簡介：生物學(xué)活性測定在重組藥物的研究開發(fā)和質(zhì)量控制中至關(guān)重要。目前的生物活性分析方法主要包括體內(nèi)法（動物實驗）和體外法（細胞與組織實驗）?；诩毎姆治龇椒ㄓ捎谄渚哂胁僮骱啽?，周期短，特異性好，變異度小等優(yōu)點得到廣泛應(yīng)用。但許多重組藥物由于藥物作用的組織器官特異性，往往難以獲得適用于活性測定的穩(wěn)定的高反應(yīng)性細胞株，而通過人工改造的轉(zhuǎn)基因細胞可以解決這一難題。本研究的目的是構(gòu)建活性測定轉(zhuǎn)基因細胞技術(shù)平臺并應(yīng)用于重組藥物的生物學(xué)活性測定方法研究，以解決特定重組藥物的測活難題。本研究內(nèi)容共分為三部分，分別根據(jù)特定藥物的具體作用機制采用了不同的策略構(gòu)建活性測定用轉(zhuǎn)基因細胞株。第一部分，導(dǎo)入天然受體的轉(zhuǎn)基因細胞活性測定方法的建立和應(yīng)用。腦利鈉肽與其天然受體鳥苷酸環(huán)化酶A（GCA）結(jié)合后，可激活其胞內(nèi)區(qū)的鳥苷酸環(huán)化酶活性，催化GTP轉(zhuǎn)化為CGMP。構(gòu)建GCA超表達的293GCAC3單克隆細胞株，通過檢測CGMP含量的來測定重組人腦利鈉肽的生物學(xué)活性。結(jié)果表明，該方法較傳統(tǒng)的兔主動脈條法操作簡便，周期短，變異小，可以作為一種有效的替代方法用于重組人腦利鈉肽的生物活性分析。第二部分，同時導(dǎo)入天然受體和報告基因的轉(zhuǎn)基因細胞活性測定方法的建立與應(yīng)用。BYETALOG與GLP1受體結(jié)合后，可提高細胞內(nèi)CAMP水平，最終激活CAMP反應(yīng)元件（CRE），增強下游基因的表達。構(gòu)建GLP1受體和CRE報告基因共轉(zhuǎn)染的CHOGLP1RCREC14單克隆細胞株，通過檢測報告基因的表達來測定BYETALOG的生物學(xué)活性。結(jié)果表明，該方法操作簡便快速，變異度小，適用于BYETALOG的生物學(xué)活性測定。第三部分，同時導(dǎo)入融合受體和報告基因的轉(zhuǎn)基因細胞活性測定方法研究。構(gòu)建VEGFR胞外區(qū)和IFNAR12胞內(nèi)區(qū)的融合受體，與IFN反應(yīng)元件（ISRE）報告基因共轉(zhuǎn)染HEK293細胞，VEGF與胞外區(qū)的VEGFR結(jié)合后激活胞內(nèi)的IFN信號通路，引起ISRE報告基因高表達，可以通過檢測VEGF單抗對報告基因表達的抑制作用來測定其活性。成功構(gòu)建了融合受體和ISRE報告基因，并經(jīng)過瞬時轉(zhuǎn)染及檢測，RHVEGF121刺激后可以引起ISRE報告基因表達的增強，且具有劑量依賴效應(yīng)。通過本課題的研究，我們初步形成了構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細胞活性測定方法的研究策略和技術(shù)路線，并成功構(gòu)建了兩個轉(zhuǎn)基因細胞株，建立了相應(yīng)的檢測方法。本課題研究成果為建立活性測定轉(zhuǎn)基因細胞技術(shù)平臺打下了良好基礎(chǔ)。

簡介：分類號R758密級單位代碼10114學(xué)號200930570不同條件下銀屑病患者表皮千細胞分離、培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)特性的初步研究研究生奎欣指導(dǎo)教師郄瑞副教援合作指導(dǎo)教師毖玨明熬援申請學(xué)位門類級別醫(yī)堂亟±抖堂堂僮2專業(yè)名稱麈魃痘皇眭痘堂研究方向廑叢塵堡堂友囪所在學(xué)院山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院2012年3月18閂山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要??????????????????????????????????．．1英文摘要??????????????????????????????????II縮略詞表??????????????????????????????????IV前言?????????????????????????????????????????????．．1日U舌?????????????????????????????????????????????．．1正文第一章材料與方法????????????????????????????21．1標本來源???????????????????????????????21．2主要試劑???????????????????????????????21．3主要儀器設(shè)備?????????????????????????????31．4實驗方法???????????????????????????????31．4．1主要試劑配制??????????????????????????31．4．2ESCS的體外分離、篩選、培養(yǎng)、鑒定及生長曲線的繪制???????．．41．5統(tǒng)計處理??????????????????????????????一6『F文第二章實驗結(jié)果?????????????????????????????72．1ESCS分離、篩選、培養(yǎng)????????????????????????．72．1．1不同消化條件分離真表皮效率比較?????????????????72．1．2胰酶消化制備單細胞懸液?????????????????????72．1．3銀屑病ESCS純化????????????????????????82．1．4ESCS培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察????????????????????一82．2ESCS表面標記物檢測?????????????????????????．92．2．1免疫熒光細胞化學(xué)染色結(jié)果????????????????????92．2．2流式細胞儀檢測CD29整合素131、P63、CD71結(jié)果?????????92．3細胞生長曲線的繪制??????????????????????????9正文第三章討論?????????????????????????????．10正文第四章結(jié)論?????????????????????????????．13正文參考文獻????????????????????????????????14『F文附圖??????????????????????????????????16綜J簽?????????????????????????????????????????????20參考文獻??????????????????????????????????25個人簡歷??????????????????????????????????27致謝?????????????????????????????????????????????28

簡介：學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名手寫礴磊簽字日期2。／Z。6月／1日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名手寫磅免鋤簽名矧∥夕夕簽字日期勱IZ易月『『日簽字日期掃／許6月『F日摘要摘要目的構(gòu)建能特異性抑制SHI一1細胞株趨化因子受體CXCR4CXCCHEMOKINERECEPTORTYPE4基因表達的慢病毒SIRNA載體，轉(zhuǎn)染至SHI一1細胞中，降氐CXCR4基因的表達，建立白血病細胞株SHI一1細胞與急性白血病骨髓基質(zhì)細胞BONEMARROWSTROMALCELLS，BMSCS體外共培養(yǎng)模型，觀察干擾CXCR4表達后對SHIL細胞體外增殖、黏附、侵襲能力的影響，并通過體內(nèi)裸鼠皮下成瘤模型，進一步明確CXCR4與急性白血病臨床發(fā)生、發(fā)展和髓外浸潤問的關(guān)系。方法1、參照文獻設(shè)計針對CXCR4的RNAI靶點序列，合成靶序列的OLIGODNA，退火形成雙鏈DNA，與經(jīng)AGEI／BAMH膊切后的GV248EGFP載體連接產(chǎn)生RNA慢病毒載體GV248LV，PCR鑒定陽性克隆并測序，將測序『F確的GV248一LV、PHELPER10雨1PHELPER2O質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體2000將共轉(zhuǎn)染293T細胞，獲得重組慢病毒，用逐孔稀釋法測定病毒滴度。同理針對CXCR4陰性干擾序列，構(gòu)建陰性病毒，測定病毒滴度。2、分SHI一1細胞為SHI一1／CXCR4組、SHI1／NC組和SHI一1組共3組，其中SHI1／CXCR4組為SHI一1細胞轉(zhuǎn)染特異性干擾CXCR4基因表達的慢病毒干擾載體，SHI一1／NC組為轉(zhuǎn)染含無關(guān)序列片段的慢病毒載體，SHI1組不做任何處理，培養(yǎng)后，通過熒光顯微鏡、流式細胞術(shù)FCM觀察各組SHI一1細胞轉(zhuǎn)染病毒載體后的GFP熒光率，MTT法檢測3組細胞體外增殖能力的變化，通過半定量RTPCR、實時熒光定量PCRQPCR、流式細胞術(shù)檢NJCXCR4表達的改變。成功干擾SHI一1細胞CXCR4表達后，通過實時定量PCR檢測SHI1細胞中MMP一2、MMP一9MRNA的表達。3、體外培養(yǎng)急性非淋巴細胞白血病患者BMSCS，分別與3組細胞共培養(yǎng)24H，檢測3組細胞與BMSCS細胞之間黏附能力改變。4、按110比例將BMSCS與三組SHI一1細胞接種于鋪有MATRIGEL基質(zhì)膠的MILLICELLD、室中，建立SHI一1細胞跨MATRIGEL侵襲模型，共培養(yǎng)24H后，觀察表達不同程度CXCR4的SHI一1細胞侵襲能力的改變。

簡介：猴頭菌是一種重要的藥食兩用真菌，由于具有重要的生物活性，一直是研究的熱點。本文以液體發(fā)酵生產(chǎn)的猴頭菌絲為原料，對猴頭多糖的提取工藝、猴頭多糖的分離純化、多糖純品的性質(zhì)、多糖的降血糖作用、免疫調(diào)節(jié)作用、抗氧化作用、耐缺氧作用進行了系統(tǒng)研究。得出如下結(jié)論1采取單因素試驗結(jié)合正交試驗的方法，通過熱水提取法從液體發(fā)酵生產(chǎn)的猴頭菌絲中提取猴頭多糖，提取的最佳工藝為加水倍數(shù)為30倍、提取溫度為80℃、提取3H、用無水乙醇沉淀多糖，此條件下的多糖得率為9478％。同時，在熱水提取法的基礎(chǔ)上，研究了稀酸、稀堿、稀鹽提取法對多糖得率的影響，結(jié)果表明稀酸、稀堿條件下部分多糖發(fā)生水解，使多糖得率下降，稀鹽條件對多糖得率的影響不明顯。2采用SEVAG法去除蛋白質(zhì)雜質(zhì)，結(jié)果表明隨著SEVAG法處理次數(shù)的增加，多糖得率明顯下降；同時，SEVAG法除猴頭粗多糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的次數(shù)不應(yīng)超過5次。3猴頭多糖HMP經(jīng)DEAE纖維素凝膠柱層析粗步純化，得到主要分布于蒸餾水洗脫液中的多糖級分HMPI，HMPI經(jīng)SEPHADEXG100凝膠柱層析進一步純化，得到兩個單一組分HMPIA和HMPIB，其中HMPIA是主要多糖級分。4多糖純品HMPIA經(jīng)完全酸水解，采用HPLC方法分析單糖的組成，結(jié)果表明猴頭多糖的組成單糖為D葡萄糖、D木糖、D果糖和D半乳糖，單糖的摩爾比為11837911。其紅外圖譜表明猴頭多糖存在分子內(nèi)和分子間的氫鍵，分子中存在CH鍵伸縮振動，存在OH的變形振動，存在呋喃糖苷吸收峰。5猴頭菌絲多糖HMP具有明顯的降血糖作用，而且降血糖作用隨著多糖的濃度增加而加強；在免疫調(diào)節(jié)作用方面，HMP能夠明顯增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能，能夠明顯促進胸腺器官的發(fā)育，具有明顯的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用HMP能夠明顯提高血清、大腦、肝臟的SOD、CAT含量，能夠降低大腦、肝臟的MDA含量，具有明顯的抗氧化功能；同時，HMP具有較強的提高機體耐缺氧能力的作用，而且作用效果隨多糖濃度增加而加強。

簡介：多種原因均可引起急性肝損傷的發(fā)生，急性肝損傷后的高死亡率和預(yù)后差一直是醫(yī)學(xué)界的難題。目前如何更好地治療肝損傷仍是國內(nèi)外的一個難點。嚴重的急性肝功能損傷常引起急性肝功能衰竭，致肝功能不可逆轉(zhuǎn)而危及生命。終末期肝病目前最好的治療方法為原位肝移植，但供體有限及術(shù)后免疫排斥反應(yīng)是兩個主要的障礙。卵圓細胞作為肝臟的干細胞，在肝損傷的修復(fù)中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，卵圓細胞不同時間點其增殖率不同，于此提出卵圓細胞在各時間點增殖動力存在差異，EPCAM和PCNA共表達反應(yīng)卵圓細胞增殖活性，即各時間點EPCAM和PCNA共表達存在差異。卵圓細胞具有多向分化功能，其可分化為肝細胞、膽管細胞及肝癌細胞，甚至胰島細胞等，而在對卵圓細胞標記物的研究中發(fā)現(xiàn)膽管細胞表達CK19，肝母細胞表達AFP，可進行卵圓細胞分化方向的判斷。判斷卵圓細胞的分化研究有助于對肝臟疾病治療進行評估。近年，自噬與凋亡的研究是熱點問題。自噬是一個必不可少的，保守的通過消除蛋白質(zhì)聚集和破壞細胞器來控制胞漿性質(zhì)的溶酶體降解過程。自噬與凋亡存在密切關(guān)系，兩者相互協(xié)同而對細胞轉(zhuǎn)歸產(chǎn)生影響。而自噬與凋亡的確切關(guān)系仍存在爭議。卵圓細胞作為肝臟干細胞，參與肝臟的再生性修復(fù)及疾病演變，卵圓細胞是否存在自噬現(xiàn)象與其分化與增殖有無關(guān)聯(lián)本實驗建立了不同的急性肝損傷模型，對卵圓細胞在不同情況下增殖及分化有無差異，并對肝損傷修復(fù)中自噬及凋亡進行了初步研究。目的建立不同的肝卵圓細胞增殖模型，觀察其增殖、分化的差異及自噬的變化情況。方法①選擇健康SD大鼠隨機分為五組，分別為四氯化碳組、DGAL組、假手術(shù)組、2AAFPH組及空白對照組，建立肝損傷模型。分別于1D、7D、14D、21D處死動物取肝臟組織。②采用HEMATOXYLINEOSINSTAININGHE染色觀察大鼠肝組織病理組織學(xué)表現(xiàn)。③免疫熒光技術(shù)觀察不同時間點卵圓細胞表達，對陽性細胞進行定量技術(shù)分析。④免疫熒光雙標方法觀察卵圓細胞增殖動力變化。⑤免疫組織化學(xué)方法觀察卵圓細胞分化標記物AFP、CK19、CKIT的表達，并對其進行定量技術(shù)分析判斷其表達有無差異。⑥電鏡下觀察卵圓細胞自噬體超微結(jié)構(gòu)。⑦WESTERNBLOTTING技術(shù)觀察自噬標記蛋白LC3Ⅱ蛋白及BECLIN1蛋白表達。⑧原位缺口末端標記法TUNEL檢測凋亡有無變化。結(jié)果①與空白對照組相比，應(yīng)用四氯化碳組大鼠肝臟顏色為暗紅色，質(zhì)脆，約14天后漸恢復(fù)正常DGAL組大鼠肝臟水腫明顯，色暗紅，質(zhì)脆，約14天后漸恢復(fù)正常假手術(shù)組大鼠肝臟與之相比未見明顯差異2AAFPH組與之相比，1天肝臟呈淡紅色，質(zhì)脆，約21天后肝臟大小及顏色恢復(fù)正常。②肝臟組織HE結(jié)果顯示，與空白對照組相比，四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組可見肝細胞腫脹，排列紊亂，于匯管區(qū)周圍可見細胞形態(tài)小于肝細胞，核質(zhì)深染，細胞核呈卵圓形的卵圓細胞四氯化碳組和DGAL組炎癥細胞浸潤明顯比2AAFPH組少，卵圓細胞少。③血清肝功能檢測顯示，大鼠造模完成后第1天肝功能同空白對照組相比，假手術(shù)組肝功能變化無明顯差異。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組大鼠天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ASPARTATEAMINOTRANSFERASE，AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALANINEAMINOTRANSFERASE，ALT）及堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASE，ALP水平明顯升高（AST13397±1435ULVS8247±2186ULP＜00534617±975ULVS8247±2186UL，P＜00555797±1285ULVS8247±2186UL，P＜005ALT47±935ULVS4197±664UL，P＜00510244±504ULVS4197±664UL，P＜0052491±1971ULVS4197±664ULP＜005ALP27033±3609UVS5327±850U，P＜00537933±2155UVS5327±850UP＜00552067±3302UVS5327±850UP＜005），白蛋白ALBUMIN，ALB水平明顯下降（2337±221GLVS3213±373GL，P＜005229±250GLVS3213±373GL，P＜005239±106GLVS3213±373GL，P＜005）。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組之間比較，2AAFPH組肝功能變化較大。④免疫熒光檢測小鼠抗大鼠OV6抗體表達顯示四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對OV6抗體表達均在1～14天表達呈上升趨勢，14～21天呈下降趨勢，14天表達量最高。假手術(shù)組與空白對照組比較表達無明顯規(guī)律性。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組與空白對照組相比OV6抗體的表達在術(shù)后1天、7天、14天及21天均明顯增高，尤以14天升高最明顯10967±404VS567±153，P＜00515467±802VS567±153，P＜00529267±850VS567±153，P＜005，假手術(shù)組表達無明顯變化267±058VS567±153，P＞005。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組之間相比，2AAFPH組對OV6抗體的表達明顯增高。⑤EPCAM和PCNA熒光雙標檢測反映卵圓細胞增殖動力四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組卵圓細胞增殖率在術(shù)后1天、7天、14天及21天呈下降趨勢，并在術(shù)后7～14天下降明顯，2AAFPH組在7天時為（828±260）％，在14天則下降至5190±201％，P＜005有統(tǒng)計學(xué)意義。假手術(shù)組與空白對照組比較無明顯差異。⑥免疫組織化學(xué)染色顯示與空白對照組相比，四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對AFP、CK19及CKIT的表達均增加，且為1～14天呈上升趨勢，14天達高峰值，14～21天呈下降趨勢（AFP、CK19及CKIT四氯化碳組11667±351VS433±231，P＜00510867±651VS267±089P＜00510533±416VS400±100，P＜005DGAL組15533±569VS433±231P＜00514867±603VS267±089P＜00515767±322VS767±208，P＜0052AAFPH組26533±808VS433±231，P＜0052610±1868VS267±089，P＜00523633±651VS400±100P＜005）。假手術(shù)組與空白對照組比較無明顯變化（467±115VS433±231，P＞005300±100VS267±089P＞005367±058VS400±100P＞005）。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對AFP的表達存在差異（F值為260421，P＜001）對CK19的表達有差異（F值為144632，P＜005）對CKIT的表達有差異（F值為273875，P＜005），表現(xiàn)為2AAFPH組對AFP、CK19及CKIT的表達高于其余各組。⑦透射電鏡顯示1天、7天、14天及21天卵圓細胞內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)自噬體。1天時電鏡下觀察卵圓細胞體積小，胞核與胞漿比值較高，細胞器組成為散在明顯的微絲束和較多的核糖體及少許粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，7天到21天觀察卵圓細胞體積多較1天時大，此時含有較多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及糖元，也可見少量的張力微絲。⑧WESTERNBLOT檢測結(jié)果顯示四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組大鼠肝臟組織中BECLIN1及LC3Ⅱ蛋白隨時間變化表達水平明顯增加，各組間對BECLIN1蛋白的表達存在差異（F值為7811，P＜005），各組間對LC3Ⅱ蛋白的表達亦存在差異（F值為27592，P＜005）。假手術(shù)組與空白對照組大鼠肝組織BECLIN1及LC3Ⅱ蛋白表達水平與時間變化無明顯變化BECLIN1F值為0413，P＞005LC3ⅡF值為1173，P＞005。⑨TUNEL檢測結(jié)果顯示2AAFPH組凋亡細胞表達在1～14天呈上升趨勢，14～21天凋亡細胞表達呈下降趨勢。結(jié)論不同模型的急性肝損傷肝臟的損傷程度不同，以2AAFPH組為重，四氯化碳組和DGAL組次之。2AAFPH組肝臟的修復(fù)通過肝卵圓細胞的活化來完成。四氯化碳組和DGAL組作為中等程度的肝損傷，其修復(fù)主要通過肝細胞的再生及少量卵圓細胞的活化來完成2AAFPH模型卵圓細胞增殖活化數(shù)量多于其他模型，卵圓細胞增殖的高峰出現(xiàn)于術(shù)后7～14天卵圓細胞增殖動力在卵圓細胞數(shù)達高峰前開始下降不同卵圓細胞處于不同的分化階段，在不同時間卵圓細胞處于不同的分化階段自噬增強可能促進肝損傷的修復(fù)的完成自噬可能抑制肝損傷大鼠肝細胞的凋亡。

簡介：化學(xué)生物學(xué)是一門用新穎的化學(xué)方法來闡釋和操縱生物系統(tǒng)，研究生物學(xué)現(xiàn)象，解決現(xiàn)實世界中的生物學(xué)問題的學(xué)科。近十年來，化學(xué)生物學(xué)得到長足的發(fā)展，其影響已經(jīng)拓寬到了更廣泛的學(xué)科領(lǐng)域。中藥的化學(xué)生物學(xué)將傳統(tǒng)的基于結(jié)構(gòu)的中藥化學(xué)成分研究，引入到“生物學(xué)活性”研究的新層面，在分子靶標和作用機制的基礎(chǔ)上，闡釋有效成分的核心結(jié)構(gòu)與其靶標蛋白的作用關(guān)系。然而中藥藥效成分的體內(nèi)吸收、代謝和分布等具有復(fù)雜性，通常其在體內(nèi)又具有“多重靶點”的特性，這就給中藥的化學(xué)生物學(xué)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)。為了建立中藥藥效成分的化學(xué)生物學(xué)研究平臺，本論文分別選擇了牛蒡苷元和甘草次酸作為實例，展開了作用靶點確證和代謝分布的化學(xué)生物學(xué)研究。本論文首先采用懸浮聚合技術(shù)制備了聚乙烯醇磁性微球，開展了基于點擊化學(xué)反應(yīng)捕獲靶標蛋白的磁性捕獲技術(shù)的研究。一方面以牛血清白蛋白BSA為模型蛋白，采用熒光素以及疊氮對其進行了雙標記另一方面通過逐步反應(yīng)將磁球的端位引入了炔基基團，中間修飾了二硫鍵結(jié)構(gòu)使得該磁球可以基于點擊化學(xué)的方法特異性的捕獲疊氮修飾的BSA，又可以通過還原二硫鍵而將捕獲蛋白解離下來。以此為模型通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移的方法來檢測磁球捕獲的蛋白的能力，并通過響應(yīng)面設(shè)計對微球的粒徑和官能團覆蓋度等參數(shù)進行了優(yōu)化。結(jié)果顯示，最佳性能磁球的粒徑范圍為125631ΜM，官能團覆蓋度范圍為48537305％，其捕獲蛋白能力最強，約每毫升磁球捕獲6707ΜG的BSA，與實際捕獲量（6392±018ΜG）非常接近，證實了模型的可靠性并可以進行特異性靶標蛋白的富集。其次，本論文利用疊氮標記的非天然糖1，3，4，6O乙酰N疊氮乙酰胺AC4MANNAZ孵育人肺腺癌A549細胞，通過代謝標記手段產(chǎn)生了疊氮標記的糖蛋白，再使用上述炔基修飾的磁球?qū)ζ溥M行捕獲分離。發(fā)現(xiàn)1ML磁球可以分離得到51ΜG細胞表面糖蛋白，驗證了基于點擊化學(xué)方法捕獲糖蛋白的可行性。在此基礎(chǔ)上本論文制備了疊氮修飾的聚乙烯醇磁球和炔基化修飾的牛蒡苷元，通過點擊化學(xué)反應(yīng)，針對人支氣管上皮細胞BEAS2B開展了捕獲牛蒡苷元靶蛋白的研究。PHARMMAPPER數(shù)據(jù)庫的靶標預(yù)測結(jié)果顯示，牛蒡苷元抗炎靶點可能為3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1PDPK1。經(jīng)SDSPAGE電泳和WESTERNBLOT分析，利用抗PDPK1抗體驗證了PDPK1蛋白大量存在于所磁性捕獲的蛋白中。進一步結(jié)合分子對接及分子動力學(xué)分析，證實牛蒡子苷元與已知的PDPK1抑制劑253具有相近的作用方式及作用強度，初步確認PDPK1為牛蒡子苷元的作用靶點之一，為深入研究牛蒡子苷元的作用機理打下基礎(chǔ)。為了改善磁球捕獲靶蛋白技術(shù)在組織細胞定位觀測以及在蛋白捕獲量上的局限性，本論文迸一步又設(shè)計了一種新穎的聚賴氨酸自組裝熒光納米球，經(jīng)透射電鏡形態(tài)觀察該微球大小均勻，粒度分析結(jié)果表明平均粒徑為38NM。經(jīng)酶標儀熒光檢測，552NM激發(fā)波長下，其最大發(fā)射波長為596NM，熒光強度可以達到相同濃度RHODAMINE溶液的兩倍，提高了捕獲載體的生物相容性、熒光可示蹤性以及捕獲分離的便捷性。進一步對其進行了疊氮功能化修飾，并通過點擊化學(xué)反應(yīng)與炔基牛蒡子苷元結(jié)合，制備了連接有牛蒡子苷元的熒光納米球。將上述微球通過尾靜脈注射用于急性肺炎小鼠，進行活體成像分析，發(fā)現(xiàn)其胸腔的濃度明顯升高離體各器官的熒光強度測定也顯示，模型組小鼠肺部的熒光強度可以達到其它器官的2倍以上，證實了牛蒡子苷元的靶點主要集中在肺部。利用人支氣管上皮BEAS2B細胞開展牛蒡子苷元的細胞成像研究，發(fā)現(xiàn)結(jié)合有牛蒡子苷元的熒光納米球在細胞內(nèi)有結(jié)合特異性，證明牛蒡子苷元的靶點主要分布在胞漿中。利用上述合成的連接有牛蒡子苷元的聚賴氨酸熒光納米自組裝納米球以及空白納米球，分別對BEAS2B細胞中的靶蛋白進行了捕獲研究。經(jīng)過流式細胞分析，確定了共同孵育3H為最佳的捕獲時間通過裂解細胞和超濾對捕獲蛋白進行富集，并經(jīng)DTT還原和超濾濃縮得到了相應(yīng)的結(jié)合蛋白。SDSPAGE電泳分析顯示，陽性蛋白富集率遠遠高于和陰性蛋白。經(jīng)HPLCMSMS鑒定，陽性組共鑒定出675種蛋白，陰性組為750種蛋白使用PROTEINSCE和COVERAGE軟件進行條件過濾，發(fā)現(xiàn)其中陽性樣品中有19種蛋白，陰性樣品中有14種蛋白為可能的目標蛋白進一步采用生物信息學(xué)工具STRING90和KEGG對目標蛋白的相互作用關(guān)系進行分析，最終將陽性蛋白樣品劃分為4個功能組，分別與能量代謝、炎癥、鈣調(diào)節(jié)和熱休克等功能相關(guān)而陰性樣品只能劃分出1個細胞骨架調(diào)節(jié)蛋白組，證明為非特異性吸附的蛋白。進一步通過AUTODOCK40軟件將上述陽性蛋白與牛蒡子苷元進行分子對接，確認其可能的蛋白靶點。篩選結(jié)果表明，牛蒡子苷元對肽基脯氨酰異構(gòu)酶PPIA，熱休克蛋白70HSPA8，肌動蛋白Γ1ACTG1和3磷酸甘油醛脫氫酶GAPDH等顯示出較強的結(jié)合力，結(jié)合能分別為789，762，727和722KCALMOL，并存在合理的氫鍵結(jié)合，證實了牛蒡子苷元的作用靶點為PPIA，HSPA8，ACTG1和GAPDH，分別與胞內(nèi)鈣離子、熱休克抑制、炎癥通路和調(diào)控能量代謝相關(guān)。最后，本論文圍繞桔梗“引經(jīng)報使”改變甘草的藥效分子甘草次酸的動態(tài)分布過程開展化學(xué)生物學(xué)研究。分別對甘草次酸進行衍生化，制備可用于甲苯磺酰氯親核取代進行放射性18F標記的前體衍生物，并對其18F標記條件進行探索。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過羧基衍生的直鏈羥基取代后再進行親核取代，利于18F甘草次酸的合成，產(chǎn)率為169％，放射性強度為150MCI，放射化學(xué)純度為986％。以此為基礎(chǔ)建立了基于PET的甘草次酸藥代分布研究模型，以口服桔梗總皂苷進行干預(yù)，再通過小鼠尾靜脈注射18F甘草次酸，分別對主要器官的血藥濃度進行了在線活體的觀測。經(jīng)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在注射前一次性灌胃給桔梗總皂苷50GKG組，從給藥7MIN開始至115MIN，肺部18F甘草次酸的濃度明顯升高，為對照組的27倍，而其它器官沒有明顯的變化，印證了桔梗能夠引甘草上行的觀點。而在注射前一周每天灌胃給藥上述相同計量的桔?？傇碥眨⑸洚斕焱Ｖ菇o藥，同樣觀察藥代分布變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)幾乎沒有改變甘草次酸藥代分布的效果。因此推測，可以是藥物相互作用的原因改變了甘草次酸的藥代分布，具體分子機制還有待進一步研究。本論文采用了點擊化學(xué)、磁性捕獲、納米自組裝以及PET成像等重要的研究手段，分別對牛蒡子苷元的組織分布、細胞定位、以及靶點蛋白捕獲以及桔梗引甘草上行的機制等進行了研究，初步建立了篩選和鑒定細胞內(nèi)的靶點蛋白，并通過生物信息學(xué)分析、分子對接和基于結(jié)構(gòu)的計算分析手段確證相應(yīng)的靶標蛋白及其生物學(xué)功能，以及開展相關(guān)代謝分布研究的中藥化學(xué)生物學(xué)方法，為在分子層面揭示藥效分子的作用機制奠定了基礎(chǔ)。

簡介：點擊查看更多深圳市供水系統(tǒng)中淡水殼菜的生物學(xué)及其防治技術(shù).pdf精彩內(nèi)容。

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文新型抗腫瘤轉(zhuǎn)移多肽P肽的基因工程制備及其生物學(xué)效應(yīng)研究牛姓名學(xué)科、專監(jiān)學(xué)校代碼學(xué)號導(dǎo)師2004年5月王松梅生物證學(xué)與分予生物學(xué)10246999L臻99查錫良教授劉銀坤教授摘要劑量效應(yīng)相關(guān)關(guān)系?；蚬こ藼3對HCCLM6細胞與FN粘附的抑制作用強于15L露彝2，與83類鬣；_瓣盈在低裁鬟10，20PMOL／L囂荬穗瓣穩(wěn)裁{蕈霜與GRGDS類似，商劑量50，100PMOL／L的粘附抑制作用大于GRGDS。在與細胞共培養(yǎng)后不同時問，基工133、化合B1和GRGDS對HCCLM6細胞及SMMC．7721纓照與FN的糙黠都表璦了特異鵑攙鍘饞蠲，星璦時聞簸應(yīng)相關(guān)關(guān)系。對纓照與FN的赫辮抑裁作用強度依次為鏊工133GRGDS純合131。而且，各種多肽對HCCLM6細胞與FN的粘附抑制作用大于SMME，772L細胞。我們又利用TRANSWEU小室及鋪就MATRIGEL的TRANSWELL小窳研究腫瘤細胞的迂移戇力。在翅入100MOL／L弱鏊二轉(zhuǎn)3惹，SMMC一772T綏熬襄HCCLM6緩魏細胞的斌移和侵襲都鼴到了明顯抑制，遷移抑制率分別為32．7％和40．7％，侵襲抑制率分別為35．2％和5L3％。為了輯突基工133瓣瓣瘙綴魅綦震會疆蛋巍酶MATRIXMETALLOPROTEINASE。MMP酌影響，我們用ELISA的方法撿測了腫瘤綱胞培養(yǎng)上清中MMP1、MMP一2和MMP一9的蛋白含燎。發(fā)現(xiàn)基工B3作用后，下調(diào)了SMMC．7721細胞及HCCLM6細胞MMP一9的表達，對MMP2盼表達影響不大。我們又用明膠酶譜法遺一爹羧溺綏麓豹MMP．2褻MMP9豹含蘩及活洼，發(fā)蠛萋C133對鬃縫豹MMP一2和MMP一9的涌性形式都有不同的抑制作用。提示基工133主要是通過抑制了MMP一9的蛋白表達量以及減少MMP．2和MMP．9的活性形式的相對含最來攙割SMMC一7721綴藏及HCCLM6纓蕤懿侵襲熊力豹。露量ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)基工F33對HCCLM6緇施的MMP一1有明顯的棉制中翔，其意義遙有待進一步確定。用PETHIS表達載伴高效表達出了基工133，分離純化容易。這一載體是適合P3的表達的。表達出的基工B3具鴦抑囂4胂瘤纓臌與基質(zhì)糖附的作用，及擲鐿且申癃粲魏逶移靜作賃，并透過影穩(wěn)耱瘸綢戇豹MMP豹含量移滔瞧，最終改變緇麓的侵襲能力。因此，使用基因工程B3可能成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的新的手段。關(guān)鍵詞藏因工程粘附分子肝癌粘附轉(zhuǎn)移侵襲2

簡介：西南大學(xué)碩士學(xué)位論文糞腸球菌ZD34菌株（ENTEROCOCCUSFAECALISZD34）產(chǎn)生拮抗物質(zhì)的生物學(xué)研究姓名伍先紹申請學(xué)位級別碩士專業(yè)食品科學(xué)指導(dǎo)教師賀稚非20090601兩南人學(xué)碩十學(xué)何論文的生長穩(wěn)定期可達劍晟人的生物活性。3按優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)條件，按2％V／V的接種量接種菌齡為10H的EFAECALISZD34菌株種子發(fā)酵液于改良CM培養(yǎng)基中，34“C靜止培養(yǎng)28H后12000RPM離心5MIN制備發(fā)酵上清液，用55％的硫酸銨飽和濃度沉淀拮抗物質(zhì)，4“C放置過夜后12000RPM離心10MIN，用含20MMOL／LNACI的02MOL／L醋酸鹽緩沖液PH5O洗滌沉淀，即收集到含拮抗物質(zhì)的粗提液。將含拮抗物質(zhì)的粗提液上CM52離子交換色譜柱25CRUX20ERA，用含O10M01LNACI的02MOL／L醋酸鹽緩沖液PH5O，每隔01MOL／LNACI梯度進行步進式洗脫，在含04MOL／LNACI的O2MOL／L醋酸鹽緩沖液PH5O的洗脫管中得到一個活性峰。將有最大活性的洗脫液合并，可用分子截留量為1000DA的透析袋濃縮或用80％的硫酸銨飽和濃度沉淀過夜后12000RPM離心15RAIN，用無菌去離子水洗滌沉淀濃縮回收拮抗物質(zhì)。濃縮回收的拈抗物質(zhì)上SEPHADEXG25凝膠過濾色譜進一步純化，用無菌去離子水洗脫，得到一個活性峰。經(jīng)TRICINESDSPAGE電茫，析，試驗結(jié)果表明拈抗物質(zhì)的分F量在3000DA左右。4反相高效液相色譜層析RPHPLC再進一步分離純化SEPHADEXG25凝膠過濾色譜層析收集的活性峰。實驗在HYPERSILQDS2柱C1846MMX250MILL，伊力特，中國上進行；應(yīng)用流動相A相為95％乙腈01％三氟乙酸，B相為5％乙腈01％三氟乙酸40MIN內(nèi)A相跑梯度從40％至100％；流速為LML／MIM檢測波長為280NM。RPHPLC試驗結(jié)果表明拮抗物質(zhì)基本上得到了純化。拮抗物質(zhì)的出峰保留時間為10405MIN。收集峰尖部分，經(jīng)電噴霧質(zhì)譜法ESIMS／MS檢測分析，確定拈抗物質(zhì)的分子量約為3434DA。5拮抗物質(zhì)的理化性質(zhì)試驗研究結(jié)果表明，拮抗物質(zhì)耐PHL～13100“C處理10MIN活性基本不變，100“C處理60MIN仍有活性，但是有很人降低，表明該拮抗物質(zhì)有很好的穩(wěn)定性。拮抗物質(zhì)經(jīng)蛋白酶E37℃，PH70、蛋白酶K37℃，PH70和胰蛋白酶30℃，PH7O處理6H后均失活，進一步確定該拮抗物質(zhì)為細菌素。關(guān)鍵詞EFAECALISZD34拮抗物質(zhì)分子鑒定分離純化理化性質(zhì)

簡介：經(jīng)過多次富集和反復(fù)篩選從海洋環(huán)境中篩選到69株具有卡拉膠降解活性的菌株以產(chǎn)酶活力高、生物學(xué)性狀優(yōu)良的MCA2菌株CYTOPHAGA為出發(fā)菌株進行復(fù)合誘變和自然選育獲得了一株酶活顯著提高的突變株M244發(fā)酵液產(chǎn)酶活力達到66UML對酶解低聚糖及其磺化衍生物的生物學(xué)活性進行實驗重均分子量為1726硫含量為151﹪的新卡拉低聚糖對小鼠S180具有明顯的抗腫瘤活性處理劑量為100MGKG時的抑瘤率達到782﹪新卡拉低聚糖可以明顯促進荷瘤小鼠體內(nèi)的SOD和CAT活性可能在抗腫瘤活動中發(fā)揮重要作用體外抗氧化實驗發(fā)現(xiàn)新卡拉低聚糖能夠抑制FE誘的卵黃脂蛋白過氧化現(xiàn)象對HOFE誘發(fā)產(chǎn)生的羥自由基產(chǎn)生的清除作用并且清除效果同樣品的濃度呈明顯的正相關(guān)現(xiàn)象能抑制由HO導(dǎo)致的紅細胞溶血現(xiàn)象抑制出鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的超氧陰離子新卡拉低聚糖能夠在一定程度上抑制由環(huán)磷酰胺引起的小鼠免疫功能低下實驗組小鼠巨噬細胞的吞噬功能明顯高于對照組并能夠顯著提高血清溶菌酶的活性

簡介：磁性粒子作為一種功能載體材料特別在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展迅速。磷酸鈣CAP具有與骨礦物質(zhì)相近的組成和良好的生物相容性為再生醫(yī)學(xué)提供了一種選擇性或附加的材料用于組織缺損的修復(fù)或者治療。基于此本論文將這兩種材料結(jié)合制備出FE3OA／CAP核殼磁性納米復(fù)合材料可用于骨組織工程的支架材料。首先利用化學(xué)共沉淀法制備了FE3O4磁性納米粒子探討了沉淀劑的加入速率、溶劑體積比等因素對產(chǎn)物的結(jié)晶性、粒徑及磁性能的影響并用檸檬酸鈉對FE3O4進行表面改性。利用透射電子顯微鏡TEM測定FE3O4的粒徑大小和分散性以及X射線衍射XRD和振動樣品磁強計VSM確定粒子的晶體結(jié)構(gòu)和飽和磁化強度。然后采用溶膠凝膠法SOLGEL制備不同配比的FE3O4／ΒTCP核殼磁性納米復(fù)合粒子對產(chǎn)物的組成、結(jié)晶性、形貌進行了表征。并對溶膠凝膠法制備的FE3O4／ΒFCP與鼠成纖維細胞L929進行體外培養(yǎng)及細胞毒性的測試MTT研究了復(fù)合粒子對細胞增值的影響；與成骨細胞MG63進行體外培養(yǎng)及粒子攝入實驗研究了成骨細胞對復(fù)合粒子的貼附和攝入情況。結(jié)果表明FE3O4／ΒTCP納米粒子對細胞有良好的貼附并能使細胞正常增殖。在以上的基礎(chǔ)上在5倍模擬體液SBF中用化學(xué)沉積的方法制備了形貌更加規(guī)整有序且飽和磁化強度更高、更可控的FE3O4／CAP納米粒子。

簡介：目的紫穗槐411二烯合酶是青蒿素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶，紫穗槐411二烯是青蒿素生物合成的前體。檢測大腸桿菌中紫穗槐411二烯合酶的活性，確定能提高酵母工程菌中紫穗槐411二烯的酵母交配型。方法通過酶切，連接和轉(zhuǎn)化等常規(guī)分子生物學(xué)方法構(gòu)建大腸桿菌表達載體和酵母表達載體。采用CACL2法將大腸桿菌表達載體導(dǎo)入大腸桿菌；采用LIOAC法將該載體導(dǎo)入不同交配型的釀酒酵母中，獲得含同一載體的不同交配型釀酒酵母工程菌。用SDSPAGE和WESTERNBLOT檢測大腸桿菌工程菌誘導(dǎo)表達結(jié)果；酵母工程菌發(fā)酵產(chǎn)物通過GCMS確定紫穗槐411二烯的產(chǎn)量，從而確定能提高工程菌中青蒿素前體的交配型。結(jié)果1、對紫穗槐411二烯合酶基因進行功能鑒定，證明該基因能將FPP轉(zhuǎn)化成紫穗槐411二烯，為今后利用該基因進行青蒿素的合成生物學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。2、ADS是一種倍半萜合酶，從含ADS的釀酒酵母工程菌中檢測到了包括紫穗槐411二烯在內(nèi)的十種產(chǎn)物，再一次確證了ADS產(chǎn)物特異性不高的特點。3、不同交配型酵母工程菌對紫穗槐411二烯的產(chǎn)量無顯著性影響。為采用不同交配型酵母工程菌進行培養(yǎng)基的優(yōu)化，代謝途徑的優(yōu)化以及其他因素對工程菌產(chǎn)量影響等的研究提供了理論依據(jù)，加速青蒿素前體代謝工程的研究。4、培養(yǎng)條件影響酵母工程菌中紫穗槐411二烯的產(chǎn)量。5、構(gòu)建了酵母表達載體PYEDP60GDBR2與PYG45029CPR3。

簡介：在維生素C兩步發(fā)酵工藝中，第一步為醇糖轉(zhuǎn)化，即在葡糖桿菌作用下D山梨醇轉(zhuǎn)化為L山梨糖；第二步為糖酸轉(zhuǎn)化，在普通生酮基古龍酸菌KETOGULONIGENIUMVULGARE，俗稱小菌與其伴生菌俗稱大菌組成的混合菌系的作用下L山梨糖轉(zhuǎn)化為維生素C的前體2酮基L古龍酸KGA。維生素C兩步發(fā)酵實質(zhì)上就是D山梨醇和L山梨糖的專一性生物氧化過程。闡明這一系列生物氧化過程的生化反應(yīng)機制對于指導(dǎo)維生素C的遺傳育種甚至通過代謝工程構(gòu)建由山梨醇到KGA的一步發(fā)酵工程菌，都具有重要意義。本課題組已從小菌細胞裂解物中分離得到了催化山梨糖生物氧化的一種關(guān)鍵酶山梨糖脫氫酶SDH，該酶能夠?qū)山梨糖直接轉(zhuǎn)化為KGA；同時構(gòu)建了小菌的基因文庫，并以SDH的抗體篩選文庫，分離得到編碼SDH的基因SDH。本文在上述工作基礎(chǔ)上，首先在大腸桿菌中對山梨糖脫氫酶進行了高效表達，對表達產(chǎn)物進行了純化，研究了該酶的最適反應(yīng)溫度、最適反應(yīng)PH值、酶穩(wěn)定性、米氏反應(yīng)常數(shù)、酶的激活劑和抑制劑、金屬離子的激活與抑制作用等重要性質(zhì)。研究葡糖桿菌對山梨糖脫氫酶的影響。以氨甲?；富騂YUC為報告基因，構(gòu)建了山梨糖脫氫酶氨甲酰化酶融合表達載體，在大腸桿菌中可以同時檢測到山梨糖脫氫酶和氨甲?；富钚裕欢谄咸菞U菌中，只能檢測到氨甲?；富钚裕礄z測到山梨糖脫氫酶活性。質(zhì)粒穩(wěn)定性實驗和質(zhì)粒回轉(zhuǎn)實驗說明該質(zhì)粒在葡糖桿菌中穩(wěn)定存在。由于HYUC基因位于SDH基因下游，融合基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯是從山梨糖脫氫酶到氨甲?；?，氨甲?；冈谄咸菞U菌中表達說明包含山梨糖脫氫酶在內(nèi)的融合蛋白能夠在葡糖桿菌中轉(zhuǎn)錄并翻譯，山梨糖脫氫酶可能被宿主的酶系降解失活。通過體外實驗也證實葡糖桿菌裂解物對山梨糖脫氫酶具有降解作用。將山梨糖脫氫酶與葡糖桿菌裂解液保溫過夜后，通過SDSPAGE檢測到電泳圖譜上約60KD和49KD處出現(xiàn)兩條明顯條帶，對這兩條帶進行蛋白質(zhì)N端序列分析，結(jié)果顯示其N端的前3個氨基酸殘基均為谷氨酰胺蘇氨酸丙氨酸，推測49KD的蛋白條帶是由60KD山梨糖脫氫酶蛋白C端降解產(chǎn)生。對預(yù)測的SDH讀框N端蛋氨酸至谷氨酰胺之間23肽氨基酸序列分析，發(fā)現(xiàn)23個氨基酸中大部分氨基酸為疏水氨基酸，并與醇脫氫酶的信號肽序列有38％的同源性，推測山梨糖脫氫酶N端的23肽可能是一段信號肽，與該酶在細胞膜上的定位相關(guān)。本文成功建立了葡糖桿菌TN5誘變系統(tǒng)，實現(xiàn)了MINITN5轉(zhuǎn)座對葡糖桿菌的誘變，并從1032株突變株中篩選得到能夠利用山梨醇而不能利用山梨糖的突變株，為葡糖桿菌山梨醇代謝途徑研究及相關(guān)基因分離奠定了基礎(chǔ)。

簡介：羅伊氏乳桿菌是一類與人的機體健康有密切關(guān)系的益生菌。通過系統(tǒng)研究羅伊氏乳桿菌的生物學(xué)特性，開發(fā)出口感良好兼具多項保健功能的含羅伊氏乳桿菌發(fā)酵乳。主要研究結(jié)果如下羅伊氏乳桿菌具有良好的生長特性，在質(zhì)量濃度125％的復(fù)原乳中經(jīng)37℃培養(yǎng)12H，酸度可達67OT，活菌數(shù)可達23108CFUML。該菌株在PH值20或質(zhì)量濃度05％膽汁鹽條件下，培養(yǎng)5H殘活率仍在60％以上，對腸道細胞CACO2的粘附的體外試驗，粘附率達到129±27％，利用單層瓊脂擴散法證實該菌株有顯著抑制大腸桿菌和幽門螺旋桿菌等腸道致病菌性能。充分證實了羅伊氏乳桿菌具有優(yōu)良的生物學(xué)特性，具備抵抗人體胃酸和膽汁鹽的不良環(huán)境，有效粘附在人體腸道細胞上，并具有抑制腸道致病菌的特性，適合運用于功能性發(fā)酵乳。以羅伊氏乳桿菌為原料開發(fā)的功能性發(fā)酵乳，最優(yōu)工藝條件為全脂乳粉質(zhì)量濃度為12％，羅伊氏乳桿菌、嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的配比為051515，接種量為40％，加糖量為80％，復(fù)配穩(wěn)定劑040％。適宜發(fā)酵溫度41±1℃，發(fā)酵時間約557H，終點PH值控制在4445為佳。所制備的羅伊氏乳桿菌發(fā)酵乳滋味純正、香氣濃郁、凝乳質(zhì)地光滑、口感細膩、無不良發(fā)酵氣味，而且乳酸菌總數(shù)和羅伊氏乳桿菌總數(shù)均達到較高水平，在保證產(chǎn)品具有良好口感的同時，使產(chǎn)品的功效也達到較好水平。本研究的含羅伊氏乳桿菌的發(fā)酵乳，有效解決益生菌酸奶普遍存在的風(fēng)味口感不良，有餿味等難題，產(chǎn)品中特征風(fēng)味乙醛含量高達11MGKG以上，丁二酮也高達4MGKG，乳酸含量7500MGKG以上，醋酸含量僅1931MGKG以下，口味測試結(jié)果接受度在85分以上。產(chǎn)品在07℃冷藏條件下，保質(zhì)期內(nèi)酸度增加緩慢，28D內(nèi)羅伊氏乳桿菌活菌數(shù)仍能保存在106CFUML以上，胞外多糖含量達1926MGKG。功能性試驗表明，該發(fā)酵乳具有增強免疫力、調(diào)節(jié)腸道菌群平衡以及抗氧化功能。是一款口感良好，兼具多項保健功能的發(fā)酵乳。通過系統(tǒng)研究羅伊氏乳桿菌的生物學(xué)特性，證實其具有優(yōu)異性能，可用于功能性食品。羅伊氏乳桿菌發(fā)酵乳與國內(nèi)市場同類產(chǎn)品相比，不僅口感風(fēng)味俱佳，口味接受度高，而且經(jīng)證實具有多種保健功能。具有良好的市場推廣前景和經(jīng)濟效益。

簡介：浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)加以標注引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得浙江工業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。作者簽名徐論蘇日期2。易年歲月力7日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)浙江工業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于1、保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密囪。請在以上相應(yīng)方框內(nèi)打“√”作者簽名徐殮龔、日期勿口年F月27日導(dǎo)師躲竭句哆吼刪年，月≥7日浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)葉酸菌株的篩選、生物學(xué)特性研究和發(fā)酵條件優(yōu)化產(chǎn)葉酸菌株的篩選、生長特性的研究和發(fā)酵條件優(yōu)化摘要本研究從土壤、菠菜和水中選擇性篩選得到120株菌株，進行產(chǎn)葉酸菌株的定性篩選，得到了34株產(chǎn)葉酸的菌株，再用高效液相色譜法進行定量分析，確定6株葉酸產(chǎn)量相對較高的菌株，命名為RA一1、RA一10、RA18、RB一8、RC一6、SC一1。通過生理生化試驗，16SRDNA序列系統(tǒng)和發(fā)育樹分析，將測得的上述序列在GENBANK中進行BLAST同源性搜索，結(jié)果顯示菌株RA一1、RA一10、RA18、RB一8、RC一6與植物乳桿菌LACTOBACILLUSPLANTARUM的同源性達到了99％一100％，確定為植物乳桿菌LACTOBACILLUSPLANTARUM；SC一1與嗜熱鏈球菌STREPTOCOCCUSTHERMOPHILUS、的同源性達到了99％一100％，確定為嗜熱鏈球菌STREPTOCOCCUSTHERMOPHILUS。葉酸的檢測方法很多，本實驗選用了高效液相色譜和熒光檢測法高錳酸鉀和雙氧水，比較了這三種方法的優(yōu)缺點，結(jié)果顯示高效液相色譜法檢測O65ITG／ML葉酸標準溶液的準確率為989％，高錳酸鉀氧化熒光法為98％，雙氧水氧化熒光法相對較低，為942％；考慮實驗的操作性，高錳酸鉀熒光檢測結(jié)果與高效液相色譜法檢測結(jié)果更接近，準確性和穩(wěn)定性高，故實驗采用高錳酸鉀熒光法檢測葉酸濃度。同時研究6株菌的生長動力學(xué)特性，得出各菌株最適生長溫度，乳酸菌屬為37。C，嗜熱鏈球菌為30。C。將各菌株分別在最適生長的條件下培養(yǎng)，分別測定胞內(nèi)和胞外的葉酸含量，此時胞內(nèi)葉酸產(chǎn)量是胞