簡介：點擊查看更多重組腺病毒介導(dǎo)的Sox9基因轉(zhuǎn)染終板軟骨細胞生物學(xué)效應(yīng)的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本文主要從以下幾個部分展開論述第一部分我國大陸登革病毒全基因的時空分析研究方法從NCBI的GENBANKWWWNCBINLMNIHGOVGENBANK中下載我國大陸1978年至2011年登革病毒全長基因序列，并同時下載國際公認標準株序列，即登革病毒Ⅰ型夏威夷株（DENV1，HAWAII株）、登革病毒Ⅱ型新幾內(nèi)亞株DENV2，NEWGUINEAC株、登革病毒Ⅲ型H87株（DENV3，H87株）和登革病毒Ⅳ型H241株（DENV4，H241株）。將DENV1和DENV2病毒的基因序列裝載到MEGA505軟件中進行多序列比對，比對完成后構(gòu)建系統(tǒng)進化樹和基因的遺傳進化距離。對四種血清型的氨基酸變異分析，使用統(tǒng)計軟件SPSS130軟件。計量資料采用均數(shù)±標準差X±S。對于符合參數(shù)檢驗的多組之間采用ONEWAYANOVA（檢驗統(tǒng)計量F），兩組間采用STUDENTTTEST（檢驗統(tǒng)計量T）對于不符合參數(shù)檢驗的多組之間采用非參數(shù)檢驗KRUSKALWALLIS檢驗（檢驗統(tǒng)計量X2）、MANNWHITNEYU檢驗（檢驗統(tǒng)計量Z），取雙側(cè)P＜005為有統(tǒng)計學(xué)差異。研究結(jié)果1共納入分析登革病毒40株，其中DENV1為19株，DENV2為11株，DENV3為6株，DENV4為4株。DENV1和DENV2的14個基因區(qū)域與全基因構(gòu)建的進化樹不完全相似，并且各個基因的遺傳進化距離變異較大。2根據(jù)登革病毒的四種血清型分為四組DENV1氨基酸突變個數(shù)為85211±13252個DENV2為72727±21448個DENV3為59167±22649個DENV4為82±18129個。統(tǒng)計分析結(jié)果顯示四種血清型的登革病毒之間的氨基酸變異個數(shù)具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異F5661，P0003，進一步的多重比較選LSD法，DENV1與DENV2和DENV3氨基酸變異數(shù)存在顯著性差異P0002和P0003，其余組之間無顯著性差異，說明DENV1的氨基酸變異個數(shù)最多。3根據(jù)登革病毒的分離時間和血清型分為四組1991年至2000年的DENV1，共5株，開放閱讀框的氨基酸變異個數(shù)82±67個2001年至2010年的DENV1，共12株，氨基酸變異個數(shù)為892±142個1991年至2000年的DENV2，共4株，氨基酸變異個數(shù)為748±78個2001年至2010年的DENV2，共4株，氨基酸變異個數(shù)為700±57個。統(tǒng)計分析結(jié)果顯示四組之間的氨基酸變異個數(shù)具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異F3671，P0029進一步研究發(fā)現(xiàn)以2000年以后流行的DENV1和DENV2病毒株的E基因區(qū)域（非參數(shù)檢驗MANNWHITNEYU法）和NS1基因區(qū)域（參數(shù)檢驗STUDENTST法）的氨基酸變異個數(shù)存在顯著性統(tǒng)計學(xué)差異（E基因區(qū)域Z2961，P0003NS1基因區(qū)域T4896，P＜0001）。4進一步分析發(fā)現(xiàn)在DENV1病毒株的E基因區(qū)域出現(xiàn)N290D、L402F和A473T的突變，在NS1區(qū)域中出現(xiàn)R101K、G105R、D340E和L349M的突變，而這些突變位點在DENV2病毒株中未出現(xiàn)。5根據(jù)登革病毒流行的地點分為兩組流行于廣州地區(qū)的DENV1共14株，NS3的氨基酸變異個數(shù)為121±20個非廣州地區(qū)的DENV1共5株，NS3基因區(qū)域的氨基酸變異個數(shù)為98±18個。流行于廣州地區(qū)的DENV1病毒株，其NS3區(qū)氨基酸變異數(shù)高于非廣州地區(qū)，差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性意義T23，P0034廣州地區(qū)的DENV2共4株，NS3基因區(qū)域的氨基酸變異個數(shù)為128±15個，非廣州地區(qū)的DENV2共7株，NS3基因區(qū)域的氨基酸變異個數(shù)為84±45個，流行于廣州地區(qū)的DENV2病毒株，其NS3區(qū)的氨基酸變異數(shù)高于非廣州地區(qū)，差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性意義Z22，P0042。第二部分NS1蛋白捕獲法診斷登革熱的系統(tǒng)評價研究方法制定文獻納入標準，需要實驗室確診為登革病毒感染，以下三種方法之一，即病毒的分離和鑒定、病毒RNA檢測和IGM和或IGG血清學(xué)轉(zhuǎn)換的血清學(xué)的檢測，同時報道有NS1檢測結(jié)果納入研究的登革病毒感染人群和對照人群的樣本量，每組至少50例。檢索數(shù)據(jù)庫NCBIPUBMED、ISIWEBOFSCIENCE、GOOGLE學(xué)術(shù)和中國學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫THECHINESENATIONALKNOWLEDGEINFRASTRUCTUREDATABASES，CNKI，檢索的時間設(shè)定均從建庫到2012年10月。檢索詞以“DENGUE”、“NS1”或“NONSTRUCTURE1”、“DIAGNOSIS”主題詞進行布爾邏輯搭配檢索。提取數(shù)據(jù)，評價納入研究的文獻質(zhì)量，并使用STATA110軟件進行數(shù)據(jù)分析。研究結(jié)果共納入18篇觀察性研究，12313患者。單用NS1檢測法，分為兩種，即酶聯(lián)免疫吸附法和免疫層析法。登革熱病毒血清分型DENV1為50％909％之間，DENV2為385857％，DENV3為467913％和DENV4為21787％。第三部分臨床癥狀和體征預(yù)測重癥登革熱的系統(tǒng)評價研究方法制定文獻納入標準，符合登革熱診斷標準，不限納入研究的類型，可以是觀察性研究，明確將患者分為登革熱和重癥登革熱（登革出血熱或登革休克綜合征），并能分別獲得各組患者臨床癥狀和體征的信息。研究結(jié)果16篇研究納入分析，共納入分析11個因素，分別為性別、惡心嘔吐、出血（牙齦出血、鼻出血、嘔血和黑便）、頭痛、腹痛、眶后痛、皮疹、腹瀉、肝腫大、乏力和束臂試驗。第四部分2014年廣東省212例登革熱的臨床特征分析研究方法納入2014年6月至10月在南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院和廣州市第八人民醫(yī)院住院的登革熱患者回顧性分析，入選標準患者符合2009年WHO發(fā)布的登革熱診療指南的診斷標準。采用SPSS130軟件進行統(tǒng)計分析，對于符合參數(shù)檢驗的計量資料采用均數(shù)±標準差X±S表示，組間比較采用T檢驗STUDENTSTTEST不符合參數(shù)檢驗的計量資料采用中位數(shù)和極大值、極小值表示，組間比較采用非參數(shù)檢驗（KRUSKALWALLISTEST）。采用MEDCALC軟件繪制受試者工作特征曲線RECEIVEROPERATINGACTERISTICCURVE，ROC曲線），并統(tǒng)計ROC曲線下面積AREAUNDERTHEROC，AUC，以及臨界值。二分類的LOGISTIC回歸用于分析預(yù)測重癥登革熱的因素。P值取雙側(cè)，且P＜005有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)果共納入212例住院患者，平均年齡為406±160歲，男性102例，女性110例，登革熱組患者為174例，重癥登革熱組患者38例。兩組患者在性別上存在顯著性差異P0003，重癥登革熱患者女性較多。兩組患者的臨床表現(xiàn)中，重癥登革熱患者中出現(xiàn)意識障礙、嗜睡、黃疸、胸腔積液、腹水、HCT升高超過20％伴血小板快速降低和陰道出血顯著高于登革熱患者（P均小于005）。血液學(xué)參數(shù)結(jié)果提示重癥登革熱患者的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、草氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST、白細胞計數(shù)WBC、活化部分凝血酶原時間APTT和凝血酶原時間PT顯著性高于登革熱患者（P均小于005），而白蛋白ALB和PLT計數(shù)PLT則均顯著性低于登革熱患者。AST和ALB對診斷重癥登革熱的價值較低ROC曲線下面積在0507之間，ALT、WBC和APTT診斷重癥登革熱的價值也較低（雖然ROC曲線下面積在0709之間，但是95％置信區(qū)間包含有05），PLT和PT對重癥登革熱的診斷，其準確性中等。結(jié)論12000年以后主要為DENV1的流行，E基因和NS1基因區(qū)域的氨基酸突變可能是原因之一而不同區(qū)域的DENV1和DENV2的流行程度可能與NS3基因區(qū)域的氨基酸突變有關(guān)。2單用NS1檢測法可以用來確診登革病毒的感染，NS1聯(lián)合IGM檢測法可以用來監(jiān)測登革熱。NS1檢測法可以鑒別出DENV1和DENV3。此外，商用DENGUENS1AGSTRIP試劑是診斷和病毒血清分型的最佳試劑。3登革熱患者存在惡心嘔吐、持續(xù)腹痛、皮疹、明顯出血傾向和肝腫大的登革熱患者更易進展為重癥登革熱，而頭痛的患者進展為重癥登革熱的概率較低。其他因素，如疲乏、眶后痛、腹瀉和束臂試驗不能預(yù)測重癥登革熱。4我國大陸登革熱患者中，女性更易進展為重癥登革熱。與重癥登革熱相關(guān)的臨床特點和血液學(xué)參數(shù)為意識障礙、嗜睡、黃疸、胸腔積液、腹水、陰道出血、ALT、AST、ALB、WBC、PLT、APTT和PT。二分類的LOGICTIC回歸分析結(jié)果顯示，性別和血液學(xué)參數(shù)WBC、PLT和PT是可以用來預(yù)測重癥登革熱。

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簡介：目的國外的研究顯示牙周炎在不同程度上對非酒精性脂肪肝、肝癌及肝移植均有一定影響，認為牙周炎促進了這些肝病的進程，但國內(nèi)外尚未見有關(guān)病毒性肝炎及其相關(guān)肝硬化與牙周炎關(guān)系的研究，本研究旨在觀察病毒性肝炎及其相關(guān)肝硬化與牙周炎的關(guān)系。方法本次研究調(diào)查的對象為解放軍白求恩國際和平醫(yī)院全軍肝病中心收治的病毒性肝炎患者及家屬。按納入排除標準審核最后進入研究的對象共221人。本次實驗采用的調(diào)查方法是橫斷面調(diào)查。共分兩個部分，即問卷調(diào)查及臨床檢查。其中問卷調(diào)查為相關(guān)情況的問題式調(diào)查受調(diào)查者在現(xiàn)場進行填寫，受調(diào)查者有疑問的題目由檢查者親自解釋。牙周健康狀況的檢查由具有口腔執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格證的一名口腔醫(yī)生及一名口腔助理醫(yī)師進行，兩名醫(yī)師對檢查結(jié)果進行記錄和復(fù)核并對檢查的各個步驟進行標準化，結(jié)果表明檢查結(jié)果高度一致（KAPPA值095）為盡量減少住院患者由于使用藥物等臨床干預(yù)措施而影響肝病情況的評估，本次實驗使用的數(shù)據(jù)均選取患者于白求恩國際和平醫(yī)院全軍肝病中心初治時的實驗室檢查結(jié)果。對肝硬化患者的肝病情況進行CHILDPUGH改良分級法評分，最低分為5分，最高分為15分，牙周炎計算牙周附著喪失的大小。對調(diào)查的結(jié)果采用SPSS19軟件進行統(tǒng)計分析。使用獨立樣本T檢驗考察肝病人群及健康人群牙周附著喪失的差異，進而將調(diào)查對象按年齡分組，對同一年齡組對象再次使用獨立樣本T檢驗考察肝病人群及健康人群牙周附著喪失的差異。將肝硬化組病人的CHILDPUGH改良分級法評分與牙周患者牙周附著喪失毫米數(shù)進行線性相關(guān)分析，評價兩者相關(guān)性。將所調(diào)查的年齡、性別、教育程度、吸煙、飲酒及肝病情況作為變量，牙周炎的患病與否作為因變量進入回歸方程進行多因素非條件逐步LOGISTIC回歸分析，探討肝病情況與牙周炎的相關(guān)性。結(jié)果所調(diào)查對象的一般情況及牙周炎患病率，共觀察患者健康家屬100人作為對照，肝病患者121人。肝病患者整體中重度牙周炎患病率為78％，健康人群中重度牙周炎患病率為46％，肝病患者與對健康人群牙周炎患病率差別有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，P＜001。肝病患者中吸煙組中重度牙周炎患病率為89％，不吸煙組中重度牙周炎患病率為75％健康人群中吸煙組中重度牙周炎患病率為72％，不吸煙組中重度牙周炎患病率為44％肝病患者中飲酒組中重度牙周炎患病率為89％，不飲酒組中中重度牙周炎患病率為75％，健康人群吸煙和不吸煙者中重度牙周炎患病率差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，P＜001，肝炎組及健康人群不吸煙者牙周炎患病率差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜005。肝病患者中飲酒組中重度牙周炎患病率為89％，不飲酒組中中重度牙周炎患病率為75％健康人群中飲酒組重度牙周炎患病率為74％，不飲酒組中中重度牙周炎患病率為52％，健康人群飲酒與不飲酒者的中重度牙周炎患病率差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜005，肝病患者與健康人群飲酒者中重度牙周炎患病率有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜005，肝病患者與健康人群不飲酒者中重度牙周炎患病率也有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜005。肝病患者中教育程度高中以上組中重度牙周炎患病率為63％，教育程度高中組中重度牙周炎沿患病率為62％，教育程度高中以下組中重度牙周炎患病率為92％健康人群中教育程度高中以上組中重度牙周炎患病率為0，教育程度高中組中重度牙周炎沿患病率為56％，教育程度高中以下組中重度牙周炎患病率為65％，肝病患者及健康人群中高中及以上學(xué)歷與高中以下學(xué)歷中重度牙周炎患病率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜001，肝病患者高中以下學(xué)歷與健康人群高中以下學(xué)歷組中重度牙周炎患病率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜001。對于性別這一影響因素，男性中重度牙周炎患病率為66％，女性中重度牙周炎患病率為47％肝病患者中重度牙周炎患病率為78％，其中男性中重度牙周炎患病率為77％，女性中重度牙周炎患病率為80％，只有女性在肝炎組及健康人群之間的中重度牙周炎患病率差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義P＜001。獨立樣本T檢驗結(jié)果顯示肝病患者牙周附著喪失程度大于健康人群，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜001）。將患病組與健康人群按10歲為一年齡組分組進行獨立樣本T檢驗的結(jié)果顯示3039歲、4049歲、6069歲及70歲以上年齡組肝病患者牙周附著喪失程度大于健康人群且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005），而5059歲年齡組差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。在多因素回歸分析中，采用逐步后退法，健康人群中年齡及飲酒進入了最后的回歸方程，說明年齡及飲酒是牙周炎的風險因素。在肝硬化組，CHILDPUGH評分進入了最終的回歸方程，說明飲酒及肝臟功能儲備是肝硬化病人患中重度牙周炎的危險因素。結(jié)論肝病人群牙周附著喪失程度明顯高于普通人群。肝硬化病人的牙周附著喪失大于非肝硬化肝炎患者。將調(diào)查對象按年10歲年齡分組后，只有5059歲年齡段肝病與健康人群間牙周附著喪失無統(tǒng)計學(xué)意義。肝硬化組牙周附著喪失程度與CHILDPUGH評分顯著相關(guān)（P＜001）。病毒性肝炎為牙周炎的發(fā)病的危險因素。結(jié)論1、病毒性肝炎患者的牙周健康狀況明顯較差，其中重度牙周炎患病率及牙周附著喪失水平均顯著高于健康人群。2、吸煙及飲酒不利于牙周健康，正常人群中吸煙者和飲酒者的中重度牙周炎患病率高于不吸煙者和不飲酒者。3、病毒性肝炎肝硬化患者的CHILDPUGH評分與其牙周附著喪失程度成線性相關(guān)，牙周附著喪失隨著肝病患者CHILDPUGH評分的增加而加劇。高CHILDPUGH分值是在肝硬化患者患牙周炎的危險因素。

簡介：分類號S墨22UDC碩士學(xué)位論文山羊痘病毒基因缺失重組毒株的構(gòu)建與生物學(xué)特性鑒定李春艷學(xué)科專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)堂指導(dǎo)教師鍪塞強論文答辯日期2QL530學(xué)位授予日期2Q魚12窆廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明和學(xué)位論文使用授權(quán)說明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的，研究工作所取得的成果和相關(guān)知識產(chǎn)權(quán)屬廣西大學(xué)所有。除已注明部分外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表過的研究成果，也不包含本人為獲得其它學(xué)位而使用過的內(nèi)容。對本文的研究工作提供過重要幫助的個人和集體，均已在論文中明確說明并致謝。論文作者簽名套痞彳渺A礦，，年月／A日學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人完全了解廣西大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即本人保證不以其它單位為第一署名單位發(fā)表或使用本論文的研究內(nèi)容；按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存學(xué)位論文的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝?、縮印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；學(xué)校可以公布論文的部分或全部內(nèi)容。請選擇發(fā)布時間函口時發(fā)布口解密后發(fā)布保密論文需注明，并在解密后遵守此規(guī)定～套忿掃一名弗專騖州

簡介：分類號￡絲二UDC碩士學(xué)位論文密級I類新城疫病毒NP和P基因分子流行病學(xué)研究及NDV08004株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立陳云霞論文答辯日期2Q生墨旦墨Q旦學(xué)位授予日期答辯委員會主席星廷苤教援I類新城疫病毒NP和P基因分子流行病學(xué)研究及NDV08004株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立摘要本研究通過對2008一2010年分離到的60株I類新城疫病毒分離株的NP和P蛋白基因進行分子流行病學(xué)分析，基本掌握了我國目前I類新城疫病毒的分子特征。通過構(gòu)建I類新城疫病毒代表株NDV08004全長感染性EDNA克隆，并成功拯救出重組病毒，為I類新城疫病毒的致病機理和相關(guān)蛋白的功能研究奠定了基礎(chǔ)。1I類新城疫病毒NP基因分子特征的研究本研究對20082010年分離到的60株I類新城疫病毒的NP基因進行了分子特征和遺傳進化關(guān)系分析，結(jié)果表明所有I類新城疫病毒分離株完整NP基因的長度均為1746BP，編碼區(qū)長度為1470NT，可編碼489個氨基酸。通過多序列比對，發(fā)現(xiàn)I類NDV在NP蛋白基因上的特征性位點，如D460E，和468T。同源性分析結(jié)果顯示，I類與II類NDV的NP蛋白氨基酸同源性在880％一，927％之間，核苷酸同源性在752％795％之間。遺傳進化樹分析表明60株I類NDV分離株可分為兩個不同的亞型，兩個亞型之間NP蛋白氨基酸差異在27％～41％之間，核苷酸差異在46％，79％之間。2I類新城疫病毒P基因分子特征的研究通過對60株I類NDV分離株P(guān)基因的擴增和分子遺傳進化關(guān)系分析，結(jié)果表明所有的分離株P(guān)基因長度均為1463BP，編碼區(qū)長度為1200NT，可編碼399個氨基酸。通過多序列比對，發(fā)現(xiàn)I類NDV在P蛋白基因上的特

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簡介：究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容，也不包含為獲得中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明的法律責任由本人承擔。’學(xué)位論文作者簽名曼蔭和IJ年月學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意如下各項內(nèi)容按照中監(jiān)所要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；中監(jiān)所有權(quán)保存學(xué)位論文的印刷本和電子版，并采用影印、縮印、掃描、數(shù)字化或其它手段保存論文；中監(jiān)所有權(quán)提供目錄檢索以及提供本學(xué)位論文全文或者部分的閱覽服務(wù)；中監(jiān)所有權(quán)按有關(guān)規(guī)定向國家有關(guān)部門或者機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版；在不以贏利為目的的前提下，中監(jiān)所可以適當復(fù)制論文的部分或全部內(nèi)容用于學(xué)術(shù)活動。保密的學(xué)位論文在年解密后適用本授權(quán)書‘指導(dǎo)刻程各A釤學(xué)位論文作者簽名歪J銪

簡介：乙型病毒性肝炎世界范圍內(nèi)流行，是已知各型肝炎中危害最嚴重的一種。目前全世界范圍內(nèi)約有35億慢性乙肝感染者，其中15％25％將發(fā)展并最終死于相關(guān)的肝損傷、肝硬化和肝細胞癌，嚴重威脅人們的健康。本課題研究目的即在于嘗試采用高效數(shù)理統(tǒng)計方法，提高檢測數(shù)據(jù)的利用率。同時利用飛行時間質(zhì)譜技術(shù)積極探索尋找新的生物標志物，為臨床診斷和治療乙肝及相關(guān)疾病提供幫助。第一部分決策樹模型在乙型病毒性肝炎及相關(guān)疾病診斷中的應(yīng)用目的用決策樹模型對臨床常用檢測數(shù)據(jù)進行二次發(fā)掘利用，是一種有效的降維數(shù)理統(tǒng)計方法。由于乙型肝炎及相關(guān)疾病如肝硬化、肝癌等病情復(fù)雜多變、病程長，因此在臨床上將會產(chǎn)生大量、多維的檢測數(shù)據(jù)。盡管在這些數(shù)據(jù)中蘊含了豐富的疾病信息，但臨床醫(yī)生往往孤立地看待每一個檢測結(jié)果，很難把它們綜合利用及分析，更談不上對這些數(shù)據(jù)進行深加工利用，其結(jié)果就是疾病信息的丟失和浪費，并最終導(dǎo)致臨床診斷的不準確、治療的不及時和沒有針對性、直至延誤病情。本部分將以慢性乙肝與肝硬化及肝癌鑒別比較、慢性乙肝輕、中、重不同型別的鑒別比較為例，用決策樹模型的方法將臨床常用數(shù)據(jù)進行再挖掘，為臨床決策提供參考。方法目前構(gòu)建決策樹模型主要有四種算法，即CRT（分類與回歸樹）、QUEST（快速無偏高效統(tǒng)計樹）、CHAID（卡方自動交互探測）和EXHAUSTIVECHAID（窮舉CHILD）。前兩種算法為一類，構(gòu)建的樹模型稱二叉樹；后兩種算法為一類，構(gòu)建的樹模型稱多叉樹。研究中，在兩類算法中各選擇一種算法作為代表，即CHAID和CRT，對慢性乙肝與肝硬化及肝癌，慢性乙肝輕、中、重不同型別分類構(gòu)建決策樹模型并進行風險和準確度評估。同時以慢性乙肝分型為例用主成分分析方法加以驗證，考察模型的實用性。結(jié)果利用CHAID和CRT兩種算法用于慢性乙肝輕型和中重型分類診斷時，所構(gòu)建的兩個模型的正確分類率分別達到775％和784％，模型的擬合效果良好，風險評估結(jié)果均為0353，在可接受范圍內(nèi)。ROC（受試者工作特征）曲線下面積分別為0787（CI95％06950879）和0802（CI95％07140890），準確度評估良好；而利用CHAID和CRT兩種算法用于慢性乙型肝炎與肝硬化及肝癌分類診斷時，所構(gòu)建的兩個模型的正確分類率分別達到714％和742％，模型的擬合效果良好，風險評估結(jié)果分別為0451和0352，雖在可接受范圍內(nèi)，但CHAID模型風險稍高。ROC曲線下面積分別為0785（CI95％06920878）和0807（CI95％07200894），準確度評估良好。結(jié)論決策樹模型在對臨床常見數(shù)據(jù)的挖掘再利用方面具有一定價值，可以大大提高診斷的準確度，為臨床醫(yī)生決策提供幫助。而且此結(jié)論已經(jīng)得到主成分分析的驗證，兩者有極好的吻合，較為可信。在進行慢性乙肝中重型診斷時，應(yīng)優(yōu)先考慮ALT、AST和乙肝病毒載量等指標；而試圖從慢性乙肝患者中篩檢肝硬化或肝癌時，年齡、職業(yè)和膽紅素指標更為重要。肝纖四項（HA、LN、PCⅢ和ⅣC）未進入決策樹模型，表明該四項指標對判定肝纖維化程度價值不大。第二部分基于磁珠樣品制備和基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜實驗條件的優(yōu)化目的利用基質(zhì)輔助激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜（MALDITOFMS）技術(shù)檢測樣本血清蛋白或多肽，考察實驗的重復(fù)性及血清不同的凍融次數(shù)和基質(zhì)與樣品搭配比例對結(jié)果的影響。以便摸索一套有效的血清樣品收集、處理、存儲和實驗方法。同時比較分析兩種磁珠的優(yōu)劣，為后續(xù)大規(guī)模檢測研究提供科學(xué)的選擇依據(jù)。方法首先采用IMACCU磁珠進行樣本蛋白分離提純，經(jīng)MALDITOFMS檢測后，選擇不同分子量范圍內(nèi)9個蛋白重復(fù)測定，比較組間和組內(nèi)變異系數(shù)以考察重復(fù)性及實驗室條件的影響；比較不同條件下蛋白質(zhì)譜圖來判斷凍融次數(shù)和基質(zhì)與樣品搭配比例對實驗結(jié)果的影響。然后比較WCX和IMACCU兩種磁珠的平均出峰量、平均峰面積和平均峰強度等參數(shù)，擇優(yōu)為后續(xù)研究做準備。研究過程中儀器操作、數(shù)據(jù)分析和圖像采集分別用FLEXCONTROLMS30、CLINPROTOOLSTM21和FLEXANALYSIS30軟件。結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)，樣品與基質(zhì)的適宜比例為15（UL），并且實驗室溫度控制在20℃～25℃，濕度在10％～30％時點樣結(jié)晶效果最佳。樣品的凍融最好不要超過3次，否則對質(zhì)譜出峰有影響。凍融次數(shù)越多，對小分子量蛋白或多肽的影響比大分子量蛋白或多肽影響大。反映實驗結(jié)果重復(fù)性的變異系數(shù)為126％～3079％，在可接受范圍內(nèi)。相同樣本利用WCX磁珠處理后的平均出峰量和平均峰面積均明顯優(yōu)于IMACCU磁珠。結(jié)論MALDIFOFMS作為一種高靈敏度的研究平臺，嚴格操作程序可以減少變異，提高結(jié)果的重復(fù)性和可信性。WCX磁珠的蛋白分離效果優(yōu)于IMACCU磁珠，選擇用于后續(xù)大規(guī)模檢測。第三部分乙型肝炎及相關(guān)疾病血清蛋白質(zhì)組的比較分析目的檢測急性乙肝（AHB）、慢性乙肝（CHB）、肝硬化（LC）和原發(fā)性肝細胞癌（HCC）患者血清蛋白質(zhì)譜圖，比較組間差異，尋找差異蛋白并評估其分類價值，為臨床診斷應(yīng)用提供參考。方法首先按照實驗設(shè)計要求，收集14例AHB、76例CHB、41例LC和14例HCC患者的血清樣本，用WCX磁珠進行樣本前處理，然后用MALDITOFMS檢測不同組患者蛋白質(zhì)譜圖并加以對比分析。研究過程中儀器操作、數(shù)據(jù)分析和圖像采集分別用FLEXCONTROLMS30、CLINPROTOOLSTM21和FLEXANALYSIS30軟件。對所發(fā)現(xiàn)的差異蛋白分別計算分類的靈敏度、特異度和驗證正確率，或差異蛋白組合后診斷的效果，以指導(dǎo)臨床應(yīng)用。此外追蹤觀察4例AHB患者血清蛋白質(zhì)譜圖變化，尋找判斷急性乙肝轉(zhuǎn)慢的生物標志物。結(jié)果AHB和CHB患者血清蛋白質(zhì)組比較，在所發(fā)現(xiàn)的49個差異蛋白中，僅4154DA和4210DA分類效果相對較優(yōu)，聯(lián)合作為生物標志物應(yīng)用于診斷AHB的靈敏度、特異度、驗證正確率分別達到100％（1414）、8421％（6476）和8667％（7890）。對4例AHB患者追蹤觀察發(fā)現(xiàn)，血清2952DA、4210DA、5337DA和5904DA蛋白表達量因不同轉(zhuǎn)歸而表現(xiàn)迥異。CHB輕、中、重型血清蛋白質(zhì)組研究發(fā)現(xiàn)，輕型和中型無差異而合并為一組，然后與CHB重型比較。差異蛋白中1866DA蛋白表現(xiàn)最優(yōu)，單獨用來區(qū)分慢性重型乙肝的靈敏度和特異度達到100％和8889％，驗證正確率為9342％，是一個良好的生物標志物，值得進一步研究。CHB患者和HCC患者血清蛋白質(zhì)組的對比，11243DA和4210DA兩個蛋白分類效果相對較好，聯(lián)合應(yīng)用診斷HCC的靈敏度、特異度和驗證正確率分別達到9286％（1314）、7763％（5976）和80％（7290）。HCC和LC患者血清蛋白質(zhì)組差異不大，僅一個差異蛋白。結(jié)論AHB和CHB患者血清蛋白質(zhì)組存在明顯差異，其中4154DA和4210DA兩個蛋白組合使用可以有效鑒別AHB，應(yīng)當成為今后分類診斷的候選蛋白。AHB患者因不同轉(zhuǎn)歸而表現(xiàn)迥異的蛋白2952DA、4210DA、5337DA和5904DA是今后進一步研究的重點。CHB輕、中、重型血清蛋白質(zhì)組比較發(fā)現(xiàn)，1866DA蛋白表現(xiàn)最優(yōu)，完全可以作為獨立的生物標志物用來鑒別診斷CHB重型。血清11243DA和4210DA蛋白組合應(yīng)用從CHB患者中間篩選HCC具有實際價值，而從LC患者中間篩選HCC患者意義不大。在所發(fā)現(xiàn)的差異蛋白中，1866DA和4210DA蛋白最為重要，需要下一步鑒定。第四部分差異蛋白質(zhì)的鑒定目的對所發(fā)現(xiàn)的1866DA和4210DA蛋白進行鑒定，并初步推測其在乙肝病毒感染過程中的作用機制。方法采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMSMS）進行氨基酸序列測定，然后進行數(shù)據(jù)庫檢索比對從而定性。其中4210DA蛋白鑒定使用數(shù)據(jù)分析軟件BIOWKSBROWSER331SP1進行SEQUESTTM檢索，檢索數(shù)據(jù)庫為IPIHUMAN（345）；1866DA蛋白使用數(shù)據(jù)分析軟件DATAANALYSIS34（BRUKERDALTONICS）進行MSMS檢索，檢索數(shù)據(jù)庫為MOTDATABASE。結(jié)果采用LCMSMS方法檢測1866DA和4210DA蛋白，并通過網(wǎng)絡(luò)查詢和同源性比較發(fā)現(xiàn)，1866DA蛋白被鑒定為DRC3F，為補體C3F脫精氨酸而成，而補體C3是補體系統(tǒng)中的主要成分，其血清含量可以反映人體的免疫狀況；4210DA蛋白被鑒定為“GSPT2，真核肽鏈釋放因子GTP結(jié)合亞單位（ERF）”，即ERF3B裂解后的一部分36肽。GSPT2編碼ERF3B，具有參與蛋白合成中止的功能。結(jié)論1866DA蛋白鑒定為DRC3F，是補體C3的衍生物。4210DA蛋白鑒定為ERF3B裂解后的一部分36肽。由于補體系統(tǒng)參與人體免疫調(diào)節(jié)、ERF3B參與調(diào)控蛋白合成。因此，C3F和或DRC3F以及ERF3B的裂解物的出現(xiàn)可能反映了肝臟感染乙肝病毒后炎癥反應(yīng)的某種機制，其表達量的變化很可能與肝臟的炎癥改變程度有關(guān)，應(yīng)當是今后進一步研究的重點。

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簡介：分類號R72密級公開UDC610學(xué)校代碼10555碩士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位兒童呼吸道合胞病毒分子流行病學(xué)兒童呼吸道合胞病毒分子流行病學(xué)及其致炎癥反應(yīng)機制研究及其致炎癥反應(yīng)機制研究研究生姓名范如艷指導(dǎo)教師、職稱范楚平主任醫(yī)師合作導(dǎo)師、職稱瞿小旺研究員專業(yè)學(xué)位類別（領(lǐng)域）臨床醫(yī)學(xué)（兒科學(xué)）研究方向兒童呼吸所在學(xué)院附屬郴州市第一人民醫(yī)院二○一六年一六年五月論文題目論文題目兒童呼吸道合胞病毒分子流行病學(xué)及其致炎癥反應(yīng)機制研究論文作者簽名論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名指導(dǎo)教師簽名論文評閱人2鄒敏書，碩導(dǎo)，副主任醫(yī)師，廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院評閱人2吳學(xué)東，碩導(dǎo)，副主任醫(yī)師，南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院答辯委員會主席薄濤，教授，碩導(dǎo)，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院委員1何小解，副研究員，碩導(dǎo)，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院委員2彭華保，主任醫(yī)師，碩導(dǎo)，南華大學(xué)附屬郴州醫(yī)院委員3李海鵬，主任醫(yī)師，碩導(dǎo)，南華大學(xué)附屬郴州醫(yī)院委員4歐文勝，主任醫(yī)師，碩導(dǎo)，南華大學(xué)附屬郴州醫(yī)院答辯日期2016年5月14日

簡介：背景和目的諾如病毒NOVIRUSNOV最早是從1968年在美國諾瓦克市暴發(fā)的一次急性腹瀉的患者糞便中分離的病原并以發(fā)現(xiàn)地將其命名為諾瓦克病毒NWALKVIRUSNLVS。由于該病毒無法進行細胞培養(yǎng)不能建立動物模型亦沒有敏感的診斷技術(shù)所以在較長時間里約20年只能用電鏡進行小規(guī)模的糞便標本檢測。最初這類病毒以電鏡下的形態(tài)和發(fā)現(xiàn)地點命名和分類隨著病毒種類的增多該種命名和分類的方式很容易引起混亂的缺點日趨明顯。目前病毒的分類和命名主要根據(jù)病毒形態(tài)學(xué)、抗原特性、宿主范圍和所致疾病的臨床癥狀特別是病毒基因組序列和結(jié)構(gòu)以及遺傳學(xué)進化分析的結(jié)果進行。經(jīng)杯狀病毒組研究組CALICIVIRUSSTUDYGROUPCSG1998年建議國際病毒分類委員會THEINTERNATIONALCOMMITTEEONTAXONOMYOFVIRUSESICTV批準將杯狀病毒分為四個屬分別是①LAGOVIRUS以兔出血病病毒RABBITHEMRHAGICDISEASEVIRUS為代表；②NOV；③SAVSAPOVIRUSSAV；④VESIVIRUS以豬水泡疹病毒SWINEVESICULAREXANTHEMAVIRUS為代表。其中LAGOVIRUS和VESIVIRUS感染動物；而NOV和SAV主要感染人二者又合稱為人類杯狀病毒HUMANCALICIVIRUSHUCV。20世紀90年代初NOV病毒的成功克隆和測序分析大大推動了杯狀病毒的研究并且分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)的飛速發(fā)展進一步為NOV的深入研究提供了便利條件對NOV引起急性胃腸炎ACUTGASTROENTERITISAGE的危害和意義逐漸得到了充分認識。NOV作為引起人類AGE爆發(fā)和散發(fā)的重要病原體之一具有典型季節(jié)相關(guān)性在世界各地都有廣泛傳播能夠感染所有的年齡組人群極易引起爆發(fā)成為難以控制的胃腸炎疾病極大影響著人群公共健康。NOV的共同特征是直徑約為26～35NM無包膜表面粗糙球形呈20面體對稱；可從AGE病人的糞便中分離得到但不能在細胞或組織中培養(yǎng)也沒有合適的動物模型；基因組為無包裹的單股正鏈RNA病毒RNA鏈全長約77KB包括3個開放閱讀框OPENREADINGFRAMEFSF1基因全長5100BP位于基因組中55104NT之間編碼一種具有保守序列的多聚酶非結(jié)構(gòu)蛋白此結(jié)構(gòu)蛋白可裂解為P48、NTPASE、P22、VPG、3CLIKEPROTEIN和POLYMERASE6個小蛋白；F2基因全長1632BP位于基因組中50856707NT之間編碼一種分子量約為56KD的衣殼蛋白VP1；F3基因全長807BP位于基因組中6707～7513NT之間編碼一種約為225KD的微小結(jié)構(gòu)蛋白VP2。NOV具有高度的基因多樣性被分為5個遺傳組其中GⅠ、GⅡ、GⅣ僅感染人類而GⅢ、GⅤ分別感染牛和鼠。GⅠ和GⅡ又至少可以進一步劃分為8和17個基因型GⅢ分為兩個基因型另外檢測出新的基因型被定義為GⅡB型。NOV之所以具有高度的遺傳多樣性主要是因為RNA依賴性RNA聚合酶RNADEPENDENTRNAPOLYMERASERDRP缺乏校正功能而引起核苷酸位點突變以及不同病毒株間基因重組。SAV屬于HUCV的另一種屬首次發(fā)現(xiàn)于1976年也是引起人類AGE爆發(fā)和散發(fā)的重要病原體在世界各地都有廣泛傳播能夠感染所有的年齡組人群。由于SAV引起的感染不如NOV嚴重因此對SAV的重視程度和研究深度也均不如NOV。SAV是一種未被包裹的單股正鏈RNA病毒其基因組RNA鏈全長約73～75KB包括3個開放閱讀框FS。F1編碼結(jié)構(gòu)蛋白衣殼蛋白CAPSIDPROTEIN和非結(jié)構(gòu)蛋白RDRP；F2編碼一種基本小蛋白；F3與F1交迭只存在于GⅠ、GⅣ、GⅤ型中編碼一種未知功能的蛋白。SAV根據(jù)RNA聚合酶區(qū)和衣殼蛋白區(qū)的基因多樣性可以進一步分為5個遺傳組其中GⅠ型、GⅡ型、GⅣ型和GⅤ型主要感染人GⅢ主要感染豬。病毒性胃腸炎是世界各國高發(fā)疾病之一尤其在發(fā)展中國家因胃腸炎疾病死亡的兒童人數(shù)高于發(fā)達國家。隨著研究的深入HUCV尤其是NOV的感染在急性非細菌性腹瀉中的地位越來越重要僅次于RV感染。我國NOV感染十分普遍優(yōu)勢毒株分布雖各地有所差異但主要以GⅡ4型為主對不同地區(qū)NOV感染型別是否有變異、優(yōu)勢株是否發(fā)生變化的鑒定及分析可以豐富我國NOV的研究資料對于進一步了解NOV進化具有重要意義。雖然國內(nèi)外對SAV的研究不是很深入但是近年來的研究數(shù)據(jù)表明由SAV引起的疾病暴發(fā)有增加趨勢。為此我們對2009年深圳地區(qū)腹瀉患者HUCV的流行情況及型別進行了研究以了解當?shù)豊OV和SAV基因型別分布特征探討流行的優(yōu)勢毒株；分析深圳地區(qū)HUCV的流行特征豐富南方腹瀉病毒感染的相關(guān)資料為我國腹瀉感染提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)和流行病學(xué)背景資料。方法1以深圳龍崗中心醫(yī)院、北大深圳醫(yī)院、龍華人民醫(yī)院和西鄉(xiāng)人民醫(yī)院等醫(yī)院為監(jiān)測哨點醫(yī)院按監(jiān)測方案要求采集病毒性腹瀉病例糞便標本。收集2009年病毒性腹瀉患兒糞便標本每份標本取樣5～10G或5～10ML。病毒性腹瀉病例定義為大便次數(shù)≥3次D呈水樣、蛋花樣或稀糊樣便常規(guī)鏡檢WBC2對所有標本進行核酸提取用三對分型引物GISKFGISKR、COG2FGⅡSKR和SLV5317SLV5749一步法三重RTPCR擴增NOV和SAV的衣殼區(qū)CAPSIDPCR產(chǎn)物純化回收、測序應(yīng)用BLAST將測序結(jié)果在GENBANK上尋找與各株同源序列應(yīng)用CLUSTALW進行多序列對比分析和MEGA40構(gòu)建遺傳進化樹進行NOV和SAV基因型別分析判斷NOV和SAV流行優(yōu)勢株。3運用統(tǒng)計軟件SPSS170對收集的患者資料進行統(tǒng)計分析卡方檢驗分析深圳地區(qū)杯狀病毒感染的流行概況。結(jié)果1深圳地區(qū)HUCV感染全年均可發(fā)病NOV感染主要發(fā)生在510月份SAV感染主要發(fā)生在春秋冬季節(jié)；NOV和SAV感染在不同月份之間存在差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。NOV和SAV感染檢出率在不同性別和年齡段之間沒有顯著性差異。2本研究對收集的852份腹瀉患者糞便樣本進行檢測共檢出67株NOVGⅡ型檢出率為786％；3株NOVGⅠ型檢出率為O35％；對隨機抽取的32株NOVGⅡ型和3株GⅠ型樣本分別進行遺傳進化分析其中22株屬于NOVGⅡ4型6株屬于NOVGⅡ3型2株屬于NOVGⅡ12型GⅡ2型和GⅡ14型各有一例；3株NOVGⅠ型分屬于三個型別GⅠ1、GⅠ3和GⅠ4型。316株測序SAV樣本中8株屬于G1型3株為GⅠ15株為GⅠ27株屬于GⅣ型1株屬于GⅡ1型。4JB030920397和JB030920633兩株不能歸為現(xiàn)存的NOVGⅡ3亞型A～C為新發(fā)現(xiàn)的GⅡ3亞型；SAVGⅣ型為國內(nèi)首次報道的SAV基因型別。結(jié)論深圳地區(qū)HUCV感染全年均可發(fā)病NOV感染主要發(fā)生在夏季SAV感染主要發(fā)生在春秋季節(jié)；NOV和SAV感染除了在不同月份之間有統(tǒng)計學(xué)意義在不同性別和年齡段之間沒有顯著性差異無統(tǒng)計學(xué)意義；深圳地區(qū)存在NOVGI和GⅡ型感染HUCV流行優(yōu)勢毒株為NOVGⅡ4型本研究發(fā)現(xiàn)了兩株新的NOVGⅡ3亞型表明NOV在深圳地區(qū)感染具有有高度遺傳多樣性是重要的致瀉病原體；SAV流行優(yōu)勢毒株為SAVGⅠ型；發(fā)現(xiàn)的SAVGⅣ型為我國首次報道表明深圳地區(qū)存在SAV感染具有基因多洋性。

簡介：分類號墨墨墨壘2密級洳≥J～涪博士學(xué)位論文⑧單位代碼幽學(xué)號LLQL2Q32提交日期2Q蘭生壘目壟蘭旦MOLECULARBIOLOGYOFD批P25OF彳掰而哦聊廳口C口西紗掃，萬記口NUCLEOPOLYHEDROVIRUSIVAUTHOR’SSIGNATUREN●■●JSUPERVLS0R7SSLGNATUREEXTEMALREVIEWERSEX鋤ININGCONML№ECHAI印ERSONGH曼塾GI魚旦GQQ塾G里墅Q魚墨墨Q￡SQQ魚HQ塑墮墜IY曼囟蟻EXAMIILINGCO舢ILITTEEMEMBERS基I墜GM曼塾GL旦里Q魚墨墨Q蘭H自I壘壘G墮塾＆曼墨鰱YY塑G塑叢I壘Q￡￡Q墼墨Q圣蜮I墊G墮塾IY曼堡I鯉至墜I壘塾GH墜里￡Q魚墨墨Q圣魚自I壘墜G也IY星墨量YXI墊魚墜G迎￡煦魚墨墨Q丕H自I塹G坐撾?yún)材珨?shù)DATEOFORALDEFENCE6．7．2013

簡介：目的研究吉林，蘭州地區(qū)嬰幼兒星狀病毒的感染狀況、臨床表現(xiàn)以及分子流行病學(xué)特征，完善我國病毒性腹瀉的流行病學(xué)基礎(chǔ)資料，為我國病毒性腹瀉疾病的預(yù)防控制提供一定的科學(xué)依據(jù)。方法收集2007年10月至2008年10月吉林地區(qū)＜5歲腹瀉患兒標本417份以及2009年至2010年10月蘭州地區(qū)＜5歲腹瀉患兒標本291份，用ONESTEPPCR方法檢測星狀病毒，用星狀病毒基因組F1B區(qū)部分核苷酸片段初篩，再用F2區(qū)部分核苷酸序列分型。結(jié)果708份腹瀉標本中共檢出HASTV陽性17例，星狀病毒總陽性率為24％，其中吉林地區(qū)和蘭州地區(qū)分別檢出7例和10例星狀病毒陽性標本，12份星狀病毒F2區(qū)陽性的樣本均為HASTV1型，除一株屬于LINEAGE1A群，其他的均屬于LINEAGE1B群。HASTV主要感染2歲以下嬰幼兒，在吉林春季為主要流行季節(jié)，而在蘭州春季和秋季為主要流行季節(jié)。星狀病毒感染能引起腹瀉、嘔吐、發(fā)熱等表現(xiàn)。HASTV單一感染病例和EAD感染病例在主要的臨床表現(xiàn)方面無差異。同樣EAD感染和NONADF感染的臨床表現(xiàn)也無差別。HASTV混合感染組的嘔吐病程和強度高于單一感染組，多重線性回歸顯示年齡組、體溫和東南地區(qū)為影響腹瀉病程的因素，且東南地區(qū)的病例腹瀉期最長而發(fā)病年份、RV檢測結(jié)果和西部地區(qū)為影響腹瀉強度的因素，HASTV合并RV感染時腹瀉強度加重。結(jié)論星狀病毒是引起嬰幼兒病毒性腹瀉的主要病原，HASTV1型是主要的流行株，2歲以下為感染發(fā)病的高危人群，不同地區(qū)星狀病毒主要流行季節(jié)是不同的。

簡介：目的了解深圳市龍崗區(qū)成蚊攜帶蟲媒病毒的情況探討相關(guān)病毒株的分子流行病學(xué)特征為蚊媒傳染病的預(yù)防與控制提供依據(jù)。方法20092011年在龍崗區(qū)的龍城、南灣、坂田等10個街道及21個大運場館室內(nèi)外環(huán)境設(shè)立監(jiān)測點按照全國病媒生物監(jiān)測方案監(jiān)測方法采集成蚊標本。采用SYBRGREENⅠ實時熒光RTPCR進行乙腦病毒JAPANESEENCEPHALITISVIRUSJEV、登革病毒DENGUEVIRUSDV和NAMDINH病毒NAMDINHVIRUSNDIV等蟲媒病毒的檢測分析成蚊病毒感染情況用C636與BHK21細胞進行相關(guān)病毒的分離工作以TAQMANMGB實時熒光RTPCR與基因擴增技術(shù)進行病毒鑒定。測序基因擴增片段用CLUSTALX、MEGA4、DNASTAR等軟件對測序結(jié)果進行同源性分析與構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。結(jié)果共采集成蚊25556只隸屬3屬7種分別是按蚊屬的中華按蚊、微小按蚊、嗜人按蚊庫蚊屬的三帶喙庫蚊和致倦庫蚊伊蚊屬的東鄉(xiāng)伊蚊和白紋伊蚊。致倦庫蚊23962只為優(yōu)勢蚊種占938％東鄉(xiāng)伊蚊637只占25白紋伊蚊有408只占16三帶喙庫蚊385只占15其他種類占06。SYBRGREENⅡ?qū)崟r熒光RTPCR檢測結(jié)果顯示有2批致倦庫蚊和1批三帶喙庫蚊標本檢出乙腦病毒核酸陽性白紋伊蚊和東鄉(xiāng)伊蚊標本各1批檢出登革病毒核酸陽性4批致倦庫蚊標本檢出NAMDINH病毒核酸陽性。4批NDIV核酸陽性標本能引起C636細胞出現(xiàn)典型的細胞病變CPE但不引起B(yǎng)HK21細胞的病變。SYBRGREENⅠ實時熒光PCR檢測JEV和DV核酸陽性的標本接種C636細胞和BHK21細胞后未能分離到相關(guān)病毒。用TAQMANMGB實時熒光RTPCR檢測NDIV分離物中病毒核酸隨時間推延的增殖情況檢測結(jié)果顯示0天、3天、6天、9天分離物的CT值呈梯度減少表明隨分離時間的增加培養(yǎng)液中病毒核酸含量同步遞增。對4株深圳NDIV進行RDRP基因和部分ZMHEL1基因的擴增擴增產(chǎn)物在2瓊脂糖電泳均出現(xiàn)目的條帶。4株分離株RDRP基因核苷酸序列間同源性在9981000之間氨基酸序列同源性為9971000深圳分離株的RDRP基因核苷酸和氨基酸序列與越南代表株NDIV02VN178的同源性均達99以上系統(tǒng)進化樹分析深圳NDIV分離株與越南NDIV代表株的親緣性最近同屬一個進化分支。結(jié)論本研究首次在深圳市龍崗區(qū)開展全面的蟲媒病毒傳播媒介的監(jiān)測證實了致倦庫蚊為當?shù)氐膬?yōu)勢蚊種。在采集的成蚊標本中檢測到JEV和DV核酸提示病毒存在低水平的自然循環(huán)當?shù)赜锌赡苁且夷X、登革熱的自然疫源地。繼2011年全球首次在越南發(fā)現(xiàn)蚊傳套式病毒NDIV后本研究發(fā)現(xiàn)深圳市致倦庫蚊中攜帶該病毒這是中國國內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)NDIV進化樹分析顯示深圳NDIV分離株與越南分離株在遺傳進化學(xué)上存在聯(lián)系。