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簡(jiǎn)介：關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。、論文作者簽名蝴導(dǎo)師簽名弛日期迎單易一IO223不同溫度對(duì)OCASTANEA菌絲生長(zhǎng)的影響15224不同PH值對(duì)OCASTANEA菌絲生長(zhǎng)的影響一15225不同培養(yǎng)基對(duì)OCASTANEA茵絲生長(zhǎng)的影響1623OCASTANEA的生活史初步研究16231自然條件下OCASTANEA的生活史研究16232OCASTANEA有性型子實(shí)體誘導(dǎo)一162321OCASTANEA病葉有性型子實(shí)體誘導(dǎo)162322OCASTANEA菌絲培養(yǎng)有性型子實(shí)體誘導(dǎo)～18233OCASTANEA無(wú)性型子實(shí)體誘導(dǎo)1824OCASTANEA與板栗褐緣葉枯病及板栗擬莖點(diǎn)霉的關(guān)系18241不同時(shí)間OCASTANEA與板栗擬莖點(diǎn)霉的分離頻率及比例變化18242OCASTANEA子實(shí)體的著生位置與板栗褐緣葉枯病病斑的關(guān)系18243離體葉片接種法對(duì)兩菌的致病性進(jìn)行初步測(cè)定19244OCASTANEA與板栗擬莖點(diǎn)霉的營(yíng)養(yǎng)體親和性試驗(yàn)193結(jié)果與分析2031OCASTANEA鑒定20311OCASTANEA微觀形態(tài)一203111OCASTANEA無(wú)性型形態(tài)203112OCASTANEA有性型形態(tài)20312菌絲培養(yǎng)性狀、菌落形態(tài)22313ITS序列獲得和系統(tǒng)發(fā)育分析2232OCASTANEA菌絲的生物學(xué)特性24321不同碳源對(duì)OCASTANEA菌絲生長(zhǎng)的影響24322不同氮源對(duì)OCASTANEA菌絲生長(zhǎng)的影響25323不同溫度對(duì)OCASTANEA菌絲生長(zhǎng)的影響27324不同PH值對(duì)OCASTANEA菌絲生長(zhǎng)的影響一28325不同培養(yǎng)基對(duì)OCASTANEA菌絲生長(zhǎng)的影響2933OCASTANEA的生活史初步研究30331自然條件下OCASTANEA的生活史研究30332OCASTANEA有性型子實(shí)體誘導(dǎo)30

簡(jiǎn)介：FOXP3是FOXFKHEADBOX家族轉(zhuǎn)錄因子中的一員，是TREG細(xì)胞TREG的相對(duì)特異性標(biāo)志，同時(shí)對(duì)TREG的發(fā)生、發(fā)育、功能的維持與發(fā)揮方面起關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)轉(zhuǎn)染表達(dá)外源性人FOXP3（HFOXP3）或鼠FOXP3（MFOXP3）可使非TREG細(xì)胞具有類似TREG細(xì)胞樣的表型及抑制JURKATT細(xì)胞增殖功能。人類免疫缺陷病毒1型HIV1基因編碼的反式激活蛋白（TAT）中的蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域PTD能夠高效、快速地?cái)y帶外源性蛋白穿入幾乎所有的真核細(xì)胞，而進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。由于其具有核定位信號(hào)NLS，因此也能定位于細(xì)胞核內(nèi)。同時(shí)PTD具有不影響其攜帶的目的蛋白功能的特點(diǎn)。目的研究PTDHFOXP3、PTDEGFP△E251HFOXP3、PTDEGFPHFOXP3融合蛋白對(duì)T細(xì)胞活化、增殖及其免疫調(diào)節(jié)功能的影響，為最終應(yīng)用于器官移植和自身免疫性疾病治療藥物奠定基礎(chǔ)。方法利用基因重組和定點(diǎn)突變技術(shù)構(gòu)建PET28APTDHFOXP3、PET28APTDEGFP△E251HFOXP3、PET28APTDEGFPHFOXP3原核表達(dá)載體，并在大腸埃希菌ROSETTADE3中表達(dá)融合蛋白，經(jīng)NI2IMAC親和柱純化融合蛋白和脫鹽柱除鹽獲得純化蛋白。WESTERNBLOT技術(shù)檢測(cè)融合蛋白表達(dá)的正確性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)融合蛋白穿越細(xì)胞膜進(jìn)入人急性白血病T淋巴細(xì)胞瘤株JURKATT細(xì)胞中的能力和量效關(guān)系，WESTERNBLOT分析和共聚焦顯微鏡觀察確認(rèn)融合蛋白細(xì)胞內(nèi)定位。通過(guò)淋巴細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)初步分析融合蛋白對(duì)T細(xì)胞活化增殖的影響。結(jié)果成功構(gòu)建了PET28APTDHFOXP3、PET28APTDEGFP△E251HFOXP3、PET28APTDEGFPHFOXP3融合蛋白表達(dá)載體，表達(dá)并純化了人PTDHFOXP3、PTDEGFP△E251HFOXP3、PTDEGFPHFOXP3融合蛋白。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析證實(shí)表達(dá)的融合蛋白均能高效的轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，且發(fā)現(xiàn)融合蛋白在640NM，與細(xì)胞共育2H時(shí)蛋白穿入細(xì)胞的效率最高；經(jīng)WESTERNBLOT檢測(cè)和共聚焦顯微鏡觀察確認(rèn)融合蛋白能夠進(jìn)入細(xì)胞漿和細(xì)胞核；同時(shí)經(jīng)細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)證明PTDHFOXP3和PTDEGFPHFOXP3融合蛋白能明顯抑制JURKATT細(xì)胞的活化增殖能力。結(jié)論成功表達(dá)具有生物學(xué)活性的PTDHFOXP3、PTDEGFP△E251HFOXP3、PTDEGFPHFOXP3融合蛋白，為進(jìn)一步更好地研究HFOXP3的免疫抑制功能和PTDHFOXP3融合蛋白的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：剛地弓形蟲(chóng)是一類嚴(yán)格的胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)，呈全世界分布，可感染哺乳動(dòng)物，鳥(niǎo)類，甚至冷血?jiǎng)游?，弓形蟲(chóng)有如此廣泛的宿主，除了與它強(qiáng)大的入侵機(jī)制有關(guān)之外，還和它強(qiáng)大的免疫逃避機(jī)制和適應(yīng)并改變宿主細(xì)胞環(huán)境的能力有著密切的關(guān)系。這也是導(dǎo)致弓形蟲(chóng)病難以防控的主要原因。弓形蟲(chóng)致密顆粒蛋白GRA16、GRA24、TGIST可利用宿主細(xì)胞信號(hào)通路進(jìn)入宿主細(xì)胞核，調(diào)控宿主細(xì)胞表達(dá)，改變宿主細(xì)胞的免疫狀態(tài)和細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，以實(shí)現(xiàn)免疫逃避和長(zhǎng)期寄生。致密顆粒蛋白GRA17和GRA23可在納蟲(chóng)泡膜上形成微孔，該孔可幫助弓形蟲(chóng)攝取宿主營(yíng)養(yǎng)，致密顆粒蛋白MAF1、GRA3和GRA5參與弓形蟲(chóng)對(duì)宿主細(xì)胞線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的招募，幫助弓形蟲(chóng)利用宿主營(yíng)養(yǎng)。可以說(shuō)，致密顆粒蛋白對(duì)于弓形蟲(chóng)胞內(nèi)寄生十分重要。GRA1是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的致密顆粒蛋白，但關(guān)于它的生物學(xué)功能我們知之甚少，研究它的生物學(xué)功能可以為進(jìn)一步理解弓形蟲(chóng)胞內(nèi)寄生的特性提供幫助，為以后的弓形蟲(chóng)研究奠定理論基礎(chǔ)。本研究以弓形蟲(chóng)致密顆粒蛋白1（TGGRA1）為研究對(duì)象，利用CRISPRCAS9基因編輯系統(tǒng)和四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)TETOFF對(duì)TATI蟲(chóng)株中的GRA1進(jìn)行條件性敲除，成功構(gòu)建中間蟲(chóng)株TATITETO7GRA1蟲(chóng)株，對(duì)其進(jìn)行ATC處理，發(fā)現(xiàn)GRA1的表達(dá)不能被關(guān)閉，說(shuō)明TETOFF系統(tǒng)不適用于GRA1的敲除。隨后改用CRELOXP條件性敲除系統(tǒng)對(duì)RH△HXGPRT蟲(chóng)株中的GRA1進(jìn)行條件性敲除，成功構(gòu)建中間蟲(chóng)株RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株，復(fù)制實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證TGGRA1對(duì)弓形蟲(chóng)胞內(nèi)寄生的重要性同時(shí)，利用BIOID技術(shù)，富集GRA1鄰近的蛋白，試圖發(fā)現(xiàn)更多潛在的致密顆粒蛋白和可能的GRA1互作蛋白。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下1GRA1蛋白原核表達(dá)和多克隆抗體的制備構(gòu)建PESUMOGRA1原核表達(dá)質(zhì)粒，該質(zhì)粒在表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞BL21DE3中能夠順利表達(dá)，且蛋白表達(dá)在上清，將純化好的SUMOGRA1蛋白進(jìn)行動(dòng)物免疫，收集免疫后的動(dòng)物血清，用ELISA檢測(cè)抗體效價(jià)，結(jié)果顯示該抗GRA1的多克隆抗體具有較高水平的抗體效價(jià)，經(jīng)WESTERNBLOT檢測(cè)該抗體可特異性識(shí)別TGGRA1。2TATITETO7GRA1蟲(chóng)株的構(gòu)建利用TETOFF系統(tǒng)對(duì)GRA1基因進(jìn)行條件性敲除。首先，構(gòu)建能夠識(shí)別GRA1基因座的PSAG1∷CAS9U6∷SGGRA1的CRISPR質(zhì)粒和同源替換的模板質(zhì)粒PUC19TETO7GRA1。然后將擴(kuò)增出來(lái)的同源替換片段5UTRDHFRTETO7GRA13UTR和PSAG1∷CAS9U6∷SGGRA1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到TATI蟲(chóng)株的速殖子中，乙胺嘧啶進(jìn)行藥物篩選，再通過(guò)有限稀釋法進(jìn)行TATITETO7GRA1單克隆蟲(chóng)株的篩選，單克隆經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后用PCR進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示成功獲得TATITETO7GRA1蟲(chóng)株。用ATC處理TATITETO7GRA1蟲(chóng)株，經(jīng)間接免疫熒光檢測(cè)，GRA1蛋白的表達(dá)并未被關(guān)閉，蟲(chóng)株生長(zhǎng)也很正常。說(shuō)明TETOFF系統(tǒng)不適用于GRA1的敲除。3RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株的構(gòu)建利用CRELOXP系統(tǒng)對(duì)GRA1基因進(jìn)行條件性敲除。構(gòu)建同源替換的模板質(zhì)粒PUC19GRA1YFP，然后將擴(kuò)增出來(lái)的同源替換片段5UTRTUBULINLOXPGRA1LOXPYFPHXGPRT3UTR和PSAG1∷CAS9U6∷SGGRA1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到RH△HXGPRT蟲(chóng)株的速殖子中，用黃嘌呤和霉酚酸進(jìn)行藥物篩選，再通過(guò)有限稀釋法進(jìn)行RH△HXGPRTLOXPGRA1單克隆蟲(chóng)株的篩選，單克隆經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后用PCR和間接免疫熒光進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示成功獲得RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株。4GRA1敲除株表型研究RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株轉(zhuǎn)染能夠表達(dá)CRE重組酶的PMINCREYFP質(zhì)粒，CRE重組酶會(huì)識(shí)別LOXP序列，對(duì)RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株中的GRA1基因進(jìn)行剪切，從而實(shí)現(xiàn)GRA1的敲除。將GRA1敲除株與RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株進(jìn)行胞內(nèi)復(fù)制實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)GRA1敲除株和RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株相比，GRA1敲除株的復(fù)制能力顯著性下降。5BIOID技術(shù)富集GRA1的周邊蛋白用BIOTIN標(biāo)記經(jīng)過(guò)遺傳改造的RH△HXGPRTGRA1BIRA蟲(chóng)株，經(jīng)過(guò)24H作用，通過(guò)WESTERNBLOT檢測(cè)到RH△HXGPRTGRA1BIRA蟲(chóng)株有被生物素標(biāo)記上的特異蛋白，質(zhì)譜分析這些特異蛋白。經(jīng)過(guò)分析和對(duì)比，得到了17個(gè)已知GRA蛋白，同時(shí)找到了39個(gè)未知蛋白和16個(gè)已知蛋白。經(jīng)定位實(shí)驗(yàn)鑒定，17個(gè)未知蛋白中有2個(gè)是致密顆粒蛋白，對(duì)16個(gè)已知蛋白進(jìn)行功能分析，推測(cè)MYR1和GRA1存在互作的可能性，但它們之間具體的關(guān)系還需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本研究主要利用CRELOXP條件性敲除系統(tǒng)和CRISPRCAS9技術(shù)在RH△HXGPRT蟲(chóng)株中對(duì)GRA1基因進(jìn)行條件性敲除。GRA1敲除株和RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲(chóng)株比較得出GRA1敲除株的復(fù)制能力顯著性下降。同時(shí)通過(guò)BIOID技術(shù)和LCMSMS鑒定出72個(gè)GRA1周邊的蛋白，并通過(guò)定位實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)新的致密顆粒蛋白。以上結(jié)果為弓形蟲(chóng)免疫逃避機(jī)制和適應(yīng)并改變宿主細(xì)胞環(huán)境機(jī)制的研究進(jìn)一步提供理論基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的本課題組致力于發(fā)形霞水母（CYANEACAPILLATA，CCAPILLATA）來(lái)源的活性物質(zhì)及相關(guān)機(jī)理研究多年。以往研究中，我們發(fā)現(xiàn)水母觸手表現(xiàn)出超強(qiáng)創(chuàng)傷修復(fù)能力，且觸手中刺細(xì)胞具有快速增殖的特點(diǎn)，提示水母觸手中可能存在高活性促生長(zhǎng)因子。在分析CCAPILLATA觸手提取物TENTACLEEXTRACT，TE的細(xì)胞活性時(shí)也觀察到一個(gè)有趣現(xiàn)象，即低濃度的TE可以誘發(fā)細(xì)胞增殖。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，我們推測(cè)TE中含有類似促增殖活性物質(zhì)。本課題組前期建立了CCAPILLATA觸手組織CDNA文庫(kù)，分析發(fā)現(xiàn)其中有四條血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VULARENDOTHELIALGROWTHFACT，VEGF類似序列，為我們從TE中提取促生長(zhǎng)活性物質(zhì)提供了重要理論依據(jù)。組合應(yīng)用多種分離技術(shù)，我們成功從TE中分離得到具有促生長(zhǎng)活性的一個(gè)顆粒蛋白樣多肽生長(zhǎng)因子并命名為CCGRN1CYANEACAPILLATAGRANULIN1CCGRN1。因此，本課題將重點(diǎn)研究TE和CCGRN1的促生長(zhǎng)活性及其作用機(jī)制。通過(guò)本課題的研究，我們希望可以為將來(lái)某些特殊疾病或環(huán)境造成的傷口難愈合情況提供新的治療思路。方法第一部分TE的生物學(xué)活性研究首先，采用CCK8法檢測(cè)TE對(duì)HUVECS細(xì)胞活力的影響。然后，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TE對(duì)HUVECS細(xì)胞周期進(jìn)程的影響并檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CYCLINB1和CYCLIND1表達(dá)的影響。隨后，采用WESTERNBLOTTING檢測(cè)TE對(duì)HUEVCS中生長(zhǎng)相關(guān)信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)情況，包括PI3KAKT，ERK12MAPK，JNKMAPK，P38MAPK和NFΚB通路以及下游CASPASE3，8，9和CYTOC蛋白的表達(dá)水平同時(shí)，采用免疫熒光技術(shù)對(duì)信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)情況進(jìn)一步驗(yàn)證。隨后，選擇TE激活的信號(hào)通路對(duì)應(yīng)的抑制劑，檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的影響。最后，采用劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TE對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響。第二部分CCGRN1的生物學(xué)活性研究首先，采用CCK8法檢測(cè)CCGRN1對(duì)HUVECS的細(xì)胞活力的影響。其次，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CCGRN1對(duì)HUVECS細(xì)胞周期進(jìn)程的影響，并檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CYCLINB1和CYCLIND1的表達(dá)變化情況。然后，采用WESTERNBLOTTING檢測(cè)CCGRN1對(duì)HUEVCS中生長(zhǎng)相關(guān)信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)情況，主要包括PI3KAKT，ERK12MAPK，JNKMAPK和NFΚB通路同時(shí)，采用免疫熒光技術(shù)對(duì)信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)情況做進(jìn)一步的驗(yàn)證。隨后，選擇CCGRN1激活的信號(hào)通路對(duì)應(yīng)的抑制劑，檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的影響。最后，采用劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CCGRN1的促細(xì)胞遷移能力。同時(shí)，選取商品化血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF作為對(duì)照，并行分析其與CCGRN1的生物學(xué)活性及作用機(jī)制。結(jié)果第一部分TE的生物學(xué)活性研究CCK8法檢測(cè)結(jié)果顯示，高劑量TE抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，使HUVECS細(xì)胞活力呈劑量依賴性降低而低劑量TE可以促進(jìn)細(xì)胞活力明顯升高。此外，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，TE可以促進(jìn)細(xì)胞從G1期過(guò)渡到細(xì)胞分裂活躍期（S和G2期），加快細(xì)胞周期進(jìn)程TE還可以促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)明顯增加。在信號(hào)通路方面，TE可以激活HUVECS中PI3KAKT，ERK12MAPK以及JNKMAPK通路，而對(duì)P38MAPK和NFΚB通路以及下游信號(hào)通路中包括CASPASE3，8，9以及CYTOC蛋白表達(dá)沒(méi)有影響免疫熒光檢測(cè)結(jié)果證實(shí)TE確實(shí)可以激活PI3KAKT，ERK112MAPK以及JNKMAPK通路。信號(hào)通路干預(yù)結(jié)果顯示PD98059可以抑制CYCLINB1和CYCLIND1的表達(dá)，而LY294002和SP600125對(duì)其沒(méi)有影響，說(shuō)明TE主要是通過(guò)激活ERK12MAPK通路上調(diào)細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的。最后，細(xì)胞劃痕修復(fù)試驗(yàn)結(jié)果表明，TE可以誘導(dǎo)HUVECS發(fā)生細(xì)胞遷移。第二部分CCGRN1的生物學(xué)活性研究CCK8法檢測(cè)結(jié)果顯示，CCGRN1和VEGF均對(duì)HUVECS活力具有時(shí)間和劑量依賴性促進(jìn)作用。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，兩者均可以促進(jìn)細(xì)胞從G1期過(guò)渡到細(xì)胞分裂活躍期（S和G2期），加快細(xì)胞周期進(jìn)程此外，兩者還可以促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白表達(dá)增加。在信號(hào)通路激活方面，WESTERNBLOTTING結(jié)果顯示CCGRN1和VEGF均可以激活PI3KAKT和ERK12MAPK通路，而對(duì)JNKMAPK和NFΚB通路沒(méi)有影響免疫熒光檢測(cè)結(jié)果證實(shí)了CCGRN1和VEGF確實(shí)可以激活PI3KAKT和ERK12MAPK通路。信號(hào)通路干預(yù)結(jié)果顯示PD98059可以抑制CYCLINB1和CYCLIND1的表達(dá)，而LY294002沒(méi)有影響，說(shuō)明CCGRN1主要是通過(guò)激活ERK12MAPK通路上調(diào)細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的。最后，細(xì)胞劃痕修復(fù)試驗(yàn)結(jié)果表明，CCGRN1和VEGF均可以誘導(dǎo)HUVECS發(fā)生細(xì)胞遷移。結(jié)論低濃度TE可以提高細(xì)胞活力，加快細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，提示TE具有促細(xì)胞增殖效應(yīng)在作用機(jī)制方面，TE可以磷酸化激活PI3KAKT，ERK12MAPK和JNKMAPK通路，而其中的ERK12MAPK通路與細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)增加密切相關(guān)，提示其可能與促細(xì)胞增殖有關(guān)最后，細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)表明TE可以誘導(dǎo)細(xì)胞遷移。另一方面，CCGRN1具有與VEGF類似的細(xì)胞活力效應(yīng)，可以加快細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，表明CCGRN1具有與VEGF類似的促細(xì)胞增殖效應(yīng)在作用機(jī)制方面，CCGRN1也與VEGF類似，主要激活PI3KAKT和ERK12MAPK通路，而其中的ERK12MAPK通路與細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)增加密切相關(guān)最后，通過(guò)細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)表明CCGRN1與VEGF均可以誘導(dǎo)細(xì)胞遷移?；贑CGRN1和VEGF在促進(jìn)細(xì)胞增殖方面具有很大的共性，我們認(rèn)為CCGRN1作為一種海洋生物來(lái)源的多肽，對(duì)某些特殊疾病或環(huán)境造成的傷口難愈合情況可能具有良好的應(yīng)用前景。

簡(jiǎn)介：廈門大學(xué)碩士學(xué)位論文海水養(yǎng)殖魚(yú)類寄生新貝尼登蟲(chóng)NEOBENEDENIA的數(shù)量形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)研究姓名張紋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師蘇永全王軍200251擅要新貝尼登蟲(chóng)和梅氏新貝尼登蟲(chóng)的遺傳相似度高達(dá)997％，在337BP同源序列中僅存在一個(gè)堿基的差異。而同為梅氏新貝尼登蟲(chóng)，莆田海區(qū)養(yǎng)殖大黃魚(yú)魚(yú)體上和廈門海區(qū)養(yǎng)殖高體鱺魚(yú)體上蟲(chóng)體的遺傳相似度為9941％。經(jīng)與3種貝尼登蟲(chóng)的同源序列比較后發(fā)現(xiàn)，貝尼登屬三個(gè)蟲(chóng)種BENEDENIALU和NI、BROHDEI和置SERIOLAE種間的遺傳差異為208～1173％，甚至大于囪己新貝尼登蟲(chóng)和梅氏新貝尼登蟲(chóng)O3％的差異，結(jié)果與RAPD分析相似，進(jìn)一步在分子水平上印證了紀(jì)新貝尼登蟲(chóng)和梅氏新貝尼登蟲(chóng)應(yīng)為同一蟲(chóng)在源序列目3個(gè)科10個(gè)屬12個(gè)蟲(chóng)種的28SRDNA基因同介于215～1208％，屬間的距離為5182043％，科間的距離為19702909％。以MP和UPGMA方法作出的分子系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)與傳統(tǒng)分類系統(tǒng)基本一致，但兩者在科的水平上有所不同，MP系統(tǒng)樹(shù)為CAPSAJIDAE，MONOCOTYLIDAE，UDONELLIDAE，UPGMA系統(tǒng)樹(shù)為CAPSALIDAE，UDONELLIDAE，MONOCOTYLIDAE。28SRDNA基因的該序列片段被證明非常適于單殖吸蟲(chóng)的分子系統(tǒng)學(xué)研究。關(guān)鍵詞新貝尼登蟲(chóng)數(shù)量分類RAID28SRDNA序列分析2

簡(jiǎn)介：SCREENINGOFPLANTGROWTHPROMOTINGRHIZOBACTERIAINTOBACCOANDITSBIOLOGICALEFFECTSBY％NSHISUPERVISEDBYPROFBIAOSHENATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORDOCTORALDEGREEOFAGRICULTURALSCIENCESCOMPLETEDINMAY，2015本研究?jī)?nèi)容由1農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)公益性行業(yè)科研專項(xiàng)利用有機(jī)類肥料調(diào)控我國(guó)土壤微生物區(qū)系關(guān)鍵技術(shù)研究2011030042貴州省煙草總公司重點(diǎn)項(xiàng)目貴州植煙土壤微生物修復(fù)關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用201018、3中國(guó)煙草總公司重點(diǎn)項(xiàng)目貴州煙草土壤生態(tài)修復(fù)關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用11020100219共同資助特此致謝

簡(jiǎn)介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文犬細(xì)小病毒的分離鑒定與生物學(xué)特性研究姓名周云朵申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師劉正飛201106華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2011屆碩士研究生學(xué)位論文ABSTACTCANINEPARVOVIRUSCEVEMERGEDIN1978ANDSPREADEDALLOVERTHEWORDSINCETHENTHISDISEASEBECOMESENDEMICWORDWIDETHISSTUDYAIMSTOOBTAINCPVSTRAINSINTHEMIDDLEOFCHINAANDSTUDYTHEIRGENOTYPES，EPIDEMIOLOGYBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDPATHOGENICITY42FECESSWABSTHATWEREPOSITIVEINCOLLOIDALGOLDTESTWERECOLLECTEDFROMPETCLINICSINWUHANTHENTHEYWEREPASSAGEDINFELINEKIDNEY81F81ANDOBSERVATIONBYTRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPIC2PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDACCORDINGTOCONSERVATIVECAPSIDPROTEIN2VP2ANDTHEOTHERPAIRWERESYNTHESIZEDACCORDINGTEFERENCEANOTHER4PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDTOCLONETHEORFOFCPVTHESTRAINSWEREPURIFIEDBYPLAQUEASSAYANDTHENONESTEPGROWTHCURVESWEREOBTAINEDSUBSEQUENTLYTENSECTIONSWEREMADEATTHEENDANIMALEXPERIMENTWASCARRIEDOUT28CPVSTRAINSWEREISOLATED390BP，583BPAND1755BPNUCLEOTIDESEQUENCESWEREACQUIREDAFTERSEQUENCINGANDANALYZINGTHEGENEFRAGMENTS，THERESULTSHOWSTHATALLTHEISOLATESWERECPVWHILE25WERECPV2AAND3WERECPV2BTHESYSTEMPHYLOGENETICANALYSISEXPLORESTHEISOLATES5AND10WERECLOSETOTHECHINESEISOLATES，F(xiàn)ARTHERFROMTHEISOLATESINEUROPEANDTHEAMERICAS，F(xiàn)ARTHESTFROMTHEEARLIESTISOLATETHECURVESSHOWTHEGROWTHOFCPVATDIFFERENTSTAGESAFTERINFECTIONTHEREPRODUCTIVEACTIVITYCOULDREACHORBEYOND105一PFU／M1THERESULTALSOSHOWSTHATTHETWOCURVESWERESLIGHTLYDIFFERENTATTHEBEGINNINGTHECURVEACCORDINGTOTHEEXPERIMENTTHATTHECELLSWEREINFECTEDWHENTHECELLHADPASSAGED8HOURSSHOWEDDESCENDINGATTHEBEGINNINGHOWERE，ANOTHERCURVEWASRISINGALLTHEISOLATESCOULDAGGLUTINATEREDBLOODCELLSOFSWINEUNDERCERTAINCONDITIONSANDTHEAGGLUTINATIONCANBEINHIBITEDTHEPHOTOGRAPHSOFTENSHOWTHATMITOCHONDRIAARESWELLINGTHEORFSOFTHE2ISOLATESWEREOBTAINEDFINALLYANIMALEXPERIMENTSHOWSTHATEVERYDOGHADCLINICALSYMPTOMSINDIFFERENTDEGREES，SUCHASVOMITINGANDBLOODYEXCREMENTAFTERWETESTEDTHEANUSSWABSCOLLECTEDATDIFFERENTTIME，WEFOUNDTHATTHEDOGSHADDISCHARGEVIRUSANDTHEHIGHESTQUANTITYCANREACH102一TCID50THERESULTSOFDISSECTIONREFLECTTHATTHEREARENECROSISINTHESMALLINTESTINEANDTHEMYOCARDIUMBECOMESTHINNERAFTERPATHOLOGICALSECTIONSWEREMADE，OBSERVATIONWERETAKENUPANDTHERESULTSHOWSTHATMYOCARDIALCELLSAREMETAMORPHICANDNECROTICTHISSTUDYPROVIDESGROUNDWORKFORFURTHERSTUDYOFMOLECULARBIOLOGYANDPATHOPOIESIAOFCPVKEYWORDSCANINEPARVOVIRUS；ISOLATION；TEN；ANIMALASSAYⅡ

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)單位代碼學(xué)號(hào)洳≥≥、嘧博士學(xué)位論文⑧中文論文題目鱉至鏊壁鯉亡塹煎望絲掛性生塹堂適性區(qū)基笠盟狃望盈窒英文論文題目魚(yú)塹亟叢西SL亟盈N亟BIQQGIQ△Q叢造QFEN圣Y豳叢I￡HY旦盥Y墨丞星墨鹽盟BQY盈』曼Y塹亟墜西￡叢金血塹IS皿￡申請(qǐng)人姓名至之登指導(dǎo)教師塑攝基數(shù)援專業(yè)名稱掛疊經(jīng)進(jìn)動(dòng)物魚(yú)差研究方向蜜蝰型堂所在學(xué)院動(dòng)物型堂堂院浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得逝姿態(tài)堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名匆嗍簽字日期訓(xùn)，多年鄉(xiāng)月各日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解迸江大鱟有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)盤姿盤堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者簽名勁確導(dǎo)師簽名葉～八‘M簽字日期矽力年多月礦日簽字日期矽13年多月孑日

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文MTERFD2的表達(dá)調(diào)控機(jī)制及生物學(xué)功能的初步研究MTERFD2EXPRESSIONPROFILEPRELIMINARYSTUDYOFITSREGULATIONMECHANISMBIOFUNCTION徐倩倩徐倩倩哈爾濱工業(yè)大學(xué)2011年6月CLASSIFIEDINDEXQ9514UDC57721DISSERTATIONFTHEMASTERDEGREEINSCIENCEMTERFD2EXPRESSIONPROFILEPRELIMINARYSTUDYOFITSREGULATIONMECHANISMBIOFUNCTIONCIDATEQIANQIANXUSUPERVISPROFQIONGWUACADEMICDEGREEAPPLIEDFMASTEROFSCIENCESPECIALITYBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGYAFFILIATIONSCHOOLOFSCIENCEDATEOFDEFENCEJUNE2011DEGREECONFERRINGINSTITUTIONHARBININSTITUTEOFTECHNOLOGY

簡(jiǎn)介：背景自身免疫性肝炎AUTOIMMUNEHEPATITISAIH是一種病因和發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚與機(jī)體自身免疫有關(guān)的肝臟疾病。主要特點(diǎn)是循環(huán)中出現(xiàn)自身抗體高球蛋白血癥以及病理組織學(xué)界面性肝炎、漿細(xì)胞浸潤(rùn)?；谧陨砜贵w譜特點(diǎn)分為兩種亞型1型循環(huán)中出現(xiàn)抗核抗體ANA和或抗平滑肌抗體SMA2型循環(huán)中出現(xiàn)抗肝腎微粒體抗體LKM1和或3和或抗肝細(xì)胞漿1型抗體LC1其中1型最為常見(jiàn)。但用于分型的自身抗體多不具有特異性亦不具備預(yù)測(cè)疾病活動(dòng)的能力。近年來(lái)大量研究表明去唾液酸糖蛋白受體抗體在自身免疫肝炎有高度的特異性而針對(duì)該受體抗在1型自身免疫肝炎生物學(xué)特性中的意義報(bào)道較少。對(duì)抗去唾液酸糖蛋白受體抗體在1型自身免疫性肝炎患者中臨床、免疫、生化、病理特點(diǎn)及治療應(yīng)答反應(yīng)進(jìn)行分析無(wú)疑能提高對(duì)1型自身免疫性肝炎的診治認(rèn)識(shí)。目的探討抗去唾液酸糖蛋白受體抗體AUTOANTIBODIESTOASIALOGLYCOPROTEINRECEPTANTIASGPR陽(yáng)性和陰性1型自身免疫性肝炎TYPE1AUTOIMMUNEHEPATITISAIH1在臨床、生化、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、組織學(xué)特點(diǎn)及其治療應(yīng)答反應(yīng)的差異。方法應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析法ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA檢測(cè)79例確診的AIH1患者血清中ANTIASGPR將其分為ANTIASGPR陽(yáng)性組及陰性組。結(jié)果1ANTIASGPR陽(yáng)性的患者為5975％59例陽(yáng)性患者中男性7例女性52例平均年齡491±86歲20例陰性患者中男性2例女性18例平均年齡471±79歲。2在年齡、性別、癥狀、ALT、AST、ALP、GGT、ANA、SMA、DR3、DR4比較陽(yáng)性組患者與陰性組患者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3陽(yáng)性組患者較陰性組患者血清中存在高水平的Γ球蛋白和IGG及低水平C3P4CD38、CD138免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目及病理炎癥分級(jí)兩組差異相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P5治療后陽(yáng)性組緩解率低于陰性組P結(jié)論1ANTIASGPR在1型自身免疫性肝炎患者中有較高的表達(dá)率。2ANTIASGPR與1型自身免疫性肝炎患者疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)。3ANTIASGPR有一定的預(yù)測(cè)1型自身免疫性肝炎患者治療應(yīng)答的能力。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多黃石王祠村農(nóng)田Cd污染修復(fù)對(duì)土壤生物學(xué)性質(zhì)的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10712研究生學(xué)號(hào)2014060400⑧西北農(nóng)林針教大學(xué)屆攻讀博士學(xué)位研究生學(xué)位畢業(yè)論文石油污染及施氮修復(fù)對(duì)灌草枯落物分解及土壤生物學(xué)性質(zhì)的影響學(xué)科專業(yè)研究方向研究生指導(dǎo)教師完成時(shí)間叢堡繾量藍(lán)送絲墮擅叢堡掛王擺瑟墮?quán)缧蜕萌净@2Q生Q旦R1I目陜西楊凌洲0墮L止㈣G；等互㈣2㈣M纛孤㈣3躬I省IIRFIIII11111IRIIIIIIPIIIIIIIIIY3242990研究生學(xué)位畢業(yè)論文的獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的博士學(xué)位畢業(yè)論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究結(jié)果論文中的研究數(shù)據(jù)及結(jié)果的獲得完全符合學(xué)校關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定，如果違反此規(guī)定，一切后果與法律責(zé)任均由本人承擔(dān)。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究結(jié)果，也不包含其他人和自己本人已獲得西北農(nóng)林科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同事對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文的致謝中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名致丸咴時(shí)間九，7年』月√日導(dǎo)師指導(dǎo)研究生學(xué)位畢業(yè)論文的承諾本人承諾我的博士研究生玖舭喝≮所呈交的博士學(xué)位畢業(yè)論文是在我L指導(dǎo)下獨(dú)立開(kāi)展研究工作及取得的研究結(jié)果，屬于我現(xiàn)崗職務(wù)工作的結(jié)果，并嚴(yán)格按照學(xué)校關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定而獲得的研究結(jié)果。如果違反學(xué)校關(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定，我愿接受按學(xué)校有關(guān)規(guī)定的處罰處理并承擔(dān)相應(yīng)導(dǎo)師連帶責(zé)任。導(dǎo)師簽名夤，降時(shí)間聲廠月矽日

簡(jiǎn)介：幽門螺桿菌（HPYLI）為革蘭陰性微需氧菌，主要定植于感染患者的胃部，是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍的重要致病因素，與胃癌、胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)，世界衛(wèi)生組織已將其列為一類致癌因子。HPYLI感染率極高，據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界人群感染率超過(guò)50％，我國(guó)感染人群超過(guò)6億人，在某些地局部區(qū)感染率甚至達(dá)到90％以上。雖然HPYLI發(fā)現(xiàn)至現(xiàn)在已有超過(guò)27年的歷史，對(duì)其病原病因?qū)W、流行病學(xué)、致病機(jī)制、毒力因子、診斷治療預(yù)防方法等也進(jìn)行了非常深入的研究，但仍然有很多問(wèn)題仍不是很清楚，如HPYLI感染的持續(xù)性和慢性化機(jī)制，HPYLI感染與胃癌之間的關(guān)系，HPYLI感染率高但發(fā)病率低的原因等等。深入闡明其致病機(jī)制，對(duì)有針對(duì)性地開(kāi)發(fā)治療的創(chuàng)新藥物、設(shè)計(jì)治療方案、研制有效的疫苗、制定預(yù)防控制措施具有重要的理論指導(dǎo)意義。HPYLI能夠成功定植于宿主胃部特殊的生理環(huán)境中，粘附胃上皮細(xì)胞進(jìn)而引起多種胃部疾病，與其所具有的種類和數(shù)量眾多的致病因子密切相關(guān)，如與HPYLI毒力直接相關(guān)的致病因子CAGA、VACA、UREASE、HSP60、NAP、OIPA、DUPA等；與粘附和定植相關(guān)的BABA、SABA、SABB、ALPA、ALPB、ICEA、HPAA以及最近幾年發(fā)現(xiàn)的新的粘附分子HP1188和HP1430等；與耐酸相關(guān)的有碳酸酐酶、雙組份系統(tǒng)蛋白CRDSCRDR、ARSRARSS等。這些蛋白都與HPYLI的感染和致病有著密切的關(guān)系。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)是其發(fā)揮功能的基礎(chǔ)，致病因子發(fā)揮作用與其獨(dú)特的空間結(jié)構(gòu)密切相關(guān)?；诖?，本研究擬采用結(jié)構(gòu)生物學(xué)的方法，解析與HPYLI致病和重要生理功能密切相關(guān)的一些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，通過(guò)結(jié)構(gòu)明確其發(fā)揮功能和致病的分子機(jī)制，為HPYLI感染和致病機(jī)制研究提供理論指導(dǎo)。本研究共篩選了包括毒力因子、粘附分子、耐酸相關(guān)蛋白以及參與重要生理功能的酶類等20個(gè)以上的靶標(biāo)，目前成功解析了其中兩個(gè)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，另有三個(gè)蛋白結(jié)晶，部分工作仍在進(jìn)行中。本論文是對(duì)所獲得的一些主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果的總結(jié)，包括以下幾個(gè)方面的內(nèi)容。第一部分為幽門螺桿菌HPYLI八聚異戊二烯焦磷酸合成酶OPPS的結(jié)構(gòu)解析及酶學(xué)機(jī)理研究。OPPS催化5個(gè)異戊二烯焦磷酸IPP與法尼酯焦磷酸FPP發(fā)生連續(xù)的縮合反應(yīng)，生成40C的八聚異戊二烯焦磷酸OPP，OPP組成COQ的側(cè)鏈后者在呼吸鏈的電子傳遞中發(fā)揮了重要作用，敲除該基因后細(xì)菌的生長(zhǎng)明顯受到抑制，提示其功能的重要性。本研究克隆、表達(dá)并純化了來(lái)源于HPYLI的OPPS蛋白，采用該蛋白生長(zhǎng)晶體并收集了20的高質(zhì)量衍射數(shù)據(jù)，采用MAD法解析了OPPS的結(jié)構(gòu)。通過(guò)對(duì)結(jié)構(gòu)的分析，明確了該蛋白的單體結(jié)構(gòu)和二體組裝方式、酶活中心的構(gòu)象以及參與反應(yīng)的關(guān)鍵殘基等信息，同時(shí)分析了該結(jié)構(gòu)與同源結(jié)構(gòu)之間的差異，提出了該家族酶類的底物招募和產(chǎn)物釋放機(jī)制，并確定了參與反應(yīng)終止即控制產(chǎn)物長(zhǎng)度的關(guān)鍵殘基。通過(guò)分子對(duì)接和建模技術(shù)獲得了底物IPP、FPP、中間產(chǎn)物GGPP與OPPS的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，在此基礎(chǔ)上提出了TRANS異戊二烯家族酶類的可能的催化模型，對(duì)該家族酶類的反應(yīng)機(jī)制有了更加深入的認(rèn)識(shí)。第二部分為HPYLI精氨酸酶ROCF的結(jié)構(gòu)解析及酶活測(cè)定體系的建立。精氨酸酶是尿素循環(huán)中的一個(gè)關(guān)鍵酶，水解精氨酸生成尿素和鳥(niǎo)氨酸需要在二價(jià)金屬離子存在的條件下才能發(fā)揮活性，它是HPYLI耐酸體系的重要組成部分，在HPYLI的適應(yīng)性定植中發(fā)揮了重要作用。此外，它還通過(guò)減少宿主巨噬細(xì)胞生成NO和抑制T細(xì)胞增生降低宿主的免疫應(yīng)答，在HPYLI的免疫逃逸和持續(xù)性感染中發(fā)揮了重要作用。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，敲除ROCF編碼基因后，HPYLI的定植數(shù)量明顯下降，而這正是通過(guò)宿主NO合成增加造成的，提示ROCF在抗機(jī)體天然免疫以及在HPYLI的感染和致病中的重要性。與其他的精氨酸酶相比，ROCF有許多不同之處，如在酸性和結(jié)合CO2的條件下活性最強(qiáng)，還原劑對(duì)其活性影響很大，序列中間有一個(gè)13個(gè)殘基的插入，N端C端也有明顯不同等提示其結(jié)構(gòu)可能與其他精氨酸酶存在差異?；诖耍狙芯繉?duì)ROCF進(jìn)行了克隆表達(dá)和純化，生長(zhǎng)晶體并采用分子置換法成功解析了其結(jié)構(gòu)，明確了參與離子結(jié)合的關(guān)鍵殘基以及活性中心的位置，并分析了ROCF與其他精氨酸酶序列與折疊方式上的差異。同時(shí)建立了酶活測(cè)定體系，明確了還原劑對(duì)酶活的抑制作用以及ROCF對(duì)離子的選擇性CO2NI2MN2。目前我們正嘗試通過(guò)獲得ROCF與抑制劑NNOHA和BEC的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，并結(jié)合點(diǎn)突變等實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)ROCF的催化機(jī)理進(jìn)行深入的探討。第三部分為博士期間的其他工作，包括，1HPYLI粘附素HPAA的初步晶體學(xué)研究，病原體的粘附和定植是發(fā)生感染和致病的前提，HPAA是HPYLI最為重要的粘附分子，在HPYLI與胃上皮細(xì)胞的粘附中發(fā)揮了重要作用，同時(shí)它還具有很強(qiáng)的免疫原性，是一種重要的保護(hù)性抗原，廣泛用于疫苗的研發(fā)。本研究成功實(shí)現(xiàn)了該蛋白的可溶性表達(dá)，經(jīng)純化得到高純度的蛋白，通過(guò)大規(guī)模的搜索獲得了晶體，但晶體質(zhì)量不是很好，衍射能力較弱，目前正在對(duì)晶體進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化。2熱休克蛋白HSPA、毒力因子CAGA、耐酸相關(guān)蛋白ARSS的初步晶體學(xué)研究，HSPA是一種分子伴侶蛋白，參與其他蛋白的折疊，比同源蛋白多了一段特殊的C端結(jié)構(gòu)域，并且在結(jié)合NI2和BI3時(shí)呈現(xiàn)出不同的寡聚方式。CAGA是HPYLI最為重要的毒力因子，通過(guò)Ⅳ型分泌系統(tǒng)分泌至宿主細(xì)胞，通過(guò)與某些蛋白相互作用發(fā)生磷酸化，進(jìn)而通過(guò)一些信號(hào)通路引起胃上皮細(xì)胞極性的改變、緊密連接的破壞、肌動(dòng)蛋白的交聯(lián)和拉伸以及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能的改變，從而引起相關(guān)疾病，并且和胃癌的發(fā)生有一定的關(guān)系。而ARSR是雙組份系統(tǒng)的蛋白，可以感受菌體環(huán)境的變化從而調(diào)控一些耐酸相關(guān)蛋白的表達(dá)，與HPYLI耐酸和適應(yīng)性定植密切相關(guān)。前期工作中，對(duì)上述完整蛋白或篩選的肽段進(jìn)行了克隆表達(dá)和純化，經(jīng)純化得到了高濃度的蛋白并對(duì)蛋白的性質(zhì)進(jìn)行了分析，但通過(guò)多輪的結(jié)晶條件的搜索仍沒(méi)有獲得晶體。3對(duì)碩士期間構(gòu)建的百日咳疫苗的候選融合蛋白FSS1進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，通過(guò)結(jié)構(gòu)域的分析認(rèn)為兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間通過(guò)設(shè)計(jì)的LINKER分開(kāi)，形成兩個(gè)獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域，二者結(jié)構(gòu)不會(huì)受到影響。采用稀釋復(fù)性的方法對(duì)蛋白進(jìn)行了重新復(fù)性并進(jìn)行了進(jìn)一步的純化，得到了性質(zhì)較好的蛋白，通過(guò)免疫家兔并檢測(cè)特異性IGG抗體水平證實(shí)融合蛋白有較好的免疫原性，可作為基因重組百日咳疫苗的候選抗原。

簡(jiǎn)介：，，977072舟女BJL镕MZJ＆E_西北農(nóng)林針捉大學(xué)2006屆攻讀碩士學(xué)位研究生學(xué)位畢業(yè)論文扦插多葉型苜蓿生物學(xué)特性的初步研究學(xué)科專業(yè)生態(tài)芏研究方向壅些生盔研冤生型疆墟指導(dǎo)教師萱盔寬煎援合作指導(dǎo)教師韙煎羞副夔撞完成時(shí)間2Q盟至旦中園陜西櫥凌生物產(chǎn)量均低于其母株苜蓿。11對(duì)5個(gè)扦插多葉型苜蓿品種的光合特性進(jìn)行研究，結(jié)果表明牧歌401、改革者兩個(gè)品種的氣孔導(dǎo)度最大，衛(wèi)士302、愛(ài)菲尼特的氣孔導(dǎo)度較小；改革者的水分利用率最高，愛(ài)菲尼特次之，牧歌401的水分利用率最低；逐步回歸分析表明苜蓿的光合速率與其它光合參數(shù)的相關(guān)性均己達(dá)到顯著水平。光合速率與氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率、WUE和濕度差呈正相關(guān)，和CO，濃度差呈負(fù)相關(guān)。關(guān)鍵詞扦插；多葉型苜蓿；生物學(xué)性狀