簡介：點擊查看更多峨眉黃連生物學特性與生藥學研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：關于學位論文原創(chuàng)性和使用授權的聲明本人所呈交的學位論文，是在導師指導下，獨立進行科學研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導、幫助和做出重要貢獻的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責任由本人承擔。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學有關保留和使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留和按要求向國家有關部門或機構送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權山東農(nóng)業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文，同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會公眾提供信息服務。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。、論文作者簽名蝴導師簽名弛日期迎單易一IO223不同溫度對OCASTANEA菌絲生長的影響15224不同PH值對OCASTANEA菌絲生長的影響一15225不同培養(yǎng)基對OCASTANEA茵絲生長的影響1623OCASTANEA的生活史初步研究16231自然條件下OCASTANEA的生活史研究16232OCASTANEA有性型子實體誘導一162321OCASTANEA病葉有性型子實體誘導162322OCASTANEA菌絲培養(yǎng)有性型子實體誘導～18233OCASTANEA無性型子實體誘導1824OCASTANEA與板栗褐緣葉枯病及板栗擬莖點霉的關系18241不同時間OCASTANEA與板栗擬莖點霉的分離頻率及比例變化18242OCASTANEA子實體的著生位置與板栗褐緣葉枯病病斑的關系18243離體葉片接種法對兩菌的致病性進行初步測定19244OCASTANEA與板栗擬莖點霉的營養(yǎng)體親和性試驗193結果與分析2031OCASTANEA鑒定20311OCASTANEA微觀形態(tài)一203111OCASTANEA無性型形態(tài)203112OCASTANEA有性型形態(tài)20312菌絲培養(yǎng)性狀、菌落形態(tài)22313ITS序列獲得和系統(tǒng)發(fā)育分析2232OCASTANEA菌絲的生物學特性24321不同碳源對OCASTANEA菌絲生長的影響24322不同氮源對OCASTANEA菌絲生長的影響25323不同溫度對OCASTANEA菌絲生長的影響27324不同PH值對OCASTANEA菌絲生長的影響一28325不同培養(yǎng)基對OCASTANEA菌絲生長的影響2933OCASTANEA的生活史初步研究30331自然條件下OCASTANEA的生活史研究30332OCASTANEA有性型子實體誘導30

簡介：FOXP3是FOXFKHEADBOX家族轉錄因子中的一員，是TREG細胞TREG的相對特異性標志，同時對TREG的發(fā)生、發(fā)育、功能的維持與發(fā)揮方面起關鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)通過轉染表達外源性人FOXP3（HFOXP3）或鼠FOXP3（MFOXP3）可使非TREG細胞具有類似TREG細胞樣的表型及抑制JURKATT細胞增殖功能。人類免疫缺陷病毒1型HIV1基因編碼的反式激活蛋白（TAT）中的蛋白轉導結構域PTD能夠高效、快速地攜帶外源性蛋白穿入幾乎所有的真核細胞，而進入細胞質(zhì)。由于其具有核定位信號NLS，因此也能定位于細胞核內(nèi)。同時PTD具有不影響其攜帶的目的蛋白功能的特點。目的研究PTDHFOXP3、PTDEGFP△E251HFOXP3、PTDEGFPHFOXP3融合蛋白對T細胞活化、增殖及其免疫調(diào)節(jié)功能的影響，為最終應用于器官移植和自身免疫性疾病治療藥物奠定基礎。方法利用基因重組和定點突變技術構建PET28APTDHFOXP3、PET28APTDEGFP△E251HFOXP3、PET28APTDEGFPHFOXP3原核表達載體，并在大腸埃希菌ROSETTADE3中表達融合蛋白，經(jīng)NI2IMAC親和柱純化融合蛋白和脫鹽柱除鹽獲得純化蛋白。WESTERNBLOT技術檢測融合蛋白表達的正確性，流式細胞術檢測融合蛋白穿越細胞膜進入人急性白血病T淋巴細胞瘤株JURKATT細胞中的能力和量效關系，WESTERNBLOT分析和共聚焦顯微鏡觀察確認融合蛋白細胞內(nèi)定位。通過淋巴細胞增殖抑制實驗初步分析融合蛋白對T細胞活化增殖的影響。結果成功構建了PET28APTDHFOXP3、PET28APTDEGFP△E251HFOXP3、PET28APTDEGFPHFOXP3融合蛋白表達載體，表達并純化了人PTDHFOXP3、PTDEGFP△E251HFOXP3、PTDEGFPHFOXP3融合蛋白。通過流式細胞術分析證實表達的融合蛋白均能高效的轉入細胞內(nèi)，且發(fā)現(xiàn)融合蛋白在640NM，與細胞共育2H時蛋白穿入細胞的效率最高；經(jīng)WESTERNBLOT檢測和共聚焦顯微鏡觀察確認融合蛋白能夠進入細胞漿和細胞核；同時經(jīng)細胞增殖抑制實驗證明PTDHFOXP3和PTDEGFPHFOXP3融合蛋白能明顯抑制JURKATT細胞的活化增殖能力。結論成功表達具有生物學活性的PTDHFOXP3、PTDEGFP△E251HFOXP3、PTDEGFPHFOXP3融合蛋白，為進一步更好地研究HFOXP3的免疫抑制功能和PTDHFOXP3融合蛋白的應用奠定了基礎。

簡介：剛地弓形蟲是一類嚴格的胞內(nèi)寄生原蟲，呈全世界分布，可感染哺乳動物，鳥類，甚至冷血動物，弓形蟲有如此廣泛的宿主，除了與它強大的入侵機制有關之外，還和它強大的免疫逃避機制和適應并改變宿主細胞環(huán)境的能力有著密切的關系。這也是導致弓形蟲病難以防控的主要原因。弓形蟲致密顆粒蛋白GRA16、GRA24、TGIST可利用宿主細胞信號通路進入宿主細胞核，調(diào)控宿主細胞表達，改變宿主細胞的免疫狀態(tài)和細胞內(nèi)環(huán)境，以實現(xiàn)免疫逃避和長期寄生。致密顆粒蛋白GRA17和GRA23可在納蟲泡膜上形成微孔，該孔可幫助弓形蟲攝取宿主營養(yǎng)，致密顆粒蛋白MAF1、GRA3和GRA5參與弓形蟲對宿主細胞線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的招募，幫助弓形蟲利用宿主營養(yǎng)。可以說，致密顆粒蛋白對于弓形蟲胞內(nèi)寄生十分重要。GRA1是第一個被發(fā)現(xiàn)的致密顆粒蛋白，但關于它的生物學功能我們知之甚少，研究它的生物學功能可以為進一步理解弓形蟲胞內(nèi)寄生的特性提供幫助，為以后的弓形蟲研究奠定理論基礎。本研究以弓形蟲致密顆粒蛋白1（TGGRA1）為研究對象，利用CRISPRCAS9基因編輯系統(tǒng)和四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)TETOFF對TATI蟲株中的GRA1進行條件性敲除，成功構建中間蟲株TATITETO7GRA1蟲株，對其進行ATC處理，發(fā)現(xiàn)GRA1的表達不能被關閉，說明TETOFF系統(tǒng)不適用于GRA1的敲除。隨后改用CRELOXP條件性敲除系統(tǒng)對RH△HXGPRT蟲株中的GRA1進行條件性敲除，成功構建中間蟲株RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株，復制實驗驗證TGGRA1對弓形蟲胞內(nèi)寄生的重要性同時，利用BIOID技術，富集GRA1鄰近的蛋白，試圖發(fā)現(xiàn)更多潛在的致密顆粒蛋白和可能的GRA1互作蛋白。具體實驗內(nèi)容如下1GRA1蛋白原核表達和多克隆抗體的制備構建PESUMOGRA1原核表達質(zhì)粒，該質(zhì)粒在表達感受態(tài)細胞BL21DE3中能夠順利表達，且蛋白表達在上清，將純化好的SUMOGRA1蛋白進行動物免疫，收集免疫后的動物血清，用ELISA檢測抗體效價，結果顯示該抗GRA1的多克隆抗體具有較高水平的抗體效價，經(jīng)WESTERNBLOT檢測該抗體可特異性識別TGGRA1。2TATITETO7GRA1蟲株的構建利用TETOFF系統(tǒng)對GRA1基因進行條件性敲除。首先，構建能夠識別GRA1基因座的PSAG1∷CAS9U6∷SGGRA1的CRISPR質(zhì)粒和同源替換的模板質(zhì)粒PUC19TETO7GRA1。然后將擴增出來的同源替換片段5UTRDHFRTETO7GRA13UTR和PSAG1∷CAS9U6∷SGGRA1質(zhì)粒共轉染到TATI蟲株的速殖子中，乙胺嘧啶進行藥物篩選，再通過有限稀釋法進行TATITETO7GRA1單克隆蟲株的篩選，單克隆經(jīng)擴大培養(yǎng)后用PCR進行鑒定，結果顯示成功獲得TATITETO7GRA1蟲株。用ATC處理TATITETO7GRA1蟲株，經(jīng)間接免疫熒光檢測，GRA1蛋白的表達并未被關閉，蟲株生長也很正常。說明TETOFF系統(tǒng)不適用于GRA1的敲除。3RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株的構建利用CRELOXP系統(tǒng)對GRA1基因進行條件性敲除。構建同源替換的模板質(zhì)粒PUC19GRA1YFP，然后將擴增出來的同源替換片段5UTRTUBULINLOXPGRA1LOXPYFPHXGPRT3UTR和PSAG1∷CAS9U6∷SGGRA1質(zhì)粒共轉染到RH△HXGPRT蟲株的速殖子中，用黃嘌呤和霉酚酸進行藥物篩選，再通過有限稀釋法進行RH△HXGPRTLOXPGRA1單克隆蟲株的篩選，單克隆經(jīng)擴大培養(yǎng)后用PCR和間接免疫熒光進行鑒定，結果顯示成功獲得RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株。4GRA1敲除株表型研究RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株轉染能夠表達CRE重組酶的PMINCREYFP質(zhì)粒，CRE重組酶會識別LOXP序列，對RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株中的GRA1基因進行剪切，從而實現(xiàn)GRA1的敲除。將GRA1敲除株與RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株進行胞內(nèi)復制實驗，發(fā)現(xiàn)GRA1敲除株和RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株相比，GRA1敲除株的復制能力顯著性下降。5BIOID技術富集GRA1的周邊蛋白用BIOTIN標記經(jīng)過遺傳改造的RH△HXGPRTGRA1BIRA蟲株，經(jīng)過24H作用，通過WESTERNBLOT檢測到RH△HXGPRTGRA1BIRA蟲株有被生物素標記上的特異蛋白，質(zhì)譜分析這些特異蛋白。經(jīng)過分析和對比，得到了17個已知GRA蛋白，同時找到了39個未知蛋白和16個已知蛋白。經(jīng)定位實驗鑒定，17個未知蛋白中有2個是致密顆粒蛋白，對16個已知蛋白進行功能分析，推測MYR1和GRA1存在互作的可能性，但它們之間具體的關系還需要進一步實驗驗證。本研究主要利用CRELOXP條件性敲除系統(tǒng)和CRISPRCAS9技術在RH△HXGPRT蟲株中對GRA1基因進行條件性敲除。GRA1敲除株和RH△HXGPRTLOXPGRA1蟲株比較得出GRA1敲除株的復制能力顯著性下降。同時通過BIOID技術和LCMSMS鑒定出72個GRA1周邊的蛋白，并通過定位實驗發(fā)現(xiàn)了兩個新的致密顆粒蛋白。以上結果為弓形蟲免疫逃避機制和適應并改變宿主細胞環(huán)境機制的研究進一步提供理論基礎。

簡介：目的本課題組致力于發(fā)形霞水母（CYANEACAPILLATA，CCAPILLATA）來源的活性物質(zhì)及相關機理研究多年。以往研究中，我們發(fā)現(xiàn)水母觸手表現(xiàn)出超強創(chuàng)傷修復能力，且觸手中刺細胞具有快速增殖的特點，提示水母觸手中可能存在高活性促生長因子。在分析CCAPILLATA觸手提取物TENTACLEEXTRACT，TE的細胞活性時也觀察到一個有趣現(xiàn)象，即低濃度的TE可以誘發(fā)細胞增殖。結合相關文獻報道，我們推測TE中含有類似促增殖活性物質(zhì)。本課題組前期建立了CCAPILLATA觸手組織CDNA文庫，分析發(fā)現(xiàn)其中有四條血管內(nèi)皮生長因子VULARENDOTHELIALGROWTHFACT，VEGF類似序列，為我們從TE中提取促生長活性物質(zhì)提供了重要理論依據(jù)。組合應用多種分離技術，我們成功從TE中分離得到具有促生長活性的一個顆粒蛋白樣多肽生長因子并命名為CCGRN1CYANEACAPILLATAGRANULIN1CCGRN1。因此，本課題將重點研究TE和CCGRN1的促生長活性及其作用機制。通過本課題的研究，我們希望可以為將來某些特殊疾病或環(huán)境造成的傷口難愈合情況提供新的治療思路。方法第一部分TE的生物學活性研究首先，采用CCK8法檢測TE對HUVECS細胞活力的影響。然后，通過流式細胞術檢測TE對HUVECS細胞周期進程的影響并檢測其對細胞周期相關蛋白CYCLINB1和CYCLIND1表達的影響。隨后，采用WESTERNBLOTTING檢測TE對HUEVCS中生長相關信號通路的級聯(lián)情況，包括PI3KAKT，ERK12MAPK，JNKMAPK，P38MAPK和NFΚB通路以及下游CASPASE3，8，9和CYTOC蛋白的表達水平同時，采用免疫熒光技術對信號通路的級聯(lián)情況進一步驗證。隨后，選擇TE激活的信號通路對應的抑制劑，檢測其對細胞周期蛋白表達的影響。最后，采用劃痕修復實驗檢測TE對細胞遷移能力的影響。第二部分CCGRN1的生物學活性研究首先，采用CCK8法檢測CCGRN1對HUVECS的細胞活力的影響。其次，通過流式細胞術檢測CCGRN1對HUVECS細胞周期進程的影響，并檢測細胞周期相關蛋白CYCLINB1和CYCLIND1的表達變化情況。然后，采用WESTERNBLOTTING檢測CCGRN1對HUEVCS中生長相關信號通路的級聯(lián)情況，主要包括PI3KAKT，ERK12MAPK，JNKMAPK和NFΚB通路同時，采用免疫熒光技術對信號通路的級聯(lián)情況做進一步的驗證。隨后，選擇CCGRN1激活的信號通路對應的抑制劑，檢測其對細胞周期蛋白表達的影響。最后，采用劃痕修復實驗檢測CCGRN1的促細胞遷移能力。同時，選取商品化血管內(nèi)皮生長因子VEGF作為對照，并行分析其與CCGRN1的生物學活性及作用機制。結果第一部分TE的生物學活性研究CCK8法檢測結果顯示，高劑量TE抑制細胞生長，使HUVECS細胞活力呈劑量依賴性降低而低劑量TE可以促進細胞活力明顯升高。此外，流式細胞術結果顯示，TE可以促進細胞從G1期過渡到細胞分裂活躍期（S和G2期），加快細胞周期進程TE還可以促進細胞周期蛋白的表達明顯增加。在信號通路方面，TE可以激活HUVECS中PI3KAKT，ERK12MAPK以及JNKMAPK通路，而對P38MAPK和NFΚB通路以及下游信號通路中包括CASPASE3，8，9以及CYTOC蛋白表達沒有影響免疫熒光檢測結果證實TE確實可以激活PI3KAKT，ERK112MAPK以及JNKMAPK通路。信號通路干預結果顯示PD98059可以抑制CYCLINB1和CYCLIND1的表達，而LY294002和SP600125對其沒有影響，說明TE主要是通過激活ERK12MAPK通路上調(diào)細胞周期蛋白表達的。最后，細胞劃痕修復試驗結果表明，TE可以誘導HUVECS發(fā)生細胞遷移。第二部分CCGRN1的生物學活性研究CCK8法檢測結果顯示，CCGRN1和VEGF均對HUVECS活力具有時間和劑量依賴性促進作用。流式細胞術結果顯示，兩者均可以促進細胞從G1期過渡到細胞分裂活躍期（S和G2期），加快細胞周期進程此外，兩者還可以促進細胞周期蛋白表達增加。在信號通路激活方面，WESTERNBLOTTING結果顯示CCGRN1和VEGF均可以激活PI3KAKT和ERK12MAPK通路，而對JNKMAPK和NFΚB通路沒有影響免疫熒光檢測結果證實了CCGRN1和VEGF確實可以激活PI3KAKT和ERK12MAPK通路。信號通路干預結果顯示PD98059可以抑制CYCLINB1和CYCLIND1的表達，而LY294002沒有影響，說明CCGRN1主要是通過激活ERK12MAPK通路上調(diào)細胞周期蛋白表達的。最后，細胞劃痕修復試驗結果表明，CCGRN1和VEGF均可以誘導HUVECS發(fā)生細胞遷移。結論低濃度TE可以提高細胞活力，加快細胞周期進程，促進細胞周期蛋白的表達，提示TE具有促細胞增殖效應在作用機制方面，TE可以磷酸化激活PI3KAKT，ERK12MAPK和JNKMAPK通路，而其中的ERK12MAPK通路與細胞周期蛋白的表達增加密切相關，提示其可能與促細胞增殖有關最后，細胞劃痕修復實驗表明TE可以誘導細胞遷移。另一方面，CCGRN1具有與VEGF類似的細胞活力效應，可以加快細胞周期進程，促進細胞周期蛋白的表達，表明CCGRN1具有與VEGF類似的促細胞增殖效應在作用機制方面，CCGRN1也與VEGF類似，主要激活PI3KAKT和ERK12MAPK通路，而其中的ERK12MAPK通路與細胞周期蛋白的表達增加密切相關最后，通過細胞劃痕修復實驗表明CCGRN1與VEGF均可以誘導細胞遷移。基于CCGRN1和VEGF在促進細胞增殖方面具有很大的共性，我們認為CCGRN1作為一種海洋生物來源的多肽，對某些特殊疾病或環(huán)境造成的傷口難愈合情況可能具有良好的應用前景。

簡介：廈門大學碩士學位論文海水養(yǎng)殖魚類寄生新貝尼登蟲NEOBENEDENIA的數(shù)量形態(tài)學和分子生物學研究姓名張紋申請學位級別碩士專業(yè)海洋生物學指導教師蘇永全王軍200251擅要新貝尼登蟲和梅氏新貝尼登蟲的遺傳相似度高達997％，在337BP同源序列中僅存在一個堿基的差異。而同為梅氏新貝尼登蟲，莆田海區(qū)養(yǎng)殖大黃魚魚體上和廈門海區(qū)養(yǎng)殖高體鱺魚體上蟲體的遺傳相似度為9941％。經(jīng)與3種貝尼登蟲的同源序列比較后發(fā)現(xiàn)，貝尼登屬三個蟲種BENEDENIALU和NI、BROHDEI和置SERIOLAE種間的遺傳差異為208～1173％，甚至大于囪己新貝尼登蟲和梅氏新貝尼登蟲O3％的差異，結果與RAPD分析相似，進一步在分子水平上印證了紀新貝尼登蟲和梅氏新貝尼登蟲應為同一蟲在源序列目3個科10個屬12個蟲種的28SRDNA基因同介于215～1208％，屬間的距離為5182043％，科間的距離為19702909％。以MP和UPGMA方法作出的分子系統(tǒng)進化樹與傳統(tǒng)分類系統(tǒng)基本一致，但兩者在科的水平上有所不同，MP系統(tǒng)樹為CAPSAJIDAE，MONOCOTYLIDAE，UDONELLIDAE，UPGMA系統(tǒng)樹為CAPSALIDAE，UDONELLIDAE，MONOCOTYLIDAE。28SRDNA基因的該序列片段被證明非常適于單殖吸蟲的分子系統(tǒng)學研究。關鍵詞新貝尼登蟲數(shù)量分類RAID28SRDNA序列分析2

簡介：SCREENINGOFPLANTGROWTHPROMOTINGRHIZOBACTERIAINTOBACCOANDITSBIOLOGICALEFFECTSBY％NSHISUPERVISEDBYPROFBIAOSHENATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORDOCTORALDEGREEOFAGRICULTURALSCIENCESCOMPLETEDINMAY，2015本研究內(nèi)容由1農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)公益性行業(yè)科研專項利用有機類肥料調(diào)控我國土壤微生物區(qū)系關鍵技術研究2011030042貴州省煙草總公司重點項目貴州植煙土壤微生物修復關鍵技術的研究與應用201018、3中國煙草總公司重點項目貴州煙草土壤生態(tài)修復關鍵技術的研究與應用11020100219共同資助特此致謝

簡介：華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文犬細小病毒的分離鑒定與生物學特性研究姓名周云朵申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師劉正飛201106華中農(nóng)業(yè)大學2011屆碩士研究生學位論文ABSTACTCANINEPARVOVIRUSCEVEMERGEDIN1978ANDSPREADEDALLOVERTHEWORDSINCETHENTHISDISEASEBECOMESENDEMICWORDWIDETHISSTUDYAIMSTOOBTAINCPVSTRAINSINTHEMIDDLEOFCHINAANDSTUDYTHEIRGENOTYPES，EPIDEMIOLOGYBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDPATHOGENICITY42FECESSWABSTHATWEREPOSITIVEINCOLLOIDALGOLDTESTWERECOLLECTEDFROMPETCLINICSINWUHANTHENTHEYWEREPASSAGEDINFELINEKIDNEY81F81ANDOBSERVATIONBYTRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPIC2PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDACCORDINGTOCONSERVATIVECAPSIDPROTEIN2VP2ANDTHEOTHERPAIRWERESYNTHESIZEDACCORDINGTEFERENCEANOTHER4PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDTOCLONETHEORFOFCPVTHESTRAINSWEREPURIFIEDBYPLAQUEASSAYANDTHENONESTEPGROWTHCURVESWEREOBTAINEDSUBSEQUENTLYTENSECTIONSWEREMADEATTHEENDANIMALEXPERIMENTWASCARRIEDOUT28CPVSTRAINSWEREISOLATED390BP，583BPAND1755BPNUCLEOTIDESEQUENCESWEREACQUIREDAFTERSEQUENCINGANDANALYZINGTHEGENEFRAGMENTS，THERESULTSHOWSTHATALLTHEISOLATESWERECPVWHILE25WERECPV2AAND3WERECPV2BTHESYSTEMPHYLOGENETICANALYSISEXPLORESTHEISOLATES5AND10WERECLOSETOTHECHINESEISOLATES，F(xiàn)ARTHERFROMTHEISOLATESINEUROPEANDTHEAMERICAS，F(xiàn)ARTHESTFROMTHEEARLIESTISOLATETHECURVESSHOWTHEGROWTHOFCPVATDIFFERENTSTAGESAFTERINFECTIONTHEREPRODUCTIVEACTIVITYCOULDREACHORBEYOND105一PFU／M1THERESULTALSOSHOWSTHATTHETWOCURVESWERESLIGHTLYDIFFERENTATTHEBEGINNINGTHECURVEACCORDINGTOTHEEXPERIMENTTHATTHECELLSWEREINFECTEDWHENTHECELLHADPASSAGED8HOURSSHOWEDDESCENDINGATTHEBEGINNINGHOWERE，ANOTHERCURVEWASRISINGALLTHEISOLATESCOULDAGGLUTINATEREDBLOODCELLSOFSWINEUNDERCERTAINCONDITIONSANDTHEAGGLUTINATIONCANBEINHIBITEDTHEPHOTOGRAPHSOFTENSHOWTHATMITOCHONDRIAARESWELLINGTHEORFSOFTHE2ISOLATESWEREOBTAINEDFINALLYANIMALEXPERIMENTSHOWSTHATEVERYDOGHADCLINICALSYMPTOMSINDIFFERENTDEGREES，SUCHASVOMITINGANDBLOODYEXCREMENTAFTERWETESTEDTHEANUSSWABSCOLLECTEDATDIFFERENTTIME，WEFOUNDTHATTHEDOGSHADDISCHARGEVIRUSANDTHEHIGHESTQUANTITYCANREACH102一TCID50THERESULTSOFDISSECTIONREFLECTTHATTHEREARENECROSISINTHESMALLINTESTINEANDTHEMYOCARDIUMBECOMESTHINNERAFTERPATHOLOGICALSECTIONSWEREMADE，OBSERVATIONWERETAKENUPANDTHERESULTSHOWSTHATMYOCARDIALCELLSAREMETAMORPHICANDNECROTICTHISSTUDYPROVIDESGROUNDWORKFORFURTHERSTUDYOFMOLECULARBIOLOGYANDPATHOPOIESIAOFCPVKEYWORDSCANINEPARVOVIRUS；ISOLATION；TEN；ANIMALASSAYⅡ

簡介：分類號密級單位代碼學號洳≥≥、嘧博士學位論文⑧中文論文題目鱉至鏊壁鯉亡塹煎望絲掛性生塹堂適性區(qū)基笠盟狃望盈窒英文論文題目魚塹亟叢西SL亟盈N亟BIQQGIQ△Q叢造QFEN圣Y豳叢I￡HY旦盥Y墨丞星墨鹽盟BQY盈』曼Y塹亟墜西￡叢金血塹IS皿￡申請人姓名至之登指導教師塑攝基數(shù)援專業(yè)名稱掛疊經(jīng)進動物魚差研究方向蜜蝰型堂所在學院動物型堂堂院浙江大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得逝姿態(tài)堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名匆嗍簽字日期訓，多年鄉(xiāng)月各日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解迸江大鱟有權保留并向國家有關部門或機構送交本論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權盤姿盤堂可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權書學位論文作者簽名勁確導師簽名葉～八‘M簽字日期矽力年多月礦日簽字日期矽13年多月孑日

簡介：碩士學位論文碩士學位論文MTERFD2的表達調(diào)控機制及生物學功能的初步研究MTERFD2EXPRESSIONPROFILEPRELIMINARYSTUDYOFITSREGULATIONMECHANISMBIOFUNCTION徐倩倩徐倩倩哈爾濱工業(yè)大學2011年6月CLASSIFIEDINDEXQ9514UDC57721DISSERTATIONFTHEMASTERDEGREEINSCIENCEMTERFD2EXPRESSIONPROFILEPRELIMINARYSTUDYOFITSREGULATIONMECHANISMBIOFUNCTIONCIDATEQIANQIANXUSUPERVISPROFQIONGWUACADEMICDEGREEAPPLIEDFMASTEROFSCIENCESPECIALITYBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGYAFFILIATIONSCHOOLOFSCIENCEDATEOFDEFENCEJUNE2011DEGREECONFERRINGINSTITUTIONHARBININSTITUTEOFTECHNOLOGY

簡介：背景自身免疫性肝炎AUTOIMMUNEHEPATITISAIH是一種病因和發(fā)病機制尚不十分清楚與機體自身免疫有關的肝臟疾病。主要特點是循環(huán)中出現(xiàn)自身抗體高球蛋白血癥以及病理組織學界面性肝炎、漿細胞浸潤?；谧陨砜贵w譜特點分為兩種亞型1型循環(huán)中出現(xiàn)抗核抗體ANA和或抗平滑肌抗體SMA2型循環(huán)中出現(xiàn)抗肝腎微粒體抗體LKM1和或3和或抗肝細胞漿1型抗體LC1其中1型最為常見。但用于分型的自身抗體多不具有特異性亦不具備預測疾病活動的能力。近年來大量研究表明去唾液酸糖蛋白受體抗體在自身免疫肝炎有高度的特異性而針對該受體抗在1型自身免疫肝炎生物學特性中的意義報道較少。對抗去唾液酸糖蛋白受體抗體在1型自身免疫性肝炎患者中臨床、免疫、生化、病理特點及治療應答反應進行分析無疑能提高對1型自身免疫性肝炎的診治認識。目的探討抗去唾液酸糖蛋白受體抗體AUTOANTIBODIESTOASIALOGLYCOPROTEINRECEPTANTIASGPR陽性和陰性1型自身免疫性肝炎TYPE1AUTOIMMUNEHEPATITISAIH1在臨床、生化、免疫學、遺傳學、組織學特點及其治療應答反應的差異。方法應用酶聯(lián)免疫分析法ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA檢測79例確診的AIH1患者血清中ANTIASGPR將其分為ANTIASGPR陽性組及陰性組。結果1ANTIASGPR陽性的患者為5975％59例陽性患者中男性7例女性52例平均年齡491±86歲20例陰性患者中男性2例女性18例平均年齡471±79歲。2在年齡、性別、癥狀、ALT、AST、ALP、GGT、ANA、SMA、DR3、DR4比較陽性組患者與陰性組患者差異無統(tǒng)計學意義。3陽性組患者較陰性組患者血清中存在高水平的Γ球蛋白和IGG及低水平C3P4CD38、CD138免疫組化染色陽性細胞數(shù)目及病理炎癥分級兩組差異相比有統(tǒng)計學意義P5治療后陽性組緩解率低于陰性組P結論1ANTIASGPR在1型自身免疫性肝炎患者中有較高的表達率。2ANTIASGPR與1型自身免疫性肝炎患者疾病嚴重程度密切相關。3ANTIASGPR有一定的預測1型自身免疫性肝炎患者治療應答的能力。

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簡介：學校代碼10712研究生學號2014060400⑧西北農(nóng)林針教大學屆攻讀博士學位研究生學位畢業(yè)論文石油污染及施氮修復對灌草枯落物分解及土壤生物學性質(zhì)的影響學科專業(yè)研究方向研究生指導教師完成時間叢堡繾量藍送絲墮擅叢堡掛王擺瑟墮噻型擅塞熬籃2Q生Q旦R1I目陜西楊凌洲0墮L止㈣G；等互㈣2㈣M纛孤㈣3躬I省IIRFIIII11111IRIIIIIIPIIIIIIIIIY3242990研究生學位畢業(yè)論文的獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的博士學位畢業(yè)論文是我個人在導師指導下獨立進行的研究工作及取得的研究結果論文中的研究數(shù)據(jù)及結果的獲得完全符合學校關于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學研究生學術道德的暫行規(guī)定，如果違反此規(guī)定，一切后果與法律責任均由本人承擔。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究結果，也不包含其他人和自己本人已獲得西北農(nóng)林科技大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同事對本研究所做的任何貢獻均已在論文的致謝中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名致丸咴時間九，7年』月√日導師指導研究生學位畢業(yè)論文的承諾本人承諾我的博士研究生玖舭喝≮所呈交的博士學位畢業(yè)論文是在我L指導下獨立開展研究工作及取得的研究結果，屬于我現(xiàn)崗職務工作的結果，并嚴格按照學校關于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學研究生學術道德的暫行規(guī)定而獲得的研究結果。如果違反學校關于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學研究生學術道德的暫行規(guī)定，我愿接受按學校有關規(guī)定的處罰處理并承擔相應導師連帶責任。導師簽名夤，降時間聲廠月矽日

簡介：幽門螺桿菌（HPYLI）為革蘭陰性微需氧菌，主要定植于感染患者的胃部，是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍的重要致病因素，與胃癌、胃粘膜相關淋巴組織淋巴瘤的發(fā)生密切相關，世界衛(wèi)生組織已將其列為一類致癌因子。HPYLI感染率極高，據(jù)統(tǒng)計，世界人群感染率超過50％，我國感染人群超過6億人，在某些地局部區(qū)感染率甚至達到90％以上。雖然HPYLI發(fā)現(xiàn)至現(xiàn)在已有超過27年的歷史，對其病原病因?qū)W、流行病學、致病機制、毒力因子、診斷治療預防方法等也進行了非常深入的研究，但仍然有很多問題仍不是很清楚，如HPYLI感染的持續(xù)性和慢性化機制，HPYLI感染與胃癌之間的關系，HPYLI感染率高但發(fā)病率低的原因等等。深入闡明其致病機制，對有針對性地開發(fā)治療的創(chuàng)新藥物、設計治療方案、研制有效的疫苗、制定預防控制措施具有重要的理論指導意義。HPYLI能夠成功定植于宿主胃部特殊的生理環(huán)境中，粘附胃上皮細胞進而引起多種胃部疾病，與其所具有的種類和數(shù)量眾多的致病因子密切相關，如與HPYLI毒力直接相關的致病因子CAGA、VACA、UREASE、HSP60、NAP、OIPA、DUPA等；與粘附和定植相關的BABA、SABA、SABB、ALPA、ALPB、ICEA、HPAA以及最近幾年發(fā)現(xiàn)的新的粘附分子HP1188和HP1430等；與耐酸相關的有碳酸酐酶、雙組份系統(tǒng)蛋白CRDSCRDR、ARSRARSS等。這些蛋白都與HPYLI的感染和致病有著密切的關系。蛋白質(zhì)的結構是其發(fā)揮功能的基礎，致病因子發(fā)揮作用與其獨特的空間結構密切相關。基于此，本研究擬采用結構生物學的方法，解析與HPYLI致病和重要生理功能密切相關的一些蛋白質(zhì)的結構，通過結構明確其發(fā)揮功能和致病的分子機制，為HPYLI感染和致病機制研究提供理論指導。本研究共篩選了包括毒力因子、粘附分子、耐酸相關蛋白以及參與重要生理功能的酶類等20個以上的靶標，目前成功解析了其中兩個蛋白質(zhì)的結構，另有三個蛋白結晶，部分工作仍在進行中。本論文是對所獲得的一些主要實驗結果的總結，包括以下幾個方面的內(nèi)容。第一部分為幽門螺桿菌HPYLI八聚異戊二烯焦磷酸合成酶OPPS的結構解析及酶學機理研究。OPPS催化5個異戊二烯焦磷酸IPP與法尼酯焦磷酸FPP發(fā)生連續(xù)的縮合反應，生成40C的八聚異戊二烯焦磷酸OPP，OPP組成COQ的側鏈后者在呼吸鏈的電子傳遞中發(fā)揮了重要作用，敲除該基因后細菌的生長明顯受到抑制，提示其功能的重要性。本研究克隆、表達并純化了來源于HPYLI的OPPS蛋白，采用該蛋白生長晶體并收集了20的高質(zhì)量衍射數(shù)據(jù)，采用MAD法解析了OPPS的結構。通過對結構的分析，明確了該蛋白的單體結構和二體組裝方式、酶活中心的構象以及參與反應的關鍵殘基等信息，同時分析了該結構與同源結構之間的差異，提出了該家族酶類的底物招募和產(chǎn)物釋放機制，并確定了參與反應終止即控制產(chǎn)物長度的關鍵殘基。通過分子對接和建模技術獲得了底物IPP、FPP、中間產(chǎn)物GGPP與OPPS的復合物結構，在此基礎上提出了TRANS異戊二烯家族酶類的可能的催化模型，對該家族酶類的反應機制有了更加深入的認識。第二部分為HPYLI精氨酸酶ROCF的結構解析及酶活測定體系的建立。精氨酸酶是尿素循環(huán)中的一個關鍵酶，水解精氨酸生成尿素和鳥氨酸需要在二價金屬離子存在的條件下才能發(fā)揮活性，它是HPYLI耐酸體系的重要組成部分，在HPYLI的適應性定植中發(fā)揮了重要作用。此外，它還通過減少宿主巨噬細胞生成NO和抑制T細胞增生降低宿主的免疫應答，在HPYLI的免疫逃逸和持續(xù)性感染中發(fā)揮了重要作用。體內(nèi)外實驗證實，敲除ROCF編碼基因后，HPYLI的定植數(shù)量明顯下降，而這正是通過宿主NO合成增加造成的，提示ROCF在抗機體天然免疫以及在HPYLI的感染和致病中的重要性。與其他的精氨酸酶相比，ROCF有許多不同之處，如在酸性和結合CO2的條件下活性最強，還原劑對其活性影響很大，序列中間有一個13個殘基的插入，N端C端也有明顯不同等提示其結構可能與其他精氨酸酶存在差異?；诖?，本研究對ROCF進行了克隆表達和純化，生長晶體并采用分子置換法成功解析了其結構，明確了參與離子結合的關鍵殘基以及活性中心的位置，并分析了ROCF與其他精氨酸酶序列與折疊方式上的差異。同時建立了酶活測定體系，明確了還原劑對酶活的抑制作用以及ROCF對離子的選擇性CO2NI2MN2。目前我們正嘗試通過獲得ROCF與抑制劑NNOHA和BEC的復合物結構，并結合點突變等實驗結果對ROCF的催化機理進行深入的探討。第三部分為博士期間的其他工作，包括，1HPYLI粘附素HPAA的初步晶體學研究，病原體的粘附和定植是發(fā)生感染和致病的前提，HPAA是HPYLI最為重要的粘附分子，在HPYLI與胃上皮細胞的粘附中發(fā)揮了重要作用，同時它還具有很強的免疫原性，是一種重要的保護性抗原，廣泛用于疫苗的研發(fā)。本研究成功實現(xiàn)了該蛋白的可溶性表達，經(jīng)純化得到高純度的蛋白，通過大規(guī)模的搜索獲得了晶體，但晶體質(zhì)量不是很好，衍射能力較弱，目前正在對晶體進行進一步的優(yōu)化。2熱休克蛋白HSPA、毒力因子CAGA、耐酸相關蛋白ARSS的初步晶體學研究，HSPA是一種分子伴侶蛋白，參與其他蛋白的折疊，比同源蛋白多了一段特殊的C端結構域，并且在結合NI2和BI3時呈現(xiàn)出不同的寡聚方式。CAGA是HPYLI最為重要的毒力因子，通過Ⅳ型分泌系統(tǒng)分泌至宿主細胞，通過與某些蛋白相互作用發(fā)生磷酸化，進而通過一些信號通路引起胃上皮細胞極性的改變、緊密連接的破壞、肌動蛋白的交聯(lián)和拉伸以及細胞運動功能的改變，從而引起相關疾病，并且和胃癌的發(fā)生有一定的關系。而ARSR是雙組份系統(tǒng)的蛋白，可以感受菌體環(huán)境的變化從而調(diào)控一些耐酸相關蛋白的表達，與HPYLI耐酸和適應性定植密切相關。前期工作中，對上述完整蛋白或篩選的肽段進行了克隆表達和純化，經(jīng)純化得到了高濃度的蛋白并對蛋白的性質(zhì)進行了分析，但通過多輪的結晶條件的搜索仍沒有獲得晶體。3對碩士期間構建的百日咳疫苗的候選融合蛋白FSS1進行了進一步的研究，通過結構域的分析認為兩個結構域之間通過設計的LINKER分開，形成兩個獨立的結構域，二者結構不會受到影響。采用稀釋復性的方法對蛋白進行了重新復性并進行了進一步的純化，得到了性質(zhì)較好的蛋白，通過免疫家兔并檢測特異性IGG抗體水平證實融合蛋白有較好的免疫原性，可作為基因重組百日咳疫苗的候選抗原。

簡介：，，977072舟女BJL镕MZJ＆E_西北農(nóng)林針捉大學2006屆攻讀碩士學位研究生學位畢業(yè)論文扦插多葉型苜蓿生物學特性的初步研究學科專業(yè)生態(tài)芏研究方向壅些生盔研冤生型疆墟指導教師萱盔寬煎援合作指導教師韙煎羞副夔撞完成時間2Q盟至旦中園陜西櫥凌生物產(chǎn)量均低于其母株苜蓿。11對5個扦插多葉型苜蓿品種的光合特性進行研究，結果表明牧歌401、改革者兩個品種的氣孔導度最大，衛(wèi)士302、愛菲尼特的氣孔導度較??；改革者的水分利用率最高，愛菲尼特次之，牧歌401的水分利用率最低；逐步回歸分析表明苜蓿的光合速率與其它光合參數(shù)的相關性均己達到顯著水平。光合速率與氣孔導度、蒸騰速率、WUE和濕度差呈正相關，和CO，濃度差呈負相關。關鍵詞扦插；多葉型苜蓿；生物學性狀