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    • 簡介:重組是許多進(jìn)化基本機(jī)制的其中一個,并且在進(jìn)化中起著重要地位。研究重組還使研究人員能進(jìn)一步了解進(jìn)化的復(fù)雜性??紤]到重組在進(jìn)化生物學(xué)中的重要性,許多用以檢測重組的生物信息學(xué)工具如RDP3PACKAGE,SIMPLOT已經(jīng)被開發(fā)出來,并且研究人員可以用這些工具了解系統(tǒng)發(fā)育分析。在過去兩年中研究了乙型肝炎病毒的基因型分類和重組。乙型肝炎病毒HBV的病原體廣泛分布,在世界上有超過350萬人受到感染。在南亞和東亞,包括中國地區(qū)尤其盛行。從肝炎病毒數(shù)據(jù)庫獲得了829條乙型肝炎病毒全基因組序列的數(shù)據(jù)集。在第2章,根據(jù)HBV的遺傳異質(zhì)性,利用生物信息學(xué)工具對HBV基因型進(jìn)行分類。首先,基因型的信息利用文本挖掘從NCBI的注釋和文獻(xiàn)中獲得。另一些是用BLASTN方法獲得,原理是相同的基因型具有序列相似性。最后,用HBV基因組全長序列構(gòu)建了幾種基因型的系統(tǒng)發(fā)育樹驗證基因型分類。在工作中,一共有791條人的乙肝病毒基因組加上38條靈長類動物病毒基因組,一共分為AH,8種基因型。第3章中采用RDP軟件包中的5個不同的重組檢測算法RDP,GENECONV,MAXCHI,CHIMAERA和SISCAN,嘗試在829條乙型肝炎病毒基因組序列中發(fā)現(xiàn)潛在的重組事件。為了獲得更可靠的檢測結(jié)果,編寫了一個PERL腳本用以合并5種方法共同支持的結(jié)果。合并5種算法的結(jié)果,預(yù)計有9個重組事件包括61條重組子序列。其中有9個重組事件中的6個事件,RDP3軟件得到了它們可能的親代序列;使用SIMPLOT精確得出這六個重組事件中重組發(fā)生的位置。確定了5種算法共同支持的61個假定重組子序列,據(jù)我們的知識,其中53個為首次發(fā)現(xiàn)。同時也發(fā)現(xiàn)了人類乙型肝炎病毒和黑猩猩乙型肝炎病毒之間的重組現(xiàn)象。還表明,PRECC基因區(qū)域和基因邊界附近發(fā)生重組的概率較高。在第四章中討論了將來可以進(jìn)一步發(fā)展的工作乙肝病毒基因的適應(yīng)性進(jìn)化,乙肝病毒抗原蛋白的免疫逃避,以及HBV基因型的進(jìn)化歷史。
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    • 簡介:目的EPSTEINBARRVIRUS病毒EBV在人群中的感染極其普遍,感染后通常呈潛伏感染狀態(tài)。當(dāng)宿主免疫功能下降時可以出現(xiàn)再活化并可能導(dǎo)致多種疾病。迄今沒有有效的疫苗可以預(yù)防其感染。EB病毒感染可導(dǎo)致傳染性單核細(xì)胞增多癥INFECTIOUSMONONUCLEOSISIM噬血細(xì)胞綜合征HEMOPHAGOCYTICSYNDROMEHPS、慢性活動性EB病毒感染CHRONICACTIVEEPSTEINBARRVIRUSINFECTIONCAEBV、X連鎖淋巴組織增生性疾病XLINKEDLYMPHOIDTISSUEPROLIFERATIVEDISEASEXLP、鼻咽癌及淋巴瘤等多種疾病相關(guān),其感染率及發(fā)病率在不同地區(qū)及不同年齡的人群中的分布有顯著差異。MSM人群是HIV感染的高危人群,本地區(qū)MSM人群HIV感染率超過15%HIVAIDS患者機(jī)體免疫功能下降,可導(dǎo)致機(jī)體B淋巴細(xì)胞內(nèi)潛伏感染的EB病毒再次活化并大量增殖,從而使EB病毒相關(guān)疾病發(fā)病率增加。目前國內(nèi)外均無MSM人群EB病毒感染流行病學(xué)調(diào)查研究報道,本文擬對重慶地區(qū)成年男同性戀(MSM)人群EB病毒感染開展血清流行病學(xué)調(diào)查,并與健康人群和HIV感染者進(jìn)行比較了解MSM人群EB病毒感染的現(xiàn)狀,比較MSM人群HIV感染后EB病毒感染再活化的比例,為MSM人群防治EB病毒感染提供參考。方法收集1082例重慶地區(qū)成年男同性戀人群(MSM)外周血標(biāo)本,其中HIV陽性130例(1201),HIV陰性952例(8799)選取1059例健康成年男性外周血標(biāo)本作為對照。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清EBVCAIGGEBVNAIGGEBVCAIGM抗體,從多個層面分析檢測結(jié)果。結(jié)果(1)MSM人群EB病毒既往感染率為9235(10021082),其中HIV感染組和HIV陰性組分別為8846(115130)和9317(887952)。MSM人群HIV陰性組同健康成年男性EB病毒既往感染率8989(9521059)有統(tǒng)計學(xué)意義(P(2)在MSM人群、HIV陽性組、HIV陰性組EB病毒未感染率分別為049(51082)、077(1130)、042(4952),三組均顯著低于健康成年男性500(531059),具有統(tǒng)計學(xué)意義(P005)。(3)在MSM人群、HIV陽性組、HIV陰性組EB病毒再活化率分別為481(521082)、1000(13130)、410(39952),其中僅HIV陽性組顯著高于健康成年男性377(401056)(P結(jié)論1)MSM人群EB病毒既往感染率與普通人群相似,但未感染率低于普通人群。2)HIV感染后導(dǎo)致EB病毒復(fù)制增加,再活化率明顯增高可能同EBV傳播途徑及HIV感染后機(jī)體免疫力下降有關(guān)。
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    • 簡介:華中師范大學(xué)碩士學(xué)位論文我國首株藍(lán)藻病毒(噬藻體)的分子生物學(xué)特征姓名祝海燕申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物指導(dǎo)教師趙以軍石正麗200251ABSTRACTINTHISTHESIS.THEFISTCYANOPHAGEISOLATEDINCHINAWASINVESTIGATEDWITHREGARDTOTHEMOLECULARBIOLOGICALCHARACTERS.TECHNIQUESFORTHELARGEHARVESTANDTHEELECTRONICMICROSCOPYNEGATIVESTAININGOFTHECYANOPHAGEWEREESTABLISHED.THEGENOMELIBRARYWASCONSTRUCTED.SEQUENCINGFORSOMEGENOMEFRAGMENTSWASCONDUCTED.FURTHERMORE.THESEQUENCESWERCANALYZEDANDCOMPARED、撕TLLTHESEQUENCEDATAINGENBANK.THERESULTSINDICATEDTHATTHECYANOPHAGEREPRESENTEDAPHAGELIKESHAPEWITLLHEADDIAMETERCA.4752NMANDASHORTTAILALMOSTINVISIBLETHECYANOPHAGECONTAINEDADOUBLESTRANDEDDNAGENOMEATCA.36.6KB.THEGENOMECOULDBEDIGESTEDONLYBYRESTRICTIONENDONUCLEASESHINDLII,ACCIANDXBAI,ANDWASRESISTANTTOCLEAVAGEBYAWIDERANGEOFOTHERRESTRICTIONENDONUCLEASES.PLASMIDPUCL8WASUSEDTOCONSTRUCTVIRALGENOMELIBRARY.TENFRAGMENTSWEREOBTAINEDANDSOMEOFTHEMWEREPARTIALLYSEQUENCEDANDANALYSEDUSINGGENBANKDATA.SEQUENCEANALYSISREVEALEDTHATMOSTOFTHESEQUENCESSHOWED110SIMILARITIESTOTHEKNOWNGENESEXCEPTTHATONLYTWOSEQUENCESGAVERISETOSOMESIMILARITIES.INTHEM,ONEOWNEDACONSEVEDDOMAINOF、JASE__SUBA,ANOTHERCODEDAPROLINERICHPROTEIN.WHICHHASMULTIPLEPHOSPHATESITES.KEYWORDSCYANOPHAGEPLECTONEMANUCLEICACIDCH眥CTCRSDNALIBRARYHOMOLOGYCOMPARISONII
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    • 簡介:上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文題目目廣東沿海青蟹雙順反子病毒廣東沿海青蟹雙順反子病毒1與呼腸孤病毒與呼腸孤病毒的分子流行病的分子流行病學(xué)調(diào)查調(diào)查英文題目英文題目MOLECULAREPIDEMIOLOGICALINVESTIGATIONOFTHEMUDCRABREOVIRUSMUDCRABDISCISTROVIRUS1ALONGTHECOASTOFGUANGDONGPROVINCE專業(yè)業(yè)漁業(yè)研究方向研究方向漁業(yè)病害防治姓名名申亞陽指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師郭志勛研究員二O一六年一六年五月學(xué)校代碼10264研究生學(xué)號M130150356上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文答辯委員會成員名單答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注主席委員委員委員委員委員委員秘書答辯地點答辯日期
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    • 簡介:分類號密級華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文真核生物非逆轉(zhuǎn)錄病毒內(nèi)生化與進(jìn)化基因組學(xué)研究ENDOGEN娩ATIONANDEVOLUTIONARYGENOMICSOFEUKARYOTICNONRETROVIRALVIRUSES博士研究生劉慧泉指導(dǎo)教師姜道宏教授指導(dǎo)小組付艷蘋副教授程家森副教授李國慶教授黃俊斌教授專業(yè)植物病理學(xué)研究方向病毒進(jìn)化獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)博士獲得學(xué)位時間2011年6月26日華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院二O一一年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明及乏警辯學(xué)位論文易如需保密,解密時間年月日是否保密1RZ獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料,指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明,并表示了謝意研究蚴乃√咝,寧L帆馴,年6月2夕日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本;學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版,并提供目錄檢索和閱覽服務(wù),可以采用影印縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,同時本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力注保密學(xué)位論文印涉及技術(shù)秘密、商業(yè)秘密或申請專利等潛在需要提交保密的論文在解密后適用于本授權(quán)書糊橢張別壟,7L銚名艇。簽名日期2D11∥月20日簽名EL期弛FFR年6月伽
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    • 簡介:CLASSIFIEDINDEXCONFIDENTIALYES/NONOCODE10224NO.100665DISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREEGELTIONANDHAS“BIOLR“1ENERATLONANASICDIOLORICALCHARACTERISTICSOFTWORECOMBINANTDUCKENTERITISVIRUSDELETINGSORF3/TKCANDIDATEMUXIAOYUSUPERVISORPROFESSORWANGJUNWEIDEGREECATEGORYMASTEROFAGRICULTURECOLLEGEVETERINARYMEDICINEFIRSTLEVELDISCIPLINEVETERINARYSCIENCESSECONDLEVELDISCIPLINEPREVENTINEVETERINARYSCIENCESHARBINCHINAJUNE2013東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩上學(xué)位論文2.3.2DEV全基因組與重組轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染????????????????182.3.3重組病毒的篩選及純化???????????????????????..182.4重組病毒的鑒定?????????????????????????????????182.4.1引物設(shè)計與合成???????????????????????????182.4.2重組病毒的PCR鑒定?????????????????????????.192.4.3DEVAS3/DEVATK基因表達(dá)產(chǎn)物的間接免疫熒光檢測??????????.202.5重組病毒DEV△S3/DEV△TK生物學(xué)特性的基本研究?????????????202.5.1重組病毒DEVAS3/DEVATK的理化特性分析??????????????202.5.2重組病毒DEVAS3/DEVATK的體外穩(wěn)定性分析?????????????212.5.3重組病毒DEV△S3/DEV△TK與親本病毒生長曲線的繪制?????????212.5.4重組病毒DEV.△S3/DEV△TK與親本病毒蝕斑直徑大小的比較???????2L2.6動物試驗????????????????????????????????..2L2.6.1免疫分組??????????????????????????????2L2.6.2DEV病毒的超離純化?????????????????????????..222.6.3咽及泄殖腔棉拭子中基因的檢測????????????????????222.6.4間接ELISA方法檢測鴨血清中抗體消長規(guī)律??????????????。222.6.5中和抗體效價的測定??????????????????????????..232.6.6病理組織學(xué)變化???????????????????????????..233結(jié)果與分析????????????????????????????????????????243.1重組病毒轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建????????????????????????.243.1.1重組病毒同源臂基因的擴(kuò)增??????????????????????243.1.2表達(dá)盒基因的獲得???????????????????????????243.1.3重組質(zhì)粒的鑒定????????????????????????????.253.1.4左、右同源臂連接結(jié)果????????????????????????253.1.5PMDL8TGPTEGFP的連接結(jié)果?????????????????????273.1.6缺失病毒轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建???????????????????????263.2重組病毒的構(gòu)建與篩選?????????????????????????283.3重組病毒的鑒定?????????????????????????????????..293.3.1重組病毒DEVAS3的PCR鑒定???????????????????????。293.3.2重組病毒DEVATK的PCR鑒定???????????????????????。293.3.3重組病毒的IIF檢測???????????????????????????293.4重組病毒DEVAS3/DEVATK生物學(xué)特性的基本研究?????????????3L3.4.1重組病毒DEV△S3/DEV.△TK的理化特性分析??????????????3L3.4.2重組病毒DEVAS3/DEVATK的體外穩(wěn)定性分析??????????????323.4.3重組病毒DEV△S3/DEV.△TK生長曲線的繪制??????????????.423.4.4重組病毒DEV以S3/DEV△TK與親本病毒蝕斑直徑大小的比較???????42II
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    • 簡介:廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文山羊痘病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性的研究姓名黃夏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師陸芹章20060601廣西大學(xué)碩士論文山羊痘病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性的研究ISOLATIONIDENTIFICATIONANDBIOLOGICALCHARACTERISTICS0FGOATPOXVIRUSABSTRACTINTHISSTUDY,AFIELDSTRAINOFGOATPOXVIRUSGPVWASISOLATEDANDTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFTHEISOLATEDVIRUSWERESTUDIED,BYCELLCULTURE,F(xiàn)LUORESCENTIDENTIFICATION,ANIMALTESTS,MORPHOLOGICALOBSERVATIONANDSEQUENCEANALYSISTHEOBVIOUSLESIONSOFNEWBORNLAMBSPERMARYCELLWEREOBSERVEDINTHESECONDDAYAFTERTHEINOCULATIONOFVIRUSSUSPENDINGTHEINDIRECTFLUORESCENTASSAYIFARESULTSSHOWEDTHATTHEVIRUSCANREACTTOSTANDARDPOSITIVESERUTNOFGOATPOXNOCLINICALSIGNSWEREOBSERVEDAFTERTHEMICE,RABBITS,CAVIESINOCULATEDWITLLVIRUSSUSPENDINGBUTTHETYPICALCLINICALSYMPTOMANDPATHOLOGICALCHANGESOFGOATPOXVIRUSINFECTIONAPPEAREDINTHETENTHDAYAFTERTHETHREEMONTHGOATINOCULATEDWITHVIRUSSUSPENDINGTHEPATHOLOGICALCHANGESOFCHICKENEMBRYOSWERENOTOBSERVEDAFTERINOCULATIONTHEVIRUSSHOWEDTYPICALMORPHOLOGICALSHAPEOFGOATPOXVIRUSUNDERELECTRONMICROSCOPEP32GENEOFGPVWASCLONEDINTOPMDL8一TVECTORANDTHENSEQUENCED,COMPAREDWIⅡLOTHERP32SEQUENCESOFGOATPOXVIRUSESAVAILABLEINTHEGENEBANKTHEHOMOLOGYOFNUCLEOTIDEANDDEDUCEDAMINOACIDSEQUENCEBETWEENISOLATEDVIRUSANDGPVVACCINESTRAINWERE996%AND994%ANDWITHOTHERGPVSHARE996%AND988994%HOMOLOGYATNUCLEOTIDEANDAMINOACIDLEVEL,RESPECTIVELYTHERESULTSABOVEDEMONSTRATEDTHATTHEISOLATEDVIRUSISGPVWHOSEBIOLOGICALCHARACTERISTICSWEREALITTLEDIFFERENTFIOMTHOSEOFOTHERREPORTEDGPVTHEHOMOLOGYOFNUCLEOTIDEANDDEDUCEDAMINOACIDSEQUENCEOFP32ISVERYHIGHAMONGALIGPVSTHEISOLATEDVIRESWASNAMEDGOATPOXVIRUSLIUJIANG/2003STRAINKEYWORDSGOATPOXVIRUS;ISOLATIONANDIDENTIFICATION;BIOLOGICALCHARACTERISTICS2
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    • 簡介:『III11IIIIIIIIIIII11分類號Y3396371密級碩士學(xué)位論文MASTER,SDEGREEDISSERTATION來源于茶擬盤多毛孢的一個新金色病毒的鑒定及生物學(xué)特性的研究STUDYONTHEIDENTIFICATIONANDCHARACTERIZATIONOFANOVELCHRYSOVIRUSISOLATEDFROMPESTALOTLOPSISTHEAE研究生CANDIDATE周玲玲LINGLLNGZHOU學(xué)號STUDENTNO2015301110176專業(yè)MAJOR植物病理學(xué)PLANTPATHOLOGY導(dǎo)師徐文興教授SUPERVISORPROFESSORWENXINGXU中國武漢WUHAN,CHINA二O一八年六月HJNE,2018學(xué)洲失豢帆~痧屈黜厶TM辛呲⑧華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)位論文是否保密否如需保密,解密時間年月日獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特另LJ加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料,指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。與我一露工作曲同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明,并表示了謝意。,、一研究生簽名7馘詮殮時間糾罾年/月多日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)予保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定,幫學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印劇本和電子版本;學(xué)校有權(quán)保存提交論文酌印刷版和電子版,并提供目錄檢索和閱覽服務(wù),可以采月影印、縮印或掃描_等復(fù)創(chuàng)手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,為存在館際合作關(guān)系的兄弟高校用戶提供文獻(xiàn)傳遞和交換服務(wù),阿時本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力。注保密學(xué)位論文即涉及技術(shù)秘密、商韭秘密或申請專_;|等潛在需要提交保密的論文在解密后適用于本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名禹殮蝰導(dǎo)師簽名秒≯會氓簽名日期DT3年彳月多日簽名日期伽疆年F月弓弱注請將本表直接裝訂在學(xué)位論文的扉頁
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    • 簡介:狂犬病毒RABIESVIRUS,RV屬于彈狀病毒科狂犬病毒屬的單股不分節(jié)段的負(fù)鏈RNA病毒,具有高度嗜神經(jīng)性和致死性?;蚪M全長約為12KB,分別編碼糖蛋白G、核蛋白N、基質(zhì)蛋白M、磷蛋白P和大蛋白L。目前對該病毒與宿主細(xì)胞相互作用的機(jī)制認(rèn)識相對有限,致病機(jī)制仍不甚明了。本研究對RV感染的宿主細(xì)胞差異表達(dá)蛋白進(jìn)行分析,旨在為探討RV對宿主細(xì)胞的致病作用和尋找潛在的藥物靶標(biāo)奠定基礎(chǔ)。單克隆抗體是疾病診斷、預(yù)防、治療以及免疫機(jī)制研究的有力武器,除商業(yè)化的糖蛋白單克隆抗體,無針對RV其他蛋白的單克隆抗體。本研究將RV核蛋白重組表達(dá)載體PET32ANP和糖蛋白重組表達(dá)載體PET32AGP分別誘導(dǎo)表達(dá),用變性純化的表達(dá)蛋白免疫BALBC小鼠,成功制備了9株抗RV核蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞和1株抗RV糖蛋白單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞。同時,通過以自制的狂犬病毒感染乳鼠腦組織懸液為抗原免疫小鼠,取脾細(xì)胞與SP20細(xì)胞融合,成功獲得了7株為抗RV磷蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞。為了探索病毒與宿主細(xì)胞的相互作用,本研究選擇鼠成神經(jīng)瘤細(xì)胞N2A為感染模型,采用二維凝膠電泳技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜鑒定的經(jīng)典比較蛋白組學(xué)方法,分析了N2A細(xì)胞在感染RV后24H、48H和96H的差異蛋白表達(dá)譜。PDQUEST軟件分析結(jié)果顯示,RV感染N2A細(xì)胞后,共出現(xiàn)了97個差異表達(dá)的蛋白點,差異表達(dá)的蛋白點主要出現(xiàn)在感染后48H和96H,且多數(shù)蛋白點呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)趨勢。串聯(lián)質(zhì)譜MALDITOFTOF對差異蛋白點進(jìn)行鑒定,成功鑒定出對應(yīng)49種差異蛋白的53個蛋白點。這些差異蛋白的功能涉及蛋白合成與加工、能量代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、應(yīng)激反應(yīng)伴侶蛋白、基因調(diào)控、免疫反應(yīng)和泛素蛋白酶體通路。設(shè)計引物,并通過適時熒光定量PCR對其中的27個差異蛋白對應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄本的變化進(jìn)行了驗證,一定程度上確證了質(zhì)譜鑒定結(jié)果的可靠性。免疫印跡實驗驗證了HSP90和CCTΓ在感染組和對照組中上調(diào)表達(dá)的差異。針對差異表達(dá)蛋白,基于INGENUITY生物網(wǎng)絡(luò)分析軟件IPA繪制了這些差異蛋白的相互作用網(wǎng)絡(luò)。上述差異表達(dá)蛋白信息和蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)為進(jìn)一步解析狂犬病發(fā)病機(jī)制提供了重要的蛋白組學(xué)信息。依據(jù)比較蛋白組學(xué)信息,采用間接免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)進(jìn)一步分析了RV感染細(xì)胞CCTΑ、CCTΒ、CCTΓ、HSP90、PFDN1和DLC8的亞細(xì)胞分布。結(jié)果表明,病毒感染引起了細(xì)胞CCTΑ和CCTΓ蛋白在內(nèi)氏小體部位的高度募集,PFDN1和DLC8在該部位的部分聚集,CCTΑ和CCTΓ與病毒N、P蛋白能夠很好的共定位而CCTΒ和HSP90則無明顯的內(nèi)氏小體部位募集現(xiàn)象。共轉(zhuǎn)染RVN和P的細(xì)胞內(nèi)也形成類似內(nèi)氏小體的結(jié)構(gòu),且在該結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)與感染細(xì)胞類似的現(xiàn)象,CCTΓ、CCTΑ、PFDN1和DLC8與內(nèi)氏小體中N、P蛋白發(fā)生共定位。單獨轉(zhuǎn)染N或P的細(xì)胞中也出現(xiàn)不同程度的CCT和CCTΑ與N或P的共定位。熒光定量結(jié)果表明感染細(xì)胞中DLC8、CCTΓ和HSP90均呈現(xiàn)出轉(zhuǎn)錄上調(diào),而CCTΑ、CCTΒ、PFDN1則變化不明顯而P質(zhì)粒單轉(zhuǎn)以及與N質(zhì)粒共轉(zhuǎn)N2A細(xì)胞引起了DLC8的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào),這可能與P和DLC8的相互作用有關(guān),而其他蛋白則變化不顯著。這都說明,這些宿主細(xì)胞蛋白主動或被動的參與了病毒的生命活動。鑒于CCTΓ在蛋白組學(xué)上的表達(dá)差異及亞細(xì)胞定位上的分布變化,有必要對其在狂犬病毒生命周期中的具體功能進(jìn)行探索。本研究通過慢病毒介導(dǎo)的SHCCTΓ、SHCCTΑ和無義序列SHCOO2V的轉(zhuǎn)導(dǎo)建立了穩(wěn)定表達(dá)SHCCTΓ、SHCCTΑ的RNA干擾細(xì)胞系,通過病毒接種,TCID50測定以及適時熒光定量PCR分析,發(fā)現(xiàn)CCTΓ和CCTΑ的敲除能夠降低狂犬病毒的復(fù)制以及病毒各基因的轉(zhuǎn)錄水平,表明CCTΓ和SHCCTΑ對于狂犬病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄是重要的。
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    • 簡介:關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文,是在導(dǎo)師指導(dǎo)下,獨立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體,均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名導(dǎo)師簽名ET期皿L么FDNAPCRI玎SPFTAQAALMLM1BPKBDHMINRPMUGDEOXYRIBONUCLEICACIDPOLYMERASECHAINREACTIONREVERSETRANSCRIPTIONSPECIFICPATHOGENFREETHERMUSAQUATICAMINOACIDSLITERMICROLITERMILLILITERBASEPAIRKILOBASEPAIRDAYHOURMINUTERATATIONPERMINUTEMICROGRAM脫氧核糖核酸聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)反轉(zhuǎn)錄無特定病原體水生熱棲酶氨基酸升微升毫升堿基對千堿基對天小時分鐘每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)微克
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    • 簡介:SHANDONGAGRICULTURALUNIVERSI鑼PHDDISSERTATIONCOMPARISONSOFBIOLOGICALCHARACTERISTICBEBⅣEENRECOMBINANTMAREK7SDISEASE一ⅥRUSANDITSMUTANTSTRAINSD印叭MENTCOLLEGEOFANIMALSCIENCEAND、廠ETERINA巧MEDICINEM旬ORPREVENTIVEVETERINA巧MEDICINEPHDCANDIDATESUSHUAISUPERVISORPROCUIZHIZHONGJUNE,2013本研究由國家自然科學(xué)基金面上項目31072149和廣東省聯(lián)合基金項目U1131005資助THISSTUDYWASSUPPORTEDBYGRANTSFROMTHENATIONALNATURALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINA31072149ANDGUANGDONGJOINTFUNDSFROMTHENATIONALNATURAISCIENCEFOUNDATIONOFCHINAU1131005
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    • 簡介:目的探討非病毒性肝炎的疾病構(gòu)成、發(fā)病狀況及流行病學(xué)特點等,從而為今后開展的非病毒性肝炎流行病學(xué)調(diào)研等臨床工作起到參考作用,并為制定非病毒性肝炎有效的診治措施提供依據(jù)。方法采用臨床流行病學(xué)調(diào)查方法,回顧分析大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院各科室于2002年1月~2010年12月診治的901例非病毒性肝炎住院患者的臨床資料。結(jié)果1我院901例非病毒性肝炎住院患者中,藥物性肝炎369例41%,居首位,其他依次為酒精性肝炎225例25,非酒精性脂肪性肝炎130例14,中毒性肝炎98例11,自身免疫性肝病79例9,其中自身免疫性肝炎AIH61例,原發(fā)性膽汁性肝硬化PBC17例,原發(fā)性硬化性膽管炎PSC1例。2酒精性肝炎患者男女比例為2232,幾乎皆為男性發(fā)病。自身免疫性肝病包括AIH、PBC、PSC患者男女比例為2653,女性患者人數(shù)約為男性的2倍。酒精性肝炎、藥物性肝炎患者皆在46~55年齡段構(gòu)成比最高,分別為41、24。非酒精性脂肪性肝炎住院患者多集中在46~55歲和65歲以上,構(gòu)成比皆為27。3藥物性肝炎住院人數(shù)于2004~2007年之間呈急劇上升趨勢,而后出現(xiàn)小幅度的回落。酒精性肝炎住院人數(shù)總體呈上升趨勢,其中分別于2006年、2010年呈現(xiàn)2個高峰期。非酒精性脂肪性肝炎與自身免疫性肝病住院人數(shù)皆呈持續(xù)上升趨勢。歷年來中毒性肝炎患者在臨床上較少見,但2008年住院人數(shù)明顯增多。4在2006~2010年間非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝病的年平均住院人數(shù)均較2002~2005年間的顯著增多P<001。5我院藥物性肝炎住院患者中,由抗甲狀腺藥物引起的病例數(shù)占首位,為46例26,其次是抗腫瘤藥和中藥,分別為36例21、28例17。此外,非甾體抗炎藥、激素類藥、抗生素類藥、免疫抑制劑、抗結(jié)核藥物等也是常見的誘發(fā)肝功損害的藥物。結(jié)論1我院2002~2010年間住院的非病毒性肝炎患者中,藥物性肝炎居首位,其次是酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、中毒性肝炎及自身免疫性肝病。2我院酒精性肝炎住院患者多集中在46~55歲,男性較多見。自身免疫性肝病有顯著的女性易感性。非酒精性脂肪性肝炎住院患者多集中在46~55歲和65歲以上。
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    • 簡介:分類號UDC密級編號專業(yè)碩士專業(yè)碩士學(xué)位論文學(xué)位論文洛陽地區(qū)犬細(xì)小病毒病的流行病學(xué)調(diào)查及基因變異分析THEEPIDEMIOLOGYINVESTIGATIONGENEMUTATIONANALYSISOFCANINEPARVOVIRUSINLUOYANG2014年12月學(xué)位申請人學(xué)位申請人彭春平彭春平指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師丁軻丁軻副教授副教授、周變?nèi)A周變?nèi)A副教授副教授合作教師合作教師王明旻王明旻研究員研究員專業(yè)領(lǐng)域?qū)I(yè)領(lǐng)域?qū)W位類別學(xué)位類別獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人聲明,所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得河南科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的其他學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名日期關(guān)于論文使用授權(quán)的說明關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解河南科技大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)校擁有對所有學(xué)位論文的復(fù)制權(quán)、傳播權(quán)、匯編權(quán)及其它使用權(quán)(特殊情況需要保密的論文應(yīng)提前說明,但在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)。需要保密的論文請?zhí)顚懕緦W(xué)位論文在年月至年月期間需要保密,解密后適用本授權(quán)書。(需要保密的學(xué)位論文無須向圖書館提供論文的電子文檔)研究生簽名導(dǎo)師簽名日期
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