶器官微波對眼睛的損傷涉及角膜、晶體、視網(wǎng)膜等它可造成晶狀體混濁視網(wǎng)膜神經(jīng)元變性、壞死以前的研究多集中于晶體的損傷該實驗主要觀察了2450MHZ的微波連續(xù)波輻射對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的損傷作用并首次運用基因芯片技術探討了微波輻射致視網(wǎng)膜色素上皮細胞損傷時的有關細胞應激和凋亡相關基因群轉錄的改變該實驗還觀察了抗氧化劑鋅和谷胱甘肽對微波輻射致視網(wǎng)膜色素上皮細胞損傷的防護效果并運用基因芯片技術探討了抗氧化劑鋅和谷胱甘肽對微波輻射致視網(wǎng)膜色素上皮細胞損傷防護時的有關細胞應激和凋亡相關基因群轉錄的改變?yōu)榱搜芯夸\對微波輻射損傷防護作用的實際應用該實驗首次在動物的整體水平上進行補鋅實驗來防護微波輻射對動物的應激損傷為進一步研究鋅在防護微波輻射損傷中的實際應用提供實驗數(shù)據(jù)和基礎資料

簡介：目的轉化生長因子ΑTGFΑ是由50個氨基酸殘基構成的一類小分子多肽，其廣泛存在于人體多種器官和體液中，研究表明TGFΑ對人體胃腸道功能起著重要的調節(jié)作用，能夠刺激人體胃腸道細胞的生長和分化，對胃腸道粘膜損傷具有修復和保護的功能，并可促進新生兒胃腸道的生長發(fā)育。本課題旨在研究人初乳、常乳及嬰兒配方乳源性及重組人轉化生長因子ΑTGFΑ對人結腸上皮細胞LOVO促增殖作用，以及不同濃度外源性TGFΑ對LOVO細胞RNA和蛋白質含量及細胞遷移能力的影響。方法以人結腸細胞LOVO為研究模型，采用四甲基偶氮唑鹽比色法MTT法檢測人初乳、常乳、嬰兒配方乳粉和重組人TGFΑ濃度分別為01、1、10和100NGML作用人結腸上皮細胞模型24H后細胞增殖率的變化，以及各成分添加TGFΑ抗體作用24H后人結腸上皮細胞模型增殖率的變化。分別添加重組人TGFΑ01、1接近人乳TGFΑ含量最低值、10接近人乳TGFΑ含量最高值、100NGML后，觀察LOVO細胞增殖能力、細胞總RNA、總蛋白質含量以及細胞遷移能力的變化。結論TGFΑ抗體對含有人初乳、常乳和基于牛乳成分的嬰兒配方乳粉以及重組人TGFΑ培養(yǎng)基的中和作用使得它們對人結腸上皮細胞的促增殖作用顯著降低，證明不同源性的TGFΑ都能夠對人體外腸道上皮細胞起到明顯的促增殖作用。外源性TGFΑ同樣能夠促進人結腸上皮細胞RNA含量的增加和蛋白質的合成。并且提高LOVO細胞的遷移能力。

簡介：分類號分類號R73371學校代碼學校代碼10392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼100201學號號200901218福建醫(yī)科大學碩士研究生畢業(yè)論文慢病毒介導的慢病毒介導的BMI1基因沉默對骨髓瘤細胞生物學基因沉默對骨髓瘤細胞生物學特性及硼替佐米敏感性特性及硼替佐米敏感性影響的研究影響的研究STUDYONSILENCEOFBMI1MEDIATEDBYLENTIVIRUSSHRNAONBIOLOGICALACTERSSENSITIVITYTOBTEZOMIBINMULTIPLEMYELOMACELLS學位類型學位類型醫(yī)學碩士所在學院院協(xié)和臨床醫(yī)學院協(xié)和臨床醫(yī)學院研究生生徐珍珍徐珍珍學科、專業(yè)學科、專業(yè)內科學內科學血液血液導師師戰(zhàn)榕戰(zhàn)榕教授教授研究起止日期研究起止日期2010年12月至月至2012年3月答辯日期答辯日期2012年6月6日二〇一二年一二年六月目錄英文略縮詞英文略縮詞2中文摘要中文摘要3英文摘要英文摘要5前言前言7第一部分第一部分BMI1SHRNA慢病毒表達載體的構建及穩(wěn)轉骨髓瘤細胞株的建立慢病毒表達載體的構建及穩(wěn)轉骨髓瘤細胞株的建立引言9材料和方法10結果19討論21結論24第二部分第二部分BMI1基因沉默對基因沉默對骨髓瘤骨髓瘤細胞生物學特性及增強細胞生物學特性及增強骨髓瘤骨髓瘤細胞細胞對硼替佐米敏感性替佐米敏感性的機制機制研究研究引言25材料和方法26結果29討論39結論42全文總結全文總結43參考文獻參考文獻44致謝致謝50綜述綜述BMI1基因在多發(fā)性骨髓瘤中的研究進展基因在多發(fā)性骨髓瘤中的研究進展51

簡介：碩士研究生學位論文汕頭大學醫(yī)學院臨床碩士學位論文汕頭大學醫(yī)學院臨床碩士學位論文題目題目長鏈非編碼RNAMALAT1、MEG3在舌鱗癌中的表達及生物學意義英文題目英文題目EXPRESSIONOFLONGNONCODINGRNAMALAT1、MEG3INTONGUESQUAMOUSCELLCARCINOMAITSBIOLOGICALSIGNIFICANCES姓名張珊珊學號51220025所在學院醫(yī)學院導師姓名楊宏宇專業(yè)口腔頜面外科入學日期2012年9月答辯日期2015年5月汕頭大學醫(yī)學院2012級碩士研究生學位論文I學位論文原創(chuàng)性聲明本論文是我個人在導師指導下進行的工作研究及取得的研究成果。論文中除了特別加以標注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機構已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在論文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律責任由本人承擔。作者簽名日期年月日學位論文使用授權聲明本人授權汕頭大學保存本學位論文的電子和紙質文檔，允許論文被查閱和借閱；學?？蓪⒈緦W位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其它復制手段保存和匯編論文；學?？梢韵驀矣嘘P部門或機構送交論文并授權其保存、借閱或上網(wǎng)公布本學位論文的全部或部分內容。對于保密的論文，按照保密的有關規(guī)定和程序處理。作者簽名導師簽名日期年月日日期年月日

簡介：河北醫(yī)科大學博士學位論文實驗性脊髓空洞前狀態(tài)形成機制的分子生物學研究姓名李建峰申請學位級別博士專業(yè)外科學指導教師張慶俊20050401中文摘要空洞形成前期，對實驗性家兔脊髓空洞前狀態(tài)的血一脊髓屏障結構和功能變化進行研究。實驗結果1術后動物神經(jīng)功能改變按改良的TARLOV評分法對動物進行行為學觀察，KAOLIN組動物于術后第7天出現(xiàn)明顯神經(jīng)功能障礙25土036，并隨時間的延長逐漸加重，與對照組和假手術組對比有顯著差異P005。同時SCEP神經(jīng)電生理測定結果顯示KAOLIN組動物于術后第3天即出現(xiàn)潛伏期延長422士012MS，波幅降低，并隨時間延長逐漸加重，與對照組和假手術組對比有顯著差異P00502脊髓含水量測定結果顯示，KAOLIN組動物于術后第1天脊髓含水量6835士070較對照組即有明顯增加，第7天達到高峰7292士08621天時稍有緩解7003士077，但仍高于對照組P005F檢驗。3EVANSBLUE法測定脊髓組織中的EB含量，與對照組相比，KAOLIN組動物于術后第3天脊髓EB含量開始明顯增加279T042PGML第7天達到高峰353士045RGML，并持續(xù)到21天336士027LIGMLP005，F(xiàn)檢驗。4脊髓空洞前狀態(tài)中上頸髓病理變化，生理鹽水組和假手術組動物脊髓神經(jīng)元輪廓正常，核及核仁清楚，胞漿內尼氏體分布均勻，神經(jīng)元、神經(jīng)膠質細胞、血管周圍間隙正常。KAOLIN組動物于術后第3天出現(xiàn)細胞、血管周圍間隙增寬，表現(xiàn)為輕度水腫第7天、14天水腫程度加重，核膜、核仁稍顯模糊，神經(jīng)元胞體內尼氏體減少，膠質細胞增生，中央管飽滿，中央管室管膜細胞受壓變平，管周組織疏松，呈明顯水腫改變，蛛網(wǎng)膜F腔可見KAOLIN沉積，大量炎性細胞浸潤。第21天水腫稍顯減輕，但持續(xù)存在，胞漿空泡出現(xiàn)，前角細胞數(shù)量減少，膠質細胞增生明顯，中央管張力增加，室管膜上皮斷裂、脫落，可見KAOLIN肉芽腫形成。5、脊髓空洞前狀態(tài)中上頸髓超微結構電鏡觀察，KAOLIN組動物于術后2周內基膜尚平滑完整，緊密連接結構正常，主要為神經(jīng)組織細胞的缺血水腫，細胞組織間隙增寬，程度隨時間的延長而加重，出現(xiàn)線粒體腫脹、崩解尼氏體破壞、表面顆粒減少血管周圍間隙增寬等21天可見上述病變加重，并且出現(xiàn)髓鞘板層狀結構松解、斷裂，呈脫髓鞘改變，甚至軸索破壞。上述結果提示，脊髓空洞前狀態(tài)作為脊髓空洞癥的早期階段，在脊髓神經(jīng)電生理傳導功能上即發(fā)生變化，早于臨床癥狀的出現(xiàn)其組織學上主要表現(xiàn)為脊髓缺血水腫，其中早期主要為血管源性水腫，隨后伴有間質性

簡介：本文主要分兩部分展開研究第一部分UCMSC和的生物學特性鑒別目的比較人臍帶和脂肪來源的間充質干細胞的生物學特性。方法分離及體外培養(yǎng)人脂肪和臍帶來源的間充質干細胞。通過連續(xù)9天的CCK8的檢測結果繪制兩種間充質干細胞的生長曲線。為了解和UCMSC的免疫表型，流式細胞儀檢測CD13、CD14、CD44、CD45、CD71、CD90、CD105和CD34在兩種MSC上的表達。利用地塞米松誘導和UCMSC后，流式檢測ANNEXINV的表達，分析MSCS的抗凋亡能力。通過成脂、成骨、成神經(jīng)誘導培養(yǎng)基對兩種間充質干細胞的誘導分化，鑒定其多向分化的潛能。分別采用油紅O、茜素紅、GFAP染色鑒定是否分化成功。通過蛋白芯片分析和UCMSC的培養(yǎng)液上清的分泌的蛋白和細胞因子。結果脂肪來源和臍帶來源的間充質干細胞都能成功從相關組織中分離培養(yǎng)。和UCMSC形態(tài)上相似，2天左右時呈現(xiàn)纖維狀或梭形，當610天后細胞密度增大時，呈現(xiàn)在平行排列生長或旋渦狀生長。和UCMSC均表達CD13、CD44、CD71、CD90、CD105，不表達CD14、CD34和CD45。生長曲線顯示1218H，細胞增殖較慢，2D后進入對數(shù)生長期，持續(xù)56D，在78D后進入細胞生長平臺期。在高濃度的地塞米松的誘導下，和UCMSC都具有良好的抗凋亡能力。脂肪來源和臍帶來源的間充質干細胞都具有很好的成脂、成骨、成神經(jīng)元的誘導分化能力。在培養(yǎng)過臍帶間充質干細胞和脂肪間充質干細胞的上清中，兩種干細胞所分泌的細胞因子水平不盡相同。UCMSC上清中的MIP2、IL6和GRO的表達顯著高于，而上清中的CD27和神經(jīng)調節(jié)蛋白含量則高于UCMSC。結論脂肪來源和臍帶來源的間充質干細胞均具有類似的生物學特性，但在誘導分化、增殖能力方面各有優(yōu)勢，所分泌的細胞因子水平也不盡相同，因此應根據(jù)不同的需要選擇合適來源的干細胞。第二部分UCMSC和條件培養(yǎng)基對U251細胞的分化、凋亡的影響目的了解兩種間充質干細胞，和UCMSC的培養(yǎng)上清的抗膠質瘤特性。方法通過CCK8檢測UCMSC和的培養(yǎng)上清抑制U251的增殖能力。利用流式細胞儀檢測ANNEXINV的表達分析UCMSC和的培養(yǎng)上清誘導U251后的凋亡程度。實時熒光定量PCR檢測U251在誘導前后的凋亡相關基因的MRNA的表達量。通過高通量篩選系統(tǒng)評估膠質細胞在分化后的形態(tài)改變。劃痕試驗、MATRIGEL侵襲試驗檢測腫瘤細胞的侵襲能力。通過蛋白芯片分析U251細胞在CM和UCMSCCM誘導前后蛋白表達。結果兩種類型的間充質干細胞都能抑制U251細胞的增殖，特別是UCMSC的抑制能力更強。ANNXINV和PI的凋亡檢測表明CM和UCMSCCM都能誘導U251細胞凋亡。實時熒光定量PCR檢測表明誘導后U251的凋亡基因CASPASE3和CASPASE9表達顯著上調，而抗凋亡基因SURVIVIN和XIAP的表達下調。MSCCM都能誘導U251細胞很快分化成為相對正常形態(tài)，并能減弱腫瘤細胞的侵襲能力。結論間充質干細胞均能有效誘導U251細胞的凋亡和分化。UCMSC的誘導凋亡能力較更強。兩種干細胞對U251的誘導分化的能力沒有明顯差異。我們的發(fā)現(xiàn)提示MSC細胞本身有良好的抗腫瘤的特性，并可能用于未來的膠質瘤的治療。

簡介：沙門氏菌是腸桿菌科中威脅畜禽產(chǎn)品安全的重要病原菌之一，廣泛存在于肉類、禽類、蛋類或其他動物性食品中。本試驗從呼和浩特采集的50份雞蛋樣品中分離沙門氏菌，采用傳統(tǒng)分類方法，從菌體形態(tài)特征和生理生化特性水平進行鑒定，以了解雞蛋被沙門氏菌污染的情況，同時從雞腸道內和雞飼料內進行分離，了解產(chǎn)蛋過程中沙門氏菌的分布情況。對分離的菌株進行30℃、37℃、40℃生長模型分析，了解在不同溫度下菌數(shù)隨時間的變化趨勢。對菌株在60℃、75℃下的失活曲線進行分析，了解其菌數(shù)隨時間是否呈直線型下降。并了解在營養(yǎng)缺乏時沙門氏菌形成生物被膜的情況，為內蒙古帶殼雞蛋中沙門氏菌安全性評估提供有利依據(jù)。結果表明，沙門氏菌生長的最適NACL濃度范圍為05％～3％，最適PH值范圍為60～90，最適生長溫度范圍為25℃～40℃。生長模型分析結果表明，30℃營養(yǎng)肉湯中沙門氏菌的生長曲線用RIDS模型擬合較好。其回歸模型為LOGNT874722821E1711252908848479111083861437℃營養(yǎng)肉湯中沙門氏菌的生長曲線用MMF模型擬合較好。其回歸模型為LOGNT381169517380968528827T4870058526858267T4870058540℃營養(yǎng)肉湯中沙門氏菌的生長曲線用MMF模型擬合較好。其回歸模型為LOGNT1401985762412490718538T2643737866973219T26437378。溫度失活模型表明，沙門氏菌分離株在60℃和75℃營養(yǎng)肉湯中其菌數(shù)的對數(shù)值隨時間呈線性下降，且LINEAR方程擬合情況較好。沙門氏菌在1～4D生物被膜內活菌數(shù)呈上升趨勢，第4D達到最大值。隨培養(yǎng)天數(shù)的增加，生物量顯著增加，到7D時幾乎覆蓋整個載體表面。外膜蛋白SDSPAGE分析表明，該菌主要蛋白微孔蛋白PIN位于36～41KDA之間，另外在25KDA與14KDA附近顯示多條次要蛋白帶。

簡介：蜚蠊在地球上生存了35億年，千百年來一直被人們視為害蟲而被剿殺，但是蜚蠊作為藥用，在我國歷代重要醫(yī)藥典籍中早有記載，目前的研究發(fā)現(xiàn)，蜚蠊提取物具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤、治療心血管疾病、促進創(chuàng)傷愈合等作用。我們以長江流域各地區(qū)的優(yōu)勢蠊種黑胸大蠊為材料，從其生長發(fā)育的觀察、室內飼養(yǎng)、生理生化特點、藥用效果等方面進行了初步研究，目的在于探討其生物學特性、發(fā)掘潛在藥用價值等，為黑胸大蠊的基礎研究和藥用價值的開發(fā)提供依據(jù)。方法1觀察黑胸大蠊生長發(fā)育的全過程，探討其室內飼養(yǎng)方法。2運用生物化學和高效液相色譜技術對黑胸大蠊不同發(fā)育階段蛋白成分和氨基酸成分進行比較分析。3運用MTT比色法檢測黑胸大蠊不同發(fā)育階段提取物在體外對淋巴細胞增殖的影響。4利用黑胸大蠊雄蟲免疫兔血清對美洲大蠊若蟲CDNA文庫進行免疫篩選和生物信息學分析。結果與結論1通過對黑胸大蠊孵化、蛻皮、羽化、生殖產(chǎn)卵等生理過程的全面觀察，了解到了其在室內自然條件下的生物學特性、生活及行為習性，探索了其不同發(fā)育時期對溫度、濕度、飲食等的要求，建立了室內人工飼養(yǎng)黑胸大蠊的方法。2生化分析結果顯示卵蛋白種類明顯少于若蟲與成蟲；若蟲的蛋白種類及含量與成蟲蛋白相近，不同齡期若蟲的蛋白種類基本相同，但主帶的數(shù)量及位置有所在不同。雌、雄成蟲間蛋白種類也有一定差異。此外，采用高效液相色譜技術對黑胸大蠊各發(fā)育階段的氨基酸成分與含量進行了比較分析，結果表明若蟲期氨基酸含量最高，雌蟲次之，卵含量最低。3首次采用MTT比色法觀察了黑胸大蠊提取物免疫調節(jié)的藥用效果，證明若蟲與雌蟲提取物在一定劑量時對離體淋巴細胞有刺激作用，能促進淋巴增殖，顯示其具有潛在的免疫調節(jié)作用。4通過篩選CDNA文庫，得到6個新基因，依次命名為PARCXPWMX01PARCXPWMX06，利用生物信息學技術對PARCXPWMW03基因編碼的蛋白質進行分析，獲悉了該蛋白的理化性質，二、三級結構及功能位點等生物學信息，該蛋白與其它生物電子轉移黃素蛋白的同源性較高。經(jīng)綜合分析，推測該蛋白為受磷酸化激活調控的與信號傳導和電子傳遞有關的跨膜蛋白。本實驗從黑胸大蠊生長發(fā)育、人工飼養(yǎng)、生理生化特性等基礎研究到黑胸大蠊基因水平的研究，并初步探討黑胸大蠊提取物免疫調節(jié)的藥用價值，為黑胸大蠊藥用成分的分析鑒定及其開發(fā)應用提供了重要的理論與實驗依據(jù)。

簡介：雷公藤TRIPTERYGIUMWILFDIIHOOK是衛(wèi)矛科雷公藤屬多年生藤本植物。在我國雷公藤植物資源豐富廣泛分布于浙江、福建、廣東、貴州等東南各省。雷公藤是一味常用藥材主要以其根、蓮入藥性涼味辛、苦歸腎肝經(jīng)具有消腫止痛活血通絡除濕祛風殺蟲解毒的功效。雷公藤紅素又名南蛇藤素是具有醌甲基結構的五環(huán)三萜化合物外觀呈紅色針狀結晶體分子式為C29H38O4相對分子質量為450。雷公藤紅素主要存在于衛(wèi)矛科雷公藤屬中具有多種生物活性如免疫抑制、抗癌、抗氧化作用、抗新生血管生成作用、抗肝纖維化和抗神經(jīng)退行性疾病等。雖然雷公藤紅素具有多種藥理活性但其水溶性小生物利用度低這限制了臨床的應用因而改善水溶性的結構優(yōu)化研究應是其重要的研究方向。有研究表明雷公藤紅素的醌甲基是活性必須基團C2、C3的結構改造降低了其活性基于此本實驗以雷公藤紅素為先導化合物將28位羧基酯化或酰胺化合成了一系列雷公藤紅素衍生物并對其活性進行初步的篩選。具體研究工作包括以下二個部分1雷公藤紅素衍生物的合成及油水分布系數(shù)的測定有研究表明雷公藤紅素的醌甲基結構是活性必須基團23位的結構改造會降低活性?；诖宋覀円岳坠偌t素為先導化合物保留醌甲基結構將28位羧基酯化或酰胺化改善水溶性。雷公藤紅素衍生物的結構解析通過1HNMR、13CNMR及TOFHRMS圖譜確認水溶性通過油水分布系數(shù)確定。2體外抗纖維化和抗腫瘤活性研究本實驗旨在觀察雷公藤紅素衍生物的生物學活性。體外培養(yǎng)肝星狀細胞HSCT6、人肝癌細胞HEPG2和人宮頸癌細胞HELA。通過MTT法測定衍生物抑制細胞增殖的半數(shù)抑制濃度對衍生物的抗肝纖維化和抗腫瘤活性作初步的評價和篩選。結果發(fā)現(xiàn)衍生物1A顯示出較好的抗肝纖維化活性衍生物1D顯示出較好的抗肝癌HEPG2活性衍生物1F顯示出較好的抗宮頸癌HELA活性。雖然具體的構效關系和生物學分子機制還不是很清楚但本實驗為抗肝纖維化和抗腫瘤治療提供了物質基礎。

簡介：分類號分類號R7337R7337學校代碼學校代碼103910392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼100208100208學號學號21210032292121003229碩士碩士學位學位論文論文論文題目論文題目慢病毒介導慢病毒介導HSAMIR223過表達對過表達對K562細胞生物學特性影響的實驗研究胞生物學特性影響的實驗研究EFFECTSOFLENTIVIRUSMEDIATEDHSAMIR223OVEREXPRESSIONONBIOLOGICALPROPERTIESOFK562學位類別別醫(yī)學醫(yī)學碩士碩士所在學院協(xié)和臨床醫(yī)學院協(xié)和臨床醫(yī)學院申請人姓名莫慧玲姓名莫慧玲學科、?？?、專業(yè)臨床檢驗診斷學業(yè)臨床檢驗診斷學導師曹穎平師曹穎平教授教授答辯委員會主席伍嚴安答辯委員會主席伍嚴安教授教授研究起研究起止時間止時間20142014年1111月至月至20152015年5月答辯日期期20152015年5月2929日二○一五○一五年五月目錄中文摘要中文摘要1ABSTRACT3前言5第一部分第一部分MIRMIR223223慢病毒過表達重組載體質粒的構建慢病毒過表達重組載體質粒的構建及在及在K562K562細胞細胞中的表達情況中的表達情況81材料811細胞株812慢病毒載體系統(tǒng)813慢病毒載體構建及表達的主要試劑814慢病毒載體構建及表達的主要儀器915其他實驗所需的主要試劑和主要儀器916主要試劑的配置102實驗方法1221PCR擴增目的基因片段1222割膠回收1323大腸桿菌感受態(tài)的制備1424目的基因同源重組入表達載體1425重組質粒鑒定1626陽性重組質粒的大量抽提163慢病毒的包裝1731包裝病毒293T細胞的復蘇1732293T細胞的傳代1733陽性重組質粒的細胞轉染1834慢病毒的收獲和濃縮1835慢病毒滴度測定194K562細胞的培養(yǎng)1941培養(yǎng)基成份19

簡介：山西大學碩士學位論文兩株產(chǎn)海因酶菌株的分子生物學及理化性質的比較姓名趙莉霞申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師袁靜明李卓玉20030601兩株產(chǎn)海因酶菌株的分子生物學及理化性質的比較ABSTRACTDAMINOACIDSARCWIDELYUSEDINSEVERALFIELDSSUCHASPHARMACEUTICS．FOODADDITIVES．PESTICIDESANDCOSMETICSETC．DAMINOACIDSAREUSUALLYPRODUCEDBYENZYMATICORCHEMOENZYMATICMETHOD．INBIOCONVERSIONOFADAMINOACIDANDITSDERIVATIVE．THESUBSTRATE，5’MONOSUBSTIMTEDHYDANTOINISFIRSTLYTRANSFERREDINTOALLINTERMEDIATE．DCARBAMYLAMINOACIDBYDHYDANTOINASE，ANDINTURNINTOANOPTICALLYACTIVEDAMINOACIDBYEITHERDCARBAMOYLASEORCHEMICAL，NAN02NOWADAYS，THEBIOCONVERSIONOFD．AMINOACIDSHASBEENINDUSTRIALIZEDBYENZYMES．SOCALLEDONESTEDPROCESS．HOWEVER,THEYIELDOFDAMINOACIDSHASBEENTEMPEREDBYSOMELIMITEDFACTORSFROMSTRAINPERSERESULTINGINTHESHORTAGESOFTHATGOODSINTHEMARKETS．THEREFORE，SCIENTISTSARCTRYILLGTOSUBSTITUTEENGINEEREDSTRAINSFORNATURALSTRAINSINTHEPROCESSDESCRIBEDABOVE．DURINGCLONINGHYDANTOINASEGENEFROMTHEORIGINALSTRAINSS．ORI，WEOCCASIONALLYPICKEDUPACOLONYYZ．T16WHICHOCCURREDAHIGHHYDANTOINASEACTIVITY．ASERIESOFEXPERIMENTSWEREPERFORMEDTOCONFIRMWHETHERTHISSWAINWASTHESILRFIEASTHEORIGINALONE．1．THEHEREDITYOFSTRAINYZ116ISQUITESTABLEBECAUSETHEREISNOANYCHANGEFORHYDANTONIASEACTIVITY,EVENAFTERPASSINGTHEGENERATIONSFOR8TIMES．2．THESTRAINCANGROWONYCGMEDIUMSUPPLEMENTEDWITHAMP，UPTOTHECONCENTRATIONOF400UG／ML，WHILSTTHEORIGINALONECANNOTGROWONTHESAMEMEDIUMEVENAT50UG／MLOFAMP．3．ITSSHOWNFROMTHERESULTSOFDNADIGESTION．HYDANTOINASEGENEAMPLIFICATION，RAPD，E砒CPCRETC，THATTHEELECTROPHORETICPATTERNSOFTHEPRODUCTSAREOBVIOUSLYDIFFERENTFORMTHEORIGINALONE．4．COMPAREDWITHENZYMATICACTIVITY,HYDANTOINASEACTIVITY0．72U／MLLFORYZ116ISHIGHERTHANTHATOFSS．ORIO．20U／ML．ONTHECONTRARY,DCARBAMOYLASEACTIVITYOF血EFORMERFO．04U／MLISOBVIOUSLYLOWERTHANTHATOFTHELARERO．45U／ML．5．THEMORPHOLOGYOFTHETWOSTRAINSALSOSHOWSTHATTHEFLAGELLAOFSSORIAREAROUNDTHECELLS．WHILSTTHESTRAINYZ116HASONLYASINGLEFLAGELLUMGROWNATTHEPOLAROFCELLSBESIDESTHEDIFFERENTOFCELLSIZE，THOUGHTHEYBOTHAREBACILLUSANDGRAMNEGATIVE．6．ITISALSOINDICATEDFROMTHERESULTSOFPHYSICOCHEMICALPROPERTIESTHATOXIDASEANDCATALASEREACTIONAREBOTHPOSITIVEANDTHETESTFORGLNCOSEOXIDATIONISTHESAMEKINDOFACID．PRODUCINGTYPEFORBOTHSTRAINS．WECONSIDERFROMTHEABOVEDATATHATYZ116COULDBELONGTOPSEUDOMONASSP．ANDSSORITOAGROBACTERIASP．．FINALLY，INVIEWOF16SRDNASEQUENCEANALYSIS，STRAINYZ116ISCLASSIFIEDTOPSEUDOMONASSP．ANDSTRAINSS．ORIISSINORHIZOBIUMSP．ACCORDINGTOTHE“BLAST’DATA．．2．

簡介：目的研究各種血生物學指標在新生兒窒息及其引發(fā)的缺氧缺血性腦病中的變化規(guī)律，評估其在臨床診斷中的應用價值。方法選擇蘇州大學附屬兒童醫(yī)院的33例單純窒息足月兒、14例HIE足月兒為實驗組，均在窒息后24小時內入院；同期選擇27例蘇州市立醫(yī)院本部產(chǎn)科分娩的健康足月兒為對照組。采集他們外周血1全自動生化分析儀及自動化血液分析儀檢測各種血生物學指標，包括心肌酶譜相關指標（AHBDH、CK、CKMB、LDH）、肝功能相關指標（ALT、AST）、腎功能相關指標（CR、BUN）、免疫功能相關指標（PTL、CRP）；2分離單個核細胞，用RTPCR方法檢測三組單核細胞NOD1MRNA及NOD2MRNA（免疫功能相關指標）的表達情況。比較各類生物學指標在單純窒息組B、HIE組C及健康對照組A之間的差異，繪制ROC曲線，計算生物學指標在診斷新生兒窒息及HIE中的敏感性和特異性，綜合評估其臨床應用價值。結果（1）心肌酶譜相關指標比較與對照組相比，單純窒息組的AHBDH、CK、CKMB、LDH的水平均明顯升高。此外，HIE組AHBDH、CK、CKMB的水平高于單純窒息組，差異有統(tǒng)計學意義。診斷新生兒窒息時，上述指標ROC曲線下面積依次為CKMB（0859）CK（0840）LDH（0837）AHBDH（0814）；診斷新生兒HIE時，上述指標ROC曲線下面積依次為AHBDH（0859）CKMB（0833）CK（0818）LDH（0676）。（2）腎功能相關指標比較單純窒息組CR的水平明顯高于對照組，且HIE組CR的水平高于單純窒息組，差異有統(tǒng)計學意義。而BUN只有在HIE組明顯升高，對照組與單純窒息組之間無顯著差異。診斷新生兒窒息和HIE時，上述指標ROC曲線下面積均為CR（0841，0733）BUN（0676，0586）。（3）肝功能相關指標比較與對照組相比，兩組窒息患兒中ALT和AST的水平均明顯升高，且HIE組ALT和AST的水平高于單純窒息組，差異有統(tǒng)計學意義。診斷新生兒窒息和HIE時，上述指標ROC曲線下面積均為AST（0859，0829）ALT（0811，0820）。4免疫相關指標比較窒息患兒NOD1的水平均明顯高于對照組新生兒，但單純窒息組與HIE組之間無顯著差異。窒息患兒PLT的水平明顯低于對照組，但單純窒息組與HIE組之間無顯著差異。此外，NOD2和CRP的水平在三組之間無顯著差異。診斷新生兒窒息時，上述指標ROC曲線下面積依次為NOD1（0879）PLT（0785）CRP（0541）NOD2（0539）。結論1血清中AHBDH、CK、CKMB、ALT、AST、CR的水平在對照組、單純窒息組、HIE組間呈逐漸升高趨勢，對新生兒窒息的早期診斷和危險分層具有一定指導意義。2NOD1在兩組窒息患兒中顯著升高，在預測新生兒窒息中具有較高的敏感性和特異性，可聯(lián)合其他生化指標輔助診斷。

簡介：鈦生物學性能的表面拓撲結構依賴性研究⑧論文作者簽名指導教師簽名論文評閱人1匿名一評閱人2匿名評閱人3評閱人4評閱人5匿名匿名匿名答辯委員會主席邳旭壺教援J匕塞太堂旦膣醫(yī)院委員L汪茫數(shù)握逝江太堂直盆王丕委員2塞4匾教援浙江太堂醫(yī)堂院隘屬旦膣醫(yī)院委員3隨睡教援浙江太堂醫(yī)堂院附屬目膣醫(yī)院委員4題塹堡主任醫(yī)婭逝江太堂附屬筮二醫(yī)院委員5委員6答辯日期浙江大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得逝江太堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名1像簽字日期矽。辟厶月眙學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解浙江太堂有權保留并向國家有關部門或機構送交本論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權逝江太堂可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權書卜學位論文作者簽名盯“、≮翩簽名彳∥礦寸U，簽字日期砂F年B自4日簽字日期沙‘辱6月夠

簡介：腸出血性大腸桿菌ENTEROHEMRHAGICESCHERICHIACOLI，EHECO157H7是一種重要的傳染病病原菌。自1975年首次被分離、1982年被確認為致病菌以來的20多年中，世界各地包括中國都有不同規(guī)模的暴發(fā)流行。EHECO157H7感染可致腹瀉、出血性結腸炎HEMRHAGICCOLITIS，HC，還可引發(fā)溶血性尿毒綜合征HEMOLYTICUREMICSYNDROME，HUS及血栓性血小板減少紫癜THROMBOTICTHROMBOCYTOPENICPURPURA，TTP等嚴重并發(fā)癥，嚴重者可導致死亡。EHECO157的感染因具有暴發(fā)流行趨勢、強烈的致病性與致死性和抗生素治療可加劇病情的危險性等特點，已經(jīng)成為全球性的公共衛(wèi)生問題。然而目前對其感染仍缺乏有效的防治方法，研究證明抗生素可促使O157菌釋放致死性志賀毒素STX，從而使患者并發(fā)HUS的危險性增加。病原體和宿主的相互作用是決定感染及發(fā)病的關鍵。EHEC與宿主腸道粘膜上皮細胞的粘附是疾病發(fā)展的第一步。介導O157細菌粘附定植的主要結構單元是Ⅲ型分泌系統(tǒng)TYPEⅢSECRETIONSYSTEMTTSS。Ⅲ型分泌蛋白ESPAESP為ECOLISECRETEDPROTEIN縮寫在細菌表面形成針狀擴展結構，這種結構是繞過細胞微絨毛和粘膜層必不可少的轉移裝置，它在細菌和宿主細胞之間架起一座橋梁，多種分泌蛋白及TIR被轉移至宿主細胞。效應蛋白的轉入促使O157緊密粘附至宿主細胞，引起肌動蛋白重排與聚集，導致宿主細胞發(fā)生病理改變，形成AEATTACHINGEFFACING損傷。ESPA不僅在細菌粘附中發(fā)揮關鍵性的起動作用，也在形成AE損傷的效應分子傳遞中起到橋梁作用。因此研究ESPA的生物學功能及其在粘附定植中的作用對闡明O157的致病機理，尋找預防、控制和治療O157感染的手段具有重要意義?；谝陨险J識，本實驗從以下幾個方面對腸出血性大腸桿菌O157ESPA生物學功能進行了研究，取得了以下結果1O15ESPA的克隆表達。采用PCR法自O157菌基因組擴增編碼ESPA的約580BP全長基因，TA克隆后構建原核表達質粒PET28AESPA，經(jīng)酶切、測序證實與預期序列完全一致。陽性重組子轉化ECOLIBL21DE3后，IPTG誘導目的蛋白表達率約40％，PAGE電泳初步測定目的蛋白的分子量約21KD，超聲破菌后電泳證實目的蛋白以包涵體形式表達。目的蛋白經(jīng)包涵體洗滌和陰離子交換層析純化后純度達90％，免疫家兔獲得了效價為132的多抗血清。2O157ESPA生物學作用研究。21O157體外粘附細胞模型建立。選用培養(yǎng)簡單、生長周期較短、貼壁生長的HELA細胞，將O157接種于HEPESDMEM液體培養(yǎng)基內，培養(yǎng)至對數(shù)生長期OD600≈06，然后將貼壁生長在蓋玻片上的HELA細胞與細菌于37℃，5％CO2共同孵育4H，姬姆薩染色及電鏡觀察。結果O157與HELA細胞緊密粘附，呈典型的LA粘附類型。22采用ESPA抗體與細菌預中和及細菌與抗體同時加入方法，與HELA細胞粘附，用PBS洗去未粘附細菌，胰酶消化細胞，倍比稀釋后接種LB平板，計數(shù)單菌落，統(tǒng)計學分析ESPA抗體阻斷粘附的效果，結果顯示抗體中和的O157與未加抗體的O157細菌沒有顯著性差異P＞005，ESPA抗體并不能阻斷細菌與細胞的粘附。23用ESPA兔抗血清作為一抗，F(xiàn)ITC標記的羊抗兔IGG作為二抗，檢測了O157與HELA細胞的粘附，結果提示①重組ESPA蛋白免疫的兔抗血清可以和O157細菌發(fā)生抗原抗體反應；②O157是通過ESPA介導與HELA細胞的粘附。3ESPA作為O157疫苗候選抗原的免疫保護研究。31ESPASTX2B融合蛋白的克隆表達。采用LINKER連接的方式，將STX2B連接在ESPA之后。具體步驟為將含BAMHI酶切位點的LINKER設計到ESPA的下游引物、STX2B的上游引物中，PCR擴增獲得ESPA及STX2B片段，通過DNA連接酶連接，構建PET28AESPASTX2B重組質粒，轉化ECOLIBL21DE3。IPTG誘導表達，PAGE電泳檢測，融合蛋白表達率約為45％。初步純化后蛋白純度達85％。32用純化后的ESPA和ESPASTX2B重組蛋白免疫BALBC小鼠，ELISA結果顯示血清特異性抗體的效價顯著增高，表明重組蛋白具有很強的免疫原性。O157活菌攻毒保護試驗結果顯示ESPA及ESPASTX2B能大大減少小鼠的死亡率，與對照組相比，小鼠存活率由467％分別提高到80％和933％，差異顯著P＜005。對存活小鼠糞便O157CFU計數(shù)分析表明，實驗組與PBS對照組排菌時間未見明顯差異P＞005。O157超聲上清毒素致死保護試驗顯示融合蛋白ESPASTX2B能有效保護005MGO157超聲上清攻毒引起的小鼠死亡，免疫保護率為677％。綜上所述，本研究成功表達了ESPA和ESPASTX2B重組蛋白，建立了O157體外粘附的細胞模型，通過對ESPA重組蛋白的生物學功能研究顯示ESPA具有良好的免疫原性和免疫反應性，盡管ESPA抗體不能阻斷O157對細胞的粘附和減少O157在動物體內的定植，卻可以通過影響AE損傷的形成來達到免疫保護效果；融合蛋白增加了STX2B亞單位，可以降低毒素對宿主的毒性損傷，起到了雙重免疫保護作用。本課題的實施為進一步探討O157細菌的粘附定植機制和研制O157疫苗奠定了良好的基礎。

簡介：背景和目的特發(fā)性肺纖維化（IPF）是一種致死性且病因不明的肺部疾病。肺表面活性蛋白A（SPA）是一種在II型肺泡上皮細胞中合成并分泌到細胞外的糖基化蛋白，其在維持肺的固有免疫系統(tǒng)功能及肺表面活性物質穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮較為重要的作用。通過對兩個家族性的肺纖維化群體病人進行全基因組關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)了肺表面活性蛋白A2的兩個稀有突變（G231V和F198S。這兩個位點的突變都會引起SPA2唾液酸化修飾缺失并且導致蛋白不能被分泌到細胞外。唾液酸化修飾發(fā)生在蛋白糖鏈的末端，其缺失會導致蛋白的不完全糖基化修飾進而影響蛋白的生物學功能，但SPA蛋白的糖基化修飾對該蛋白功能的影響卻很少有研究報道。本論文通過對不同類型突變引起的SPA糖基化修飾缺陷研究對其生物學功能的影響以及可能的致病機理。方法我們利用野生型大鼠來源的SPA通過點突變技術構建兩種不同類型的突變載體（1）糖基化修飾位點的直接突變（N21T、N207S和N21TN207S）使得糖鏈不能加入到蛋白上；（2）與肺纖維化疾病直接相關的糖識別結構域（CRD）的突變（G231V和F198S）。我們把構建好的重組載體轉染到中國倉鼠卵巢細胞系（CHOK1）中表達，通過蛋白質印記技術、免疫熒光技術、Α胰凝乳蛋白酶的消化作用等比較細胞內合成及分泌到細胞外的野生型及不同突變型的鼠SPA蛋白生化特性及功能的差異。結果CRD位點的兩個突變蛋白（G231V和F198S）都會完全破壞SPA蛋白的分泌功能，而糖基化位點的突變蛋白（N21T、N207S和N21TN207S）仍可以分泌到細胞外。兩種類型的突變都會形成乙基苯基聚乙二醇（NP40）不溶物而沉積在細胞內，但卻只有主要聚集在內質網(wǎng)上的CRD突變蛋白形成的沉積才可以被化學分子伴侶物質4苯丁酸鈉（4PBA）所減少。另外，兩種突變蛋白都會導致其穩(wěn)定性的下降，并且CRD突變蛋白更易被Α胰凝乳蛋白酶降解。兩種NP40可溶性的突變蛋白都是通過蛋白酶體途徑在細胞內降解，而NP40不溶的突變蛋白還可以通過溶酶體途徑降解。結論由不同突變引起的SPA蛋白糖基化修飾缺陷會導致其分泌功能的缺失、蛋白在細胞內的異常聚集沉積、蛋白穩(wěn)定性的下降以及降解途徑的變化，而蛋白突變引起的這些功能的變化可能是導致家族性肺纖維化發(fā)生可能原因之一。