簡(jiǎn)介：疾病控制與預(yù)防中心報(bào)道在美國(guó)腎臟疾病已成為第九大主要死因。盡管傳統(tǒng)的腎替代治療如血液透析、血液濾過及腹膜透析都能成功用于長(zhǎng)期治療慢性腎衰竭但仍然有高的死亡率?，F(xiàn)有的生物人工腎小管輔助裝置BIOARTIFICIALRENALASSISTDEVICERAD克服了傳統(tǒng)透析技術(shù)只替代了腎小球的功能而忽略了腎小管功能的缺陷。體外實(shí)驗(yàn)證明該裝置能很好地發(fā)揮腎小管的功能被美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn)進(jìn)入ⅠⅡ期臨床實(shí)驗(yàn)。但因所采用的透析膜材料為高分子聚合物薄膜該材料固有的疏水性表面限制了其應(yīng)用另外其孔密度較低不便于裝置的微小化及體內(nèi)移植。TIO2納米管陣列由于其優(yōu)異的生物相容性、親水性及特殊的管狀結(jié)構(gòu)近年來在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域引起了廣泛關(guān)注。本文探索采用排列規(guī)整、兩端通透及較高孔密度的TIO2納米管陣列薄膜作為透析膜材料以克服高分子聚合物薄膜的缺陷。能否將腎臟細(xì)胞較好的黏附于TIO2納米管材料并使其發(fā)揮腎臟的生理功能目前還沒有公開的文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用陽極氧化法制備了兩端通透的TIO2納米管陣列通過控制陽極氧化電壓獲得了4種不同管徑的納米管材料將每種材料分別經(jīng)未退火未光照、未退火光照、退火未光照及退火光照處理并在其上分別種植腎小管上皮細(xì)胞株LLCPK1和血管內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304。在此基礎(chǔ)上詳細(xì)研究了TIO2納米管材料的幾何形貌參數(shù)、晶型結(jié)構(gòu)及光催化活性等對(duì)兩種細(xì)胞的黏附及增殖影響規(guī)律。利用熒光顯微鏡考察了TIO2納米管陣列有序生物透析膜組織工程構(gòu)建中細(xì)胞材料之間的相互影響規(guī)律采用MTT方法檢測(cè)了黏附細(xì)胞的活性及增殖同時(shí)使用掃描電鏡觀察了LLCPK1細(xì)胞及ECV304細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)。在獲取了各單種細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)條件參數(shù)之后考察了混合細(xì)胞之間的相互作用機(jī)理研究了膠原蛋白和動(dòng)態(tài)剪切力對(duì)單種細(xì)胞及混合細(xì)胞的黏附、增殖的影響規(guī)律并對(duì)制備的透析膜材料進(jìn)行了初步的重吸收功能檢測(cè)。研究結(jié)果表明管徑為70NM且退火未光照的TIO2納米管陣列膜最有利于LLCPK1細(xì)胞及ECV304細(xì)胞的黏附及增殖掃描電鏡觀察顯示LLCPK1細(xì)胞在TIO2納米管上的生長(zhǎng)形態(tài)多呈鵝卵石樣并延伸出很長(zhǎng)的偽足且細(xì)胞表面附著密集的微絨毛ECV304細(xì)胞在納米管上呈圓形。細(xì)胞混合種植能較好地促進(jìn)各單種細(xì)胞的黏附生長(zhǎng)混合細(xì)胞的活性要高于兩單種細(xì)胞在材料表面包被膠原蛋白能明顯改善內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、增殖但對(duì)上皮細(xì)胞的影響不大動(dòng)態(tài)剪切應(yīng)力可明顯提高增殖活性且使細(xì)胞分布更均勻有利于細(xì)胞形成單層狀功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)兩種細(xì)胞能在TIO2納米管陣列上存活且能發(fā)揮腎臟的重吸收功能。這為利用組織工程構(gòu)建具有復(fù)合功能的生物人工腎提供了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：人們長(zhǎng)期以來為了尋求一種最佳的血管替代物，嘗試了自體動(dòng)靜脈、人工材料、生物材料等多種方法，但這些方法均存在一些不足。組織工程概念的提出及技術(shù)的逐步成熟使在體外培植具有生物活性，結(jié)構(gòu)、功能與自體血管相類似的人工血管成為可能。本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞和豬主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為種子細(xì)胞，脫除豬主動(dòng)脈血管壁細(xì)胞獲得脫細(xì)胞血管基質(zhì)，為下一步構(gòu)建組織工程血管提供細(xì)胞和支架材料。目的1獲取內(nèi)皮祖細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，為構(gòu)建組織工程血管提供種子細(xì)胞；2制備脫細(xì)胞血管基質(zhì)，為構(gòu)建組織工程血管提供支架材料。方法1無菌條件下采集豬外周血，肝素抗凝，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液相對(duì)密度為1077GML，密度梯度離心分離外周單個(gè)核細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)，獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞EPCS并傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下IM形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)IHC鑒定；無菌條件下取豬胸主動(dòng)脈，采用改良組織塊法分離培養(yǎng)豬主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)IHC鑒定。2采用胰蛋白酶、低滲溶液、化學(xué)除垢劑法處理豬胸主動(dòng)脈來獲得脫細(xì)胞血管基質(zhì)，并對(duì)萁進(jìn)行組織學(xué)觀察和生物學(xué)性能測(cè)試及保存實(shí)驗(yàn)。結(jié)果1成功的培養(yǎng)出內(nèi)皮祖細(xì)胞并傳代。剛分離出的單個(gè)核細(xì)胞小且圓，瑞氏染色呈藍(lán)紫色，至生長(zhǎng)6天時(shí)呈現(xiàn)內(nèi)皮樣改變，倒置顯微鏡下內(nèi)皮細(xì)胞呈“鵝卵石”形態(tài)，CD31，CD34，F(xiàn)LK1和VWF免疫熒光染色為陽性，以及FITCULEXLECTIN和DILACLDL免疫熒光均陽性；成功分離培養(yǎng)出平滑肌細(xì)胞，呈典型的“峰一谷”狀，平滑肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白抗體。2成功獲得脫細(xì)胞血管基質(zhì)，HE染色和掃描電鏡觀察可見脫細(xì)胞組織基質(zhì)中細(xì)胞已全部脫除，膠原纖維和彈性纖維保持原來的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，呈條索狀排列，細(xì)胞已全部去除，基底面完整，透射電鏡下可見膠原纖維橫紋；其膠原蛋白含量和力學(xué)性狀與新鮮組織無明顯差別。結(jié)論1所培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞可為組織工程血管的研究提供細(xì)胞來源；2所制備的脫細(xì)胞血管基質(zhì)可為組織工程血管的研究提供支架材料。

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文骨組織工程體內(nèi)生物反應(yīng)器模型的制作和初步檢測(cè)（題名和副題名）分類號(hào)密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）石志遠(yuǎn)（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名王臻教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱外科學(xué)（骨科學(xué)）論文提交日期200904答辯日期200905論文起止時(shí)間2008年10月至2009年4月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)3骨組織工程體內(nèi)生物反應(yīng)器模型的制作和初步檢測(cè)骨組織工程體內(nèi)生物反應(yīng)器模型的制作和初步檢測(cè)骨組織工程體內(nèi)生物反應(yīng)器模型的制作和初步檢測(cè)骨組織工程體內(nèi)生物反應(yīng)器模型的制作和初步檢測(cè)研究生石志遠(yuǎn)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（骨外）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科導(dǎo)師王臻教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師呂昌偉資助基金項(xiàng)目關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞組織工程；生物反應(yīng)器；動(dòng)物模型中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2009年05月

簡(jiǎn)介：該研究擬探討VWF基因RSAI、SMAⅠ多態(tài)性與血栓性疾病的發(fā)生有無相關(guān)關(guān)系并對(duì)基因芯片技術(shù)在SNP檢測(cè)上的應(yīng)用進(jìn)行探討研究中我們首先建立VWF基因RSAI、SMAI多態(tài)性寡核苷酸陣列檢測(cè)方法設(shè)計(jì)、合成兩組寡核苷酸探針使用3甲氧基氨基丙基硅烷、戊二醛等化學(xué)物質(zhì)實(shí)現(xiàn)探針與固相支持物玻片的連接應(yīng)用不對(duì)稱PCR方法擴(kuò)增RSAI、SMAI多態(tài)性片段在擴(kuò)增體系中摻入熒光標(biāo)記DUTP獲得被測(cè)片段的單鏈標(biāo)記產(chǎn)物對(duì)核酸雜交反應(yīng)的溫度、動(dòng)力學(xué)和離子濃度變化進(jìn)行研究獲得最佳的雜交鑒別條件隨機(jī)抽取20名正常人酶切法確定多態(tài)性基因型再用寡核苷酸陣列法檢測(cè)以驗(yàn)證該方法的準(zhǔn)確性使用該方法對(duì)50例血栓病人進(jìn)行檢測(cè)探討血栓性疾病的發(fā)生與VWF基因RSAI、SMAI多態(tài)性的關(guān)系結(jié)果表明寡核苷酸陣列法和酶切法對(duì)20例標(biāo)本檢測(cè)的符合率為100﹪血栓病人與正常人之間兩位點(diǎn)多態(tài)性的基因型和等位基因頻率的差異均無顯著意義（P005）因而該研究成功建立VWF基因RSAI、SMAI多態(tài)性寡核苷酸陣列檢測(cè)方法為基因芯片技術(shù)在SNP檢測(cè)上的應(yīng)用提供依據(jù)同時(shí)也對(duì)遺傳性疾病的高效診斷途徑進(jìn)行了成功探索未獲明確證據(jù)表明RSAI、SMAI多態(tài)性與血栓的發(fā)生有關(guān)

簡(jiǎn)介：本文介紹了膨脹土對(duì)土木工程巨大的影響和危害，以及目前常用的預(yù)防和處理膨脹土病害的化學(xué)改性方法。而地球表面的土體里含有豐富活躍的微生物，是地質(zhì)環(huán)境中重要的組成部分。通過對(duì)膨脹土的脹縮機(jī)理、化學(xué)改良機(jī)理及微生物特性的分析發(fā)現(xiàn)，將微生物引入到膨脹土的土性處理中是可行的，且具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益和工程意義。本研究從膨脹土的脹縮性質(zhì)、改性機(jī)理出發(fā)，由土中分離出適宜的菌株，制成固體菌劑。將制好的微生物菌劑添加到膨脹土中，經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)后，以自由膨脹率為判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初篩，篩選出4株使膨脹土自由膨脹率有明顯降低的菌株。并對(duì)這4株菌株作用后的膨脹土進(jìn)行直剪試驗(yàn)和其他脹縮性試驗(yàn)無荷載膨脹量、有荷載膨脹量、膨脹力和收縮試驗(yàn)，由此試驗(yàn)結(jié)果對(duì)菌株進(jìn)行復(fù)篩，得到1株篩選株暫時(shí)定名A。為得到篩選株A對(duì)膨脹土工程性質(zhì)的影響，通過多項(xiàng)試驗(yàn)研究了摻入A前后的膨脹土在培養(yǎng)不同天數(shù)后的脹縮特性、強(qiáng)度特性等方面的變化，同時(shí)借助X射線衍射、掃描電鏡測(cè)試技術(shù)，研究了膨脹土在微生物作用下礦物成分和細(xì)觀結(jié)構(gòu)的變化，為下一步揭示微生物改變膨脹土工程性質(zhì)的機(jī)理研究提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：本文嘗試運(yùn)用SHOTGUN蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)和策略解決生物工程中的問題首先將蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用于抗生素代謝途徑的研究；其次將蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用于腫瘤生物標(biāo)志物和潛在藥物靶標(biāo)的尋找；在此基礎(chǔ)上引入O同位素標(biāo)記技術(shù)定量地考察K562細(xì)胞調(diào)亡過程中蛋白質(zhì)組的變化結(jié)果如下運(yùn)用2DLCMSMS分析了藤黃灰鏈霉菌抗生素生產(chǎn)期菌株103和CNNL的總蛋白分別得到726和809個(gè)蛋白運(yùn)用生物信息學(xué)手段結(jié)合實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果將所有可能的代謝途徑關(guān)鍵酶在所構(gòu)建的數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行搜索兩個(gè)菌株中均發(fā)現(xiàn)有聚酮合成途徑的關(guān)鍵酶聚酮合成酶和其它幾個(gè)與該途徑相關(guān)的酶說明麥拓萊霉素通過聚酮合成途徑合成結(jié)合Β酮酯酰合酶的抑制劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明以上結(jié)論的正確性展示了蛋白組學(xué)在尋找生物合成途徑方面的價(jià)值基于SHOTGUN、一維凝膠電泳預(yù)分離策略分離鑒定了K562細(xì)胞總蛋白提取物得到1707個(gè)蛋白運(yùn)用生物信息學(xué)手段對(duì)腫瘤生物標(biāo)志物和藥物靶標(biāo)進(jìn)行了預(yù)測(cè)表明MLL3、SET、DEK、STATHMIN、NUCLEOPHOSMIN等蛋白可能為潛在的生物標(biāo)志物或治療腫瘤和白血病的藥物作用靶點(diǎn)通過亞細(xì)胞分級(jí)、一維凝膠電泳、串聯(lián)質(zhì)譜分析了K562細(xì)胞核蛋白質(zhì)共鑒定了334個(gè)蛋白其中檢測(cè)到了與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、診斷相關(guān)的重要基因產(chǎn)物包括NF45PROTEIN、PIBF1、DDX48、IKAP等蛋白提供了可深入研究的腫瘤相關(guān)分子靶標(biāo)采用180同位素標(biāo)記法定量比較了多烯紫杉醇誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡過程中可溶性蛋白質(zhì)組的變化在所分析的86個(gè)蛋白中46個(gè)蛋白表達(dá)量沒有發(fā)生變化15個(gè)蛋白表達(dá)量下調(diào)包括SET蛋白、延長(zhǎng)因子EEF1A1等；20個(gè)蛋白表達(dá)量上調(diào)包括Α烯醇酶、過氧化物還原酶等這些被抑制和被激活的蛋白可能為腫瘤生物標(biāo)志物和藥物作用靶點(diǎn)為腫瘤的診斷和治療提供了新的候選蛋白

簡(jiǎn)介：山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文NK4因子原核基因工程表達(dá)體系的建立及抗腫瘤生物學(xué)活性研究姓名馮仟佳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師牛勃20060528ABSTL‘ACTOBJEC舡VE1．TOEXPRESSNK4INESCHERCHIACOH2．TOSEPARATEAILDPURI母NK43．TODETECTTHEACTIVITYOFNK4ANTAGONJZINGTILMORMETHODSWEHAVEPR印AREDANOVDKINDOFPROTEINFACTO卜NK4WHICHCAN鋤TA90NIZETL】M0T鯽DBLOODVESSD舯WTLLINECD，IBL21．WEHAVEDETECTEDTHEACTIVI夠OFNK4ANTAGOLLI五NGMMORBY加VF舳EXP幽ENT．111EEXPERIMELLTCONSISTSOFDETECTINGTHESELECTJONE艉CTOFNK4HLLINGTLLMORCELLBYMTTMEMOD，NK4’SDI婦ENTSUPPRESSIONEFFECTSTOTILIILOR’SINV枷NGBAS鋤ENTM御BR卸E，NK4’S加CDONSOFSUPPRESS曲GB16BL6STICLINGTOBASEMENTMEMBRANE，SU】PRESSINGNMMCELLMOVINGDITECTLYANDSUIPIESSINGRATCAPILLARYBLOODVESSD’SFOM撕ON．RESULTS1．NK4WASEXPRESSEDINECD矗SUCCESSFLLNY．2．NK4WASS印ARATED，P誠(chéng)FIEDANDRENATLLRED．3．THEACTIV耐OFNK4SUPPRESSINGT哪ORCDLINVADINGA11DMETASTASISWASCONFIRNLED．CONCIUSIONWEHAVEEXPRESSNK4I11EC0矗SUCCESS向1LYANDH“EGOTⅡ1EBESTOPERATINGCONDITIONSINLABORATORYOFTHECXPRCSSIONSYST鋤ANDMENHAVEPRODUCEDPURENK4．111VASIOⅡAILDMETASTASISARETHEMOSTINTRINSJCQUALITIESOFMALIGN趼TTUMORS．HOWTOPREVENT柚DTREATTHEMISON。FOC旺S曲OUTCANCER．BY加VF加EXP舐MELLT，WEHAVECON蠡HNEDTHEACTIVNYT11ATNK4CANSUPPRESSTUMORCENINVADINGA11DMETASTASIS．THISHAVELAIDEXPERIMENTALANDTHEORETICALBASESFORDEVELOPINGBIOCH鋤ICALPHAⅡNACEUTICALSINCLINICAL6ELD．KEYWORDSNK4，GENEENGINEERIN昌BI010西CALACTIVITY，SUPPRESSTL】MORINVASIONA11DMETASTASISJL

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多工程菌生物轉(zhuǎn)化D-型氨基酸的研究——D-海因酶基因的克隆、表達(dá)、純化及其性質(zhì).pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：在了解天然產(chǎn)物生物合成途徑以及相關(guān)基因信息的基礎(chǔ)上，人工改造調(diào)控基因，或者實(shí)現(xiàn)相關(guān)基因簇的異源表達(dá)，從而獲得具有新結(jié)構(gòu)新活性的抗生素，是鏈霉菌代謝工程改造的兩個(gè)重要途徑。TALLYSOMYCINTLMH1是由TLMH基因失活后的工程菌SHINDUSTANUSSB8005合成的主要產(chǎn)物。它作為糖肽類抗腫瘤抗生素TLM和BLM的新型類似物，具有與母體相似的DNA切割活性。然而，這種新型抗生素在工程菌中的低產(chǎn)量極大地限制了對(duì)其活性和應(yīng)用的進(jìn)一步研究。本研究旨在通過采用各種有效的方法來優(yōu)化TLMH1的培養(yǎng)基組分，并進(jìn)行發(fā)酵放大提高其產(chǎn)量。文章結(jié)合單因素優(yōu)化，PLACKETTBURMAN設(shè)計(jì)和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)等方法來進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果顯示CUSO4，麥芽糖，DGS是培養(yǎng)基中3個(gè)最重要的影響因子，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析確定最佳培養(yǎng)基后，相應(yīng)的上罐放大發(fā)酵最高產(chǎn)量為2499MGL，比原始培養(yǎng)基的產(chǎn)量高出268倍，比原始菌TLM的產(chǎn)量高出129倍。經(jīng)AMBERLITEIRC50離子交換樹脂和DIAIONHP20大孔樹脂上柱分離后，HPLC分析純度可達(dá)到95％以上。RAPAMYCINRAP是一種由吸水鏈霉菌合成的大環(huán)內(nèi)酯抗生素。盡管其生物合成途徑已得到全面深入的研究，但其詳細(xì)的合成機(jī)制尤其是調(diào)控機(jī)理并未完全明了，極大地阻礙了RAP產(chǎn)量的提高和新型衍生物的產(chǎn)生，以及其工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。本文在構(gòu)建三種RAP異源生產(chǎn)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，首先用生物分析方法檢測(cè)各系統(tǒng)中RAP異源生產(chǎn)的情況，結(jié)果表明僅SALBUS2811顯示出與RAP相似的抗菌活性，而HPLC和LCMS分析并未檢測(cè)到RAP，添加重要前體L賴氨酸也無明顯作用。隨后的RTPCR分析結(jié)果表明絕大部分的RAP基因在SALBUS中未被正常轉(zhuǎn)錄，只有下游的RAPG，RAPF和RAPD顯示轉(zhuǎn)錄信號(hào)，5個(gè)可能的RAP調(diào)節(jié)基因中僅有RAPG正常轉(zhuǎn)錄，因此RAP基因表達(dá)調(diào)控的不足或不當(dāng)很可能是限制基因簇正常轉(zhuǎn)錄的重要原因。通過這些基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況的研究，我們可深入了解RAP生物合成的調(diào)控機(jī)理，為最終實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：基于節(jié)能的需要以及人們對(duì)照明質(zhì)量要求的不斷提高半導(dǎo)體照明光源以其高效節(jié)能、長(zhǎng)壽命、色彩豐富和環(huán)保等特點(diǎn)受到了人們的廣泛關(guān)注。本文對(duì)發(fā)光二極管LED陣列應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)工程的計(jì)算和設(shè)計(jì)進(jìn)行了探討和研究。發(fā)光二極管LED光源技術(shù)近年來在醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域中的發(fā)展較為迅速主要是在理療、美容、保健等領(lǐng)域的應(yīng)用比較廣泛。依據(jù)LED在醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用特點(diǎn)將其應(yīng)用技術(shù)進(jìn)行分類重點(diǎn)從醫(yī)用照明醫(yī)療診斷和LED光療三個(gè)方面加以說明分析。文中結(jié)合軟件和照明算法提出的對(duì)LED陣列照明進(jìn)行計(jì)算機(jī)仿真設(shè)計(jì)的思路是一種事前估計(jì)在照明器制造出以前就可以分析其光學(xué)特性是否符合照明標(biāo)準(zhǔn)減少了人力和物力的消耗縮短了設(shè)計(jì)和制造周期提高了經(jīng)濟(jì)效益。論文首先論述了LED照明發(fā)展概況、LED光源的特性、驅(qū)動(dòng)電路的設(shè)計(jì)對(duì)LED光源在照明中的應(yīng)用作了深入探討。接著對(duì)LED照明設(shè)計(jì)中的相關(guān)計(jì)算主要是對(duì)照度計(jì)算和光通量計(jì)算的方法進(jìn)行了總結(jié)和編程計(jì)算根據(jù)疊加原理推出了兩個(gè)LED光源在平面上產(chǎn)生照度的公式根據(jù)相同的原理進(jìn)一步推出多個(gè)LED光源產(chǎn)生照度的計(jì)算方法。對(duì)不同半光強(qiáng)角以及不同功率的LED單元陣列應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的設(shè)計(jì)進(jìn)行了探討的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究了LED陣列呈矩形、內(nèi)圓柱面及外圓柱面等特殊排列的分布根據(jù)不同排列分布得出不同LED陣列照度分布仿真圖像并且根據(jù)圖像對(duì)不同LED陣列進(jìn)行分析總結(jié)比較各種陣列的特點(diǎn)分析出適合此陣列的應(yīng)用領(lǐng)域。最后實(shí)際設(shè)計(jì)智能化的LED驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)并且設(shè)計(jì)了手術(shù)無影燈和新生兒黃疸治療儀等兩個(gè)實(shí)際應(yīng)用的系統(tǒng)。相關(guān)成果可為L(zhǎng)ED醫(yī)學(xué)應(yīng)用的設(shè)計(jì)和研究提供依據(jù)。

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簡(jiǎn)介：在微生物的篩選過程中，95％的菌株在現(xiàn)有篩選模型下不顯示任何生物活性的菌株。如何有效合理利用這些菌株，是眾多學(xué)者關(guān)注的問題。本文利用核糖體工程技術(shù)對(duì)這些菌株二次開發(fā)，對(duì)開拓海洋微生物藥用新資源的方法學(xué)進(jìn)行了探討。本實(shí)驗(yàn)以一株沒有抗腫瘤活性的海洋放線菌玫瑰黃鏈霉菌為出發(fā)菌株，采用引入抗生素氯霉素，鏈霉素抗性的方法，即核糖體工程技術(shù)，進(jìn)行誘導(dǎo)突變，共獲得有抗生素抗性的突變株270株。突變株的菌落形態(tài)、孢子顏色以及代謝產(chǎn)物與母體菌株有顯著的差異。對(duì)突變株的發(fā)酵產(chǎn)物利用小鼠乳腺癌細(xì)胞TSFT210，以細(xì)胞周期抑制、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)及壞死性細(xì)胞毒活性為指標(biāo)，進(jìn)行活性篩選，共獲得有顯著抗腫瘤活性的突變株3株。對(duì)其中一株活性較好的突變株STR3054進(jìn)行大量發(fā)酵，采用活性追蹤的方法對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物的活性成分進(jìn)行初步分離，共獲得6個(gè)單體化合物；利用波譜學(xué)方法闡明了其中5個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，分別為鄰苯二甲酸二異丁酯，丁烯二酸二2乙基正己酯Z，R，R，次黃嘌呤核苷，尿嘧啶核苷，環(huán)PROGLY二肽；其中丁烯二酸二2乙基正己酯Z，R，R為新化合物。利用TSFT210細(xì)胞鏡檢，流式細(xì)胞術(shù)和SRB法對(duì)化合物進(jìn)行活性評(píng)價(jià)，其中4個(gè)化合物表現(xiàn)出一定的壞死性細(xì)胞毒活性，1個(gè)化合物表現(xiàn)為細(xì)胞周期抑制活性。對(duì)該菌株突變前后的核糖體S12蛋白編碼的基因RPSL進(jìn)行PCR擴(kuò)增表達(dá)，將表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5A，進(jìn)行測(cè)序。比較菌株突變前后的RPSL序列差別，發(fā)現(xiàn)該段基因并沒有發(fā)生點(diǎn)突變，推測(cè)可能存在其它突變位點(diǎn)影響該菌株的鏈霉素抗性，尋找新突變點(diǎn)的研究有待于進(jìn)一步深入。該測(cè)序結(jié)果通過GENBANK的查找，與STREPTOMYCESFILAMENTOSUSS12蛋白對(duì)應(yīng)的RPSL基因有97％的相似度，證明本實(shí)驗(yàn)克隆得到的序列正是RPSL基因。綜上，本文利用核糖體工程技術(shù)首次對(duì)沒有抗腫瘤活性的海洋放線菌進(jìn)行誘變，得到具有顯著抗腫瘤活性的突變株。對(duì)該突變株的代謝產(chǎn)物進(jìn)行初步研究，得到具有抗腫瘤活性的單體化合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了利用該方法開拓海洋微生物藥用資源的可行性。利用核糖體工程技術(shù)對(duì)自然界的無活性微生物進(jìn)行誘導(dǎo)，激活微生物潛在的基因資源來獲得活性菌株，該方法的成功應(yīng)用將極大的拓展微生物藥用新資源。

簡(jiǎn)介：奎尼酸是一種具有極高價(jià)值的精細(xì)化工產(chǎn)品和醫(yī)藥中間體，在醫(yī)藥工業(yè)、食品工業(yè)、化工等行業(yè)均有較大的用途。本研究是將代謝工程技術(shù)應(yīng)用于產(chǎn)奎尼酸基因工程菌的構(gòu)建。根據(jù)代謝工程原理系統(tǒng)分析了細(xì)胞代謝網(wǎng)絡(luò)，并利用DNA重組技術(shù)合理設(shè)計(jì)細(xì)胞代謝途徑及其遺傳修飾，進(jìn)而完成細(xì)胞特性改造。目的是在大腸桿菌中構(gòu)建奎尼酸生物合成途徑，將碳代謝流最大程度的引向奎尼酸生成的方向。利用大腸桿菌莽草酸途徑合成新的代謝物奎尼酸，需要提高上游幾種代謝中間產(chǎn)物PEP、E4P、DAHP、DHQ的含量，與之對(duì)應(yīng)的編碼其合成酶的幾種基因分別是PPSA、TKTA、AROG、AROB。另外須在宿主細(xì)胞引入編碼與奎尼酸合成有關(guān)的異源酶基因擴(kuò)展代謝途徑，然后串聯(lián)表達(dá)酶基因，同時(shí)適量增加不同種屬的多個(gè)關(guān)鍵酶的有效含量，改善限速反應(yīng)。利用同源重組進(jìn)行基因整合和基因破壞，改造染色體結(jié)構(gòu)定向改變微生物代謝途徑。本文主要從以下幾個(gè)方面對(duì)奎尼酸基因工程菌進(jìn)行了改造1編碼奎尼酸脫氫酶的QUTB基因是來自于構(gòu)巢曲霉。在現(xiàn)有的基礎(chǔ)上構(gòu)建了一系列包含QUTB基因的表達(dá)重組質(zhì)粒。SD序列與起始密碼子不同距離的PBVQUTB1，PBVQUTB2；具有QUTB雙拷貝三基因串聯(lián)的PBVQUTBQUTBAROG；具有PPSA、TKTA、QUTB三基因串聯(lián)的PBVPTB，以及新構(gòu)建的單基因重組質(zhì)粒PETQUTB，PBVTACQUTB，PTRCQUTB。并對(duì)含有QUTB基因的一系列重組質(zhì)粒在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)與否的驗(yàn)證。結(jié)果顯示PTRCQUTB，PBVTACQUTB沒有特異的蛋白表達(dá)帶，說明PTRC99A和PBVTAC載體不適合用于QUTB基因的表達(dá)。PETQUTB經(jīng)過IPTG誘導(dǎo)后有特異的蛋白表達(dá)，并且在25小時(shí)內(nèi)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但是時(shí)間更長(zhǎng)7H則因?yàn)榈鞍捉到舛霈F(xiàn)表達(dá)蛋白減少的跡象。PBVQUTB1和PBVQUTB2同本實(shí)驗(yàn)室保存的PBVQUTB沒有出現(xiàn)明顯的蛋白表達(dá)量上的差異，這說明利用PBV220表達(dá)載體表達(dá)QUTB基因，起始密碼子與SD序列之間距離的遠(yuǎn)近并不是影響其表達(dá)量的關(guān)鍵。含有兩個(gè)QUTB基因和一個(gè)AROG基因的多基因串連質(zhì)粒PBVQUTBQUTBAROG，經(jīng)過熱誘導(dǎo)，也出現(xiàn)了非常明顯的表達(dá)條帶。2對(duì)含有QUTB基因在大腸桿菌中可以表達(dá)幾種重組質(zhì)粒進(jìn)行酶活測(cè)定，與含有PBVQUTB的對(duì)照菌相比，含有PBVQUTB1，PBVQUTB2的菌株的奎尼酸脫氫酶的酶活沒有明顯變化，三基因串聯(lián)的PBVQUTBQUTBAROG甚至出現(xiàn)了酶活降低的現(xiàn)象。3成功地從粗糙脈孢菌的基因組中克隆了奎尼酸脫氫酶的基因QA3，并與幾種表達(dá)載體連接得到了PBVQA3、PETQA3、PBVTACQA3、PTRCQA3，但是這些質(zhì)粒重組子在大腸桿菌中均沒有觀察到該基因的特異表達(dá)條帶。4結(jié)合QA3基因的密碼子的特點(diǎn)和計(jì)算機(jī)模擬的MRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，對(duì)AQ3基因的密碼子和MRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，優(yōu)化該基因的密碼子結(jié)構(gòu)，降低形成MRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的自由能，得到新的基因QA3RG。構(gòu)建的PBVQA3RG重組質(zhì)粒在大腸桿菌中成功的表達(dá)了奎尼酸脫氫酶，酶活也比對(duì)照明顯提高。同時(shí)還構(gòu)建了PPSA、TKTA、QA3RG三基因串聯(lián)的重組質(zhì)粒PBVPTA。5成功的構(gòu)建了PUCDK、PUCDAK、PUCDBK并制備了線性化片段DK、DAK、DBK，為基因敲除和基因替換做好了準(zhǔn)備。利用RED重組系統(tǒng)成功的地進(jìn)行了基因敲除和基因替換，并穩(wěn)定了敲除和替換菌株的基因型，把這株菌株定名為大腸桿菌31K。6成功的構(gòu)建奎尼酸發(fā)酵的工程菌5、AP、B、A、BP、5K、APK、BK、AK、BPK、220K。通過實(shí)驗(yàn)室搖瓶初步發(fā)酵，在硅膠板上可以初步確定，菌株AP31BKPBVPQLA產(chǎn)生的奎尼酸量最大，也最穩(wěn)定。7將菌株AP擴(kuò)大搖瓶發(fā)酵的規(guī)模，然后經(jīng)過樹脂富集，HPLC制備，得到了微量的奎尼酸樣品。經(jīng)過紅外光譜、核磁共振、電子噴霧質(zhì)譜以及紫外、液質(zhì)聯(lián)用等的鑒定可以確定與奎尼酸標(biāo)準(zhǔn)品無差異，由此可以確定我們利用生物合成并且分離鑒定了奎尼酸?？傊瑸榱撕铣煽崴岵⑻岣咂洚a(chǎn)量，本研究從分子進(jìn)化、基因重組、網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建等不同的方面對(duì)奎尼酸生物合成進(jìn)行了許多有益嘗試，既為研究奎尼酸的生物合成奠定了基礎(chǔ)，也為基因工程應(yīng)用于代謝工程提供一定的借鑒意義。

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簡(jiǎn)介：湖北工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文石油微生物基因工程菌的構(gòu)建姓名葉長(zhǎng)春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)發(fā)酵工程指導(dǎo)教師汪浩勇20090501湖北工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTPETROLEUMISTHELIFEBLOODOFTHEINDUSTRIALWORLDANDECONOMICDEVELOPMENTWHILETHEDEVELOPMENTANDUTILIZATIONOFPETROLEUMRESOURCESALEFACEDWITHASERIESOFSERIOUSPROBLEMSMICROBIALERDAANTEDOILRECOVERYISOILEOFTHESOLUTIONSTOTHESEPROBLEMSNOWADAYS，THEMAINWAYOFOBTAININGPETROLEUMMICROORGANISMSISFIOMNATURALSELECTIONORTHEDIRECTUSEOFTHEMICROORGANISMSINOILBUTNATURALPETROLEUMMICROBEISNOGOODATACIDRESISTANCE，HIGHTEMPERATUREANDHIGHSALTTOLERANTINORDERTOSOLVETHISPROBLEMTHISSTUDYCONSTRUCTEDOPERONMB7INECOLIBYUSINGTECHNIQUESFORGENEENGINEERINGANDTHENOPERONMB7WASSUCCESSFULLYINTEGRATEDINTOTHEOILMICROBIALGENOMETHROUGHTRANSPOSITIONUSINGORIGINALSTRAINHTLB5PNASCONTR01THETRANSPOSITIONPOSITIVEOILMICROBESHOWEDAHIGHDEGREEOFRESISTENCETOACIDANDHIGHTEMPERATURE耽ERESEARCHPROVEDTHATMB7MAYSIGNIFICANTLYIMPROVEOILMICROBIALRESISTANCEONACIDANDITSRESISTANCEONHIGHTEMPERATUREPRELIMINARYTHEPAPEL“EXPLORESTHECONSTRUCTINGMETHODOFGENEENGINEERINGBACTERIAOFPETROLEUMMICROBE，TOANALYSETHEIMPACTOFHEATSHOCKPROTEINONPETROLEUMMICROBEINADVERSITYINORDERTOFURTHERCONSTRUCTHIGHACIDRESISTANCE，HIGHALKALIANDHI【GLASALTTOLERANTMICROORGANISMS，THISSTUDYPARTIALLYDIGESTEDSAU3ACHROMOSOMALOFPETROLEUMMICROBEINSERTEDBEFORETHENONPROMOTERCHLORAMPHENICOLRESISTANCEGENEANDESTABLISHEDGENEDATABASEUSINGTHEEHLORAMPHENICOLRESISTANTLBPLATE，THECHLORAMPHENICOLRESISTANTSTRAINSWEREIDENTIFIEDUSINGTHISMETHODSUCCESSFULLYFROMPETROLEUMMICROBEHUB5PNISOLATEDHUB5PNPROMOTERHUB5PNPROMOTERCANSIGNIFICANTLYINCREASETHERESISTANCETOCHLORAMPHENIC01THESUCCESSFULISOLATIONOFPROMOTERSEQUENCESOFPETROLEUMMICROBEHAS1AIDALIABLEANDPRACTICALFOUNDATIONFORTHEFURTHERCONSTRUCTIONOFE伍CIENTGENEENGINEERINGBACTERIUMOFPETROLEUMMICROBEKEYWORDSHSP，HEATSHOCKPROTEIN，PETROLEUMMICROBE，PLASMID，GENEENGINEERINGN