簡介：Ⅲ哪㈨㈣咖1111I洲0Y3291090分類號85261學號2014807169南京蔑蚩戈學全EL制專業(yè)學位碩士學位論文華東地區(qū)類豬圓環(huán)病毒P1的分子流行病學調查及自然感染P1病毒仔豬的病例研究焦方方指導教師學位類別領域名稱研究方向答辯日期韭煊塾援何孔旺研究員獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士微生物與免疫學二。一六年五月原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內容外，本論文不包含任何其它個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者需親筆簽名巧萋，葛而訓掃年月細日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權南京農業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編學位論文。保密口，在年解密后適用本授權書。本學位論文屬于不保密“請在以上方框內打“√，，學位論文作者需親導師需親筆簽名斯彬年R月珈日加6年上月珈日

簡介：目的分析19992014年江西省甲型病毒性肝炎的流行特征及變化趨勢，了解江西省重點地區(qū)甲肝疫苗接種率及甲肝疫苗強化免疫流行病學效果，研究其相關關系，探討科學有效的甲型病毒性肝炎防治的策略，客觀評價甲肝疫苗預防接種效果；為我省以及甲型病毒性肝炎重點地區(qū)科學防控甲型病毒性肝炎提供流行病學依據(jù)。方法1通過全國法定傳染病報告系統(tǒng)收集江西省甲型病毒性肝炎病例，通過歷年江西省統(tǒng)計局統(tǒng)計年鑒資料收集人口學資料，采用描述性流行病學方法對19992014年江西省甲型病毒性肝炎疫情進行分析，使用SPSS180軟件進行統(tǒng)計分析。2、在2009年在于都縣、瑞金市、萬安縣、袁州區(qū)、萬載縣等5個縣（區(qū)、市）開展甲肝滅活疫苗的群體性預防接種，對五縣（區(qū)、市）無甲肝患病史及無甲肝疫苗接種史的18月齡12歲兒童（1997年1月1日至2007年4月30日出生的兒童）免費接種1劑次甲肝滅活疫苗。收集五縣（區(qū)、市）甲肝疫苗接種數(shù)據(jù)及甲型病毒性肝炎發(fā)病率，采用描述性流行病學方法對20032014年五縣（區(qū)、市）甲型病毒性肝炎接種率及疫情進行分析，使用SPSS180軟件進行統(tǒng)計分析。結果1江西省19992014年的甲型病毒性肝炎平均發(fā)病率為6730210萬，發(fā)病率總體呈逐年下降趨勢（Χ230956867，P2江西省19992007年的甲型病毒性肝炎年均發(fā)病率為10717210萬，高于20082014年的年均發(fā)病率1856810萬，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（Χ2319997944，P3江西省20012014年的甲型病毒性肝炎累計發(fā)病無明顯的季節(jié)性，3～5月發(fā)病數(shù)相對較多。4江西省20052014年甲型病毒性肝炎年平均發(fā)病率前三位的是景德鎮(zhèn)市、宜春市、鷹潭市，年平均發(fā)病率最低的是上饒市，發(fā)病率存在地區(qū)差異，差異有統(tǒng)計學意義（Χ22820768，P5江西省甲型病毒性肝炎的發(fā)病率男性大于女性，男女發(fā)病性別比為2011，男女之間發(fā)病率差異具有統(tǒng)計學意義（Χ21652242，P6自2008年將甲肝疫苗納入擴大免疫規(guī)劃以來，于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬載縣、萬安縣20082014年甲型病毒性肝炎年均發(fā)病率均低于接種甲肝疫苗前20032007年年均發(fā)病率，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P72009年于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬載縣實施甲肝疫苗群體性接種后，4個縣（區(qū)、市）20092010年甲型病毒性肝炎年均發(fā)病率均低于2008年年發(fā)病率，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，差異有統(tǒng)計學意義。8于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬載縣20102014年發(fā)病率變化較小，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，差異無統(tǒng)計學意義。結論1江西省甲型病毒性肝炎發(fā)病總體呈逐年下降趨勢。兒童接種甲肝疫苗防控效果明顯，人群甲型病毒性肝炎免疫水平提高；但報告的甲型病毒性肝炎病例仍然集中于0～14歲年齡組，提示托幼兒童及中小學生仍是甲型病毒性肝炎防控的重點人群。農民作為高發(fā)職業(yè)群體，今后要采取以預防為主的綜合措施，重點加強宣傳健康教育，進一步降低其甲型病毒性肝炎發(fā)病率，保護勞動力。2于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬載縣、萬安縣將甲肝疫苗納入擴大國家免疫規(guī)劃后，甲型病毒性肝炎發(fā)病率明顯下降。在發(fā)生自然災害后，對受災地區(qū)進行甲肝疫苗群體性接種，有效的預防了甲型病毒性肝炎暴發(fā)，從而達到降低甲型病毒性肝炎的發(fā)病率。今后應進一步研究制定最佳免疫程序提高甲肝疫苗的接種率，減少甲型病毒性肝炎發(fā)病機率。

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簡介：背景中東呼吸道綜合征冠狀病毒（DLEEASTRESPIRATYSYNDROME，MERSCOV）是人類新發(fā)冠狀病毒，首次被ZAKI小組從沙特阿拉伯一名患有呼吸道感染和腎功能衰竭的老年患者體內分離出來，并于2012年9月確診。目前中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS）造成1952人感染，其中693例死亡，死亡率高達36，對人類生命和健康構成嚴重威脅。MERS復制酶聚合體（REPLICASECOMPLEX，RC）的形成主要取決于木瓜樣蛋白酶（PAPAINLIKEPROTEASE，PLPRO）和3C樣蛋白酶（3CLIKEPROTEASE，3CLPRO），抑制這兩種蛋白酶的激活可有效阻斷病毒復制。冠狀病毒木瓜樣蛋白酶在宿主抗病毒天然免疫應答的調節(jié)中起重要作用，這是前期實驗室研究的結果，但目前對冠狀病毒3CLPRO研究較少，其與抗病毒天然免疫反應的關系還不清楚。本課題將主要研究MERS3C樣蛋白酶，深入研究其與宿主抗病毒天然免疫關系等生物學功能。目的從MERS3CLPRO調控細胞內IFN表達機制及其在宿主細胞中是否誘導自噬進行研究，為探究人類新發(fā)MERS冠狀病毒參與免疫反應機制提供理論依據(jù)。方法首先，合成MERSCOVSARSCOVNL63COV3CLPRO，利用PCR定點突變試劑盒構建蛋白酶活性缺失突變體。其次，利用蛋白印跡法雙熒光素酶活性測定法酶聯(lián)免疫吸附法和實時定量PCR等研究技術，檢測MERS3CLPRO及突變體對干擾素水平以及泛素化蛋白的影響；利用免疫共沉淀技術研究3CLPRO與RIGI通路關鍵因子泛素化水平影響。為了研究冠狀病毒3C樣蛋白酶與細胞自噬的關系，將帶有綠色熒光蛋白GFP基因的LC3B與MERS3CLPRO轉染于細胞中，通過細胞免疫熒光染色技術確定MERS3CLPRO是否引起特征性GFPLC3B點狀聚集。其次，利用WESTERNBLOTTING和電鏡技術檢測3CLPRO誘導自噬效應。為了探究自噬體產生機制，首先WESTERNBLOTTING技術檢測自噬蛋白P62的表達情況；隨后使用免疫熒光技術檢測由3CLPRO誘導的PMRFPGFPLC3綠色和紅色點狀熒光聚集。結果13CLPRO是由人冠狀病毒編碼的新IFN拮抗蛋白（1）通過雙熒光素酶活性檢測技術對3CLPRO調控干擾素活性分析，發(fā)現(xiàn)MERSSARSNL633CLPRO均可抑制RIGIN介導以及仙臺病毒刺激下細胞內干擾素激活活性，酶聯(lián)免疫吸附測定和實時定量PCR檢測結果進一步證實3CLPRO抑制細胞內干擾素表達。同時檢測3CLPRO對關鍵蛋白介導的IFN信號通路的影響，結果顯示3CLPRO明顯抑制IPS1ERISTBK1IRF3IRF7激活的干擾素產生（2）對3CLPRO干擾素拮抗活性的特異性研究發(fā)現(xiàn)，3CLPRO兩種蛋白酶活性突變體不抑制IFN表達，提示3CLPRO抑制干擾素活性依賴于其催化活性位點。2MERS3CLPRO是一種新DUB酶（1）將MERS3CLPRO分別與泛素分子HAUB，以及HAUBK48，HAUBK63基因轉染HEK293T細胞，實驗發(fā)現(xiàn)MERS3CLPRO能有效地去除細胞內蛋白的泛素化修飾，證實MERS3CLPRO具有細胞內去泛素化（DUB）活性，且3CLPRO的DUB活性與其蛋白酶催化活性密切相關。使用表達純化的3CLPRO進行體外DUB實驗進一步證實這一特性。（2）以類泛素分子（SUMO和ISG15）為作用底物，發(fā)現(xiàn)3CLPRO具有去SUMO活性和去ISG活性，且其活性依賴于酶催化活性位點。3MERS3CLPRO抑制IFN機制研究利用免疫共沉淀技術檢測，表明3CLPRO通過抑制或減弱RIGI／TBK1／IRF3等蛋白泛素化從而負調控干擾素表達，且其活性依賴于3CLPRO酶催化活性位點。4MERS3CLPRO是新發(fā)現(xiàn)的自噬誘導蛋白（1）MERS3CLPRO誘導EGFPLC3B綠色熒光點狀積累，MERS3CLPRO誘導自噬微管蛋白1輕鏈3（LC3II）表達上調說明3CLPRO可誘導自噬。電子投射電鏡技術證實，3CLPRO誘導細胞出現(xiàn)自噬體特征性雙層膜結構，進一步證實3CLPRO可激活自噬。（2）研究發(fā)現(xiàn)3CLPRO誘導不完全自噬作用，MERS3CLPRO誘導自噬具有依賴時間性且獨立于其酶催化活性。（3）研究發(fā)現(xiàn)其它兩種感染人的冠狀病毒3CLPRO如SARS和NL63等均誘導自噬產生，提示3CLPRO誘導細胞自噬特性廣泛存在于人類冠狀病毒中。結論本課題研究發(fā)現(xiàn)了3CLPRO調控宿主免疫反應及誘導細胞自噬等新型生物學功能。證實了MERS編碼的3CLPRO具有多方面功能，不僅參與負調控抗病毒天然免疫反應，還具有去泛素化酶（DUB）活性，此外3CLPRO是一種冠狀病毒來源的細胞自噬誘導蛋白。3CLPRO參與抗病毒天然免疫反應相關機制表明，3CLPRO利用可以去泛素化特性，減弱或抑制信號通路中關鍵因子的泛素化，負調控干擾素表達。本課題新發(fā)現(xiàn)冠狀病毒蛋白酶3CLPRO能誘導宿主產生自噬效應，為抗病毒藥物的研究提供了理論依據(jù)。

簡介：目的構建符合深圳市實際的乙肝免疫預防決策分析馬爾科夫模型，同時采用成本效益分析和成本效果分析兩種方法，完成乙肝母嬰阻斷策略的經(jīng)濟學評價。構建基于深圳市社區(qū)人群慢性乙肝抗病毒治療策略的決策分析馬爾科夫模型，獲得20～59歲人群中慢性乙肝病人采用恩替卡韋治療的成本效果分析結果和可負擔性。明確成本效益分析和成本效果分析的適用條件及其在策略定量優(yōu)化中的作用，探索廣義成本效果分析的指標和應用。方法根據(jù)決策分析馬爾科夫模型原理，以乙肝母嬰阻斷為研究策略，以乙肝疫苗普種和不接種作為參比策略，確定新生兒乙肝免疫預防策略模型，引入深圳市相關參數(shù)后，用2013年的出生人口數(shù)作為隊列人群，計算凈現(xiàn)效益（NPV）和效益成本比（BCR）、增量成本效果比（ICER），同時進行CBA和CEA比較和評估。通過一維和多維敏感性分析，明確參數(shù)不確定性對決策結果的影響。以抗病毒治療策略為研究策略，以不治療為對比策略，確定深圳市20～59歲人群中慢性乙肝病人采用恩替卡韋抗病毒治療的決策分析馬爾科夫模型，模擬10萬人隊列，引入相關參數(shù)后獲得抗病毒治療策略的成本和效果，計算ICER并分析研究策略的經(jīng)濟性。在一維和多維敏感性分析的基礎上，進一步完成抗病毒治療策略可支付線和成本效果可支付曲線，對該策略的可負擔性作出評價。結果構建的深圳市新生兒乙肝免疫預防決策分析馬爾科夫模型中，決策樹部分包括3個決策分支，概率節(jié)點涵蓋了孕婦HBSAG篩檢率和陽性率、乙肝疫苗和HBIG接種率等；在抗HBS陽轉、易感和圍產期感染結局后連接3類MARKOV模型。模型參數(shù)包括率、成本、效用值和轉歸概率等4大類。CBA表明，從醫(yī)療衛(wèi)生和全社會角度看，乙肝母嬰阻斷策略的BCR分別為1626和1437，高于乙肝疫苗普種策略（BCR為1342和1207）；用深圳市2013年出生人口計算，社會資源的投入和產出分別為170億元和2437億元，NPV為2267億元。CEA顯示，從支付者、醫(yī)療衛(wèi)生和全社會三個角度看，與乙肝疫苗普種策略相比，乙肝母嬰阻斷策略的ICER分別為174746元QALY、5177593元QALY和8510000元QALY，具有明顯的成本效果價值。一維和多維敏感性分析顯示，CBA和CEA的結果穩(wěn)定可靠；乙肝疫苗接種率和乙肝相關疾病費用分別是CBA和CEA的最重要影響因素?？芍Ц缎苑治霰砻?，以2013年為例，深圳市實施乙肝母嬰阻斷策略最多需投入23013萬元，比普種策略多投入9595萬元，結合支付意愿分析，均未超過可負擔能力。深圳市基于社區(qū)人群慢性乙肝抗病毒治療策略的決策分析馬爾科夫模型包括2個決策分支，概率節(jié)點考慮了HBSAG篩檢率和陽性率、就醫(yī)率、HBSAG陽性治療比例、治療依從性和不良反應發(fā)生率。參數(shù)包括HBSAG陽性率及其治療所占比例、治療成本（篩檢和確診費、抗病毒藥物成本、隨訪檢測費和不良反應治療費）、依從性、治療與否的轉歸概率等4類。從支付者和社會角度看，20～59歲人群實施抗病毒治療策略的ICER分別為8700363元QALY和1193874元QALY，均小于深圳市人均GDP，說明該策略具有高成本效果，從全社會角度看更具成本效果意義。20～29歲年齡組ICER最小（分別為6574163和159234元QALY），隨著年齡增加ICER增大，說明低年齡組慢性乙肝治療策略更具成本效果。一維和多維敏感性分析未能改變上述結論，而抗病毒藥物成本和乙肝相關疾病費用是影響策略經(jīng)濟效果的關鍵參數(shù)。模擬10萬社區(qū)人群中開展慢性乙肝抗病毒治療，需要投入的總預算高達752億元。結論1深圳市施行的乙肝母嬰阻斷策略可獲得較高的效益成本比（14371），與乙肝疫苗普種策略（12071）相比，公共資源投入的效益明顯。2深圳市施行的乙肝母嬰阻斷策略，可以進一步降低乙肝相關疾病的發(fā)生，增加壽命年；與新生兒乙肝疫苗普種策略相比，雖然每多獲得一個效果需增加投入，但具有較高的成本效果價值。3經(jīng)濟學評價模型中參數(shù)的變化沒有改變決策分析的基本結果，結論可靠；乙肝疫苗接種率和乙肝相關疾病費用分別是乙肝母嬰阻斷策略CBA和CEA的最重要影響因素。4深圳市用于乙肝母嬰阻斷的年總投入水平和接種者的支付意愿均未超過可負擔能力，該策略可支付性良好。5在深圳市20～59歲社區(qū)人群中開展慢性乙肝抗病毒治療的經(jīng)濟學價值隨年齡增長而降低，但均具有成本效果意義。6與社區(qū)人群慢性乙肝抗病毒治療相適應的年總投入水平和患者的支付意愿均較高，是一項高成本的策略；抗病毒治療藥物成本是最主要的影響因素。7成本效益分析側重方案優(yōu)化，成本效果分析側重方案評估，兩者結合可使經(jīng)濟學評價更加豐富；將可支付線應用于成本效果分析，能夠為研究策略的實施提供預算信息。

簡介：分類號R72單位代碼10343學號131002116溫小1J嚼科大誓WENZHOUMEDLCALUNIVERSLTY碩士學位論文論文題目顯趔絲區(qū)』L童逋蹙痘壹塾王哩暖道蹙染三魚魚倒遵筮痘堂屋隆鏖鱉點盆板研究生姓名鐘佩佩學科專業(yè)兒科學呼吸類型專業(yè)型指導教師李昌崇張海鄰二。一六年五月溫州醫(yī)科大學碩士學位論文一、論文目錄縮略詞表3中文摘要4英文摘要6前言9材料與方法10結果11分析與討論18結論22今后研究方向22參考文獻23附勇乏26致謝27二、綜述綜述28參考文獻34獨創(chuàng)性聲明382

簡介：目的對深圳地區(qū)諾如病毒感染進行分子流行病學研究。對水和牡蠣中諾如病毒進行檢測，進行暴發(fā)的溯源研究。并利用暴發(fā)研究諾如病毒感染與宿主受體組織血型抗原相互作用，預測諾如病毒的流行強度。方法收集深圳地區(qū)20052016年腹瀉糞便樣本9580份，用GⅠ和GⅡ型諾如病毒REALTIMERTPCR、RTPCR方法以及杯狀病毒核酸三重RTPCR進行檢測通過測定基因序列，對諾如病毒進行基因進化分析和基因分型。建立簡易的吸附洗脫法對水體的諾如病毒進行濃縮，還建立了牡蠣中諾如病毒的濃縮方法。另外，對諾如病毒暴發(fā)進行組織血型抗原表型分析和HBGAS結合區(qū)分析。結果1深圳地區(qū)散發(fā)NOV的檢出率在12242537％之間。病毒基本呈隔年增高的趨勢，每年的78月份達到最高峰。各年齡段NOV檢出率在12582132％。6月齡至3歲的兒童和20歲以上的成人是高危人群。2139起腹瀉暴發(fā)疫情中有122起是由諾如病毒引起。諾如病毒性腹瀉全年均可暴發(fā)，冬春季是諾如病毒暴發(fā)的高峰。深圳諾如病毒暴發(fā)主要集中在南山區(qū)，以幼兒園、學校及社區(qū)為主要場所。3在四起水源性腹瀉暴發(fā)疫情的病人糞便中和可疑水樣中均檢出諾如病毒，NOVGⅡ4DEN_HAAG_2006B和NOVGⅡ3各兩起，分別由于諾如病毒污染飲用水源、地下蓄水池、山泉水和二次供水所致。還四次從牡蠣中檢測出諾如病毒。4四株諾如病毒全基因組序列同源性為868％991％，氨基酸序列的同源性為946992％，發(fā)現(xiàn)SZ2012054毒株三個位點發(fā)生有義突變。通過SIMPLOT重組分析，發(fā)現(xiàn)SZ2012054、SZ2012049與SZ2010422株在F1F2重疊區(qū)發(fā)生重組。935株散發(fā)諾如病毒核苷酸序列同源性及系統(tǒng)進化分析表明，NOVGⅠ毒株間的同源性為621％1000％，NOVGⅡ為674％1000％。43株諾如病毒屬于GⅠ，包括GⅠ16、GⅠ8，共7種基因型892株諾如病毒屬于GⅡ，分別為GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DEN_HAGG_2006B、GⅡ4HUNTER_2004、GⅡ4ASIA_2003、GⅡ4NEW_LEANS_2009、GⅡ3、GⅡ2、GⅡ5～7、GⅡ12～14、GⅡ17和GⅡ21，共15種基因型，還有部分GⅡ4不能進一步分型。5在諾如病毒暴發(fā)疫情中，GⅠ3、GⅠ6所致的疫情各兩起，NOVGⅡ所致的疫情118起，包括10個基因亞型，分別是GⅡ13、6、8、17、21GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DENHAAG_2006B、GⅡ4ASIA2003，另有28起GⅡ疫情未能定型。2012年7月首次在散發(fā)病例中發(fā)現(xiàn)NOVGⅡ4SYDNEY_2012株，并對暴發(fā)疫情進行了預警預測。深圳地區(qū)的NOV散發(fā)和暴發(fā)的優(yōu)勢株均為GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DEN_HAGG_2006B、GⅡ3。6對兩起諾如病毒腹瀉暴發(fā)研究發(fā)現(xiàn)，分泌型個體對諾如病毒是易感的，且能與非分泌型唾液和抗原結合。結論諾如病毒是深圳地區(qū)腹瀉散發(fā)和暴發(fā)疫情的重要病原，深圳地區(qū)每年都有一個流行的優(yōu)勢株和次優(yōu)勢株，當新毒株的出現(xiàn)后逐步取代以往的流行株而成為新的流行株，20052016深圳地區(qū)優(yōu)勢株為GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DEN_HAGG_2006B、GⅡ3。散發(fā)病例中諾如病毒有22種基因型，暴發(fā)疫情有12種基因型，部分諾如病毒不能分型。還開展溯源研究，從四起疫情的水樣和四批次的牡蠣中檢測到諾如病毒。通過研究諾如病毒感染與宿主受體組織血型抗原相互作用，發(fā)現(xiàn)分泌型和非分泌型個體對GⅡ4和GⅡ3型諾如病毒都易感，GⅡ4可能和CAIRO1有相似的HBGA受體。

簡介：科大學CAIUNIVERSITY學號201420S48碩士學位論文CASK過表達慢病毒載體的構建及其對H1299細胞生物學功能特性的影響覃覓導師姓名周華富專業(yè)名稱外科學申請學位類型學術型學位答辯委員會主席林輝答辯委員會委員曾建業(yè)鄭寶石郭建極馮旭二O一七年五月基本情況姓名覃覓民族土家族籍貫湖北宜昌學習工作經(jīng)歷起止時間20089201362014920176個人簡歷所在院校或單位三峽大學廣西醫(yī)科大學研究生期間科研經(jīng)歷／臨床工作經(jīng)歷項目起止時間性別男出生年月19901政治面貌共青團員學歷學位學士學位碩士學位職稱無無項目名稱項目來源熏皇荔差覃翥萎蒜舅黯肺癌桂科攻標志物及早期診斷方案的研究～“臨床工作時間工作單位廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院職稱實習醫(yī)師

簡介：目的社區(qū)獲得性肺炎（CAP）是常見的呼吸道感染性疾病，給人類社會帶來了沉重的健康和經(jīng)濟負擔。人冠狀病毒（HUMANCONAVIRUSE，HCOV）尤其是SARS冠狀病毒（SARSCOV）和中東呼吸綜合征冠狀病毒（DLEEASTRESPIRATYSYNDROMECONAVIRUSE，MERSCOV）的出現(xiàn)給人類健康帶來了嚴重的危害。不同地區(qū)CAP病原學各有其特點，因此了解一地區(qū)CAP病原學分布對指導治療意義重大。因此本研究致力于明確我國華中地區(qū)成人CAP住院病人的病原學分布特點和HCOV的流行病學特征，為CAP經(jīng)驗性抗菌治療提供依據(jù)，同時為提升我國新生冠狀病毒相關新發(fā)突發(fā)呼吸道傳染病應急處理能力提供理論支撐。方法選取2014年5月至2015年1月華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院呼吸內科成人社區(qū)獲得性肺炎住院患者，采集入選病例的相關臨床資料，包括性別、年齡、身高、體重、職業(yè)、臨床癥狀體征、基礎疾病、影像學表現(xiàn)、實驗室數(shù)據(jù)、病原學資料、抗生素使用情況、住院時間、治療效果等，收集合格痰標本，運用PCR方法進行常見呼吸道感染性病原菌及人冠狀病毒的核酸檢測。對收集的臨床資料及檢測結果進行統(tǒng)計性分析。結果調查共納入CAP患者78例，其中男性731％（5778）、女性269（2178），男女比例為2711。年齡范圍為18～85歲，平均年齡5519±1601歲，主要集中在40歲以上的中老年患者（821）。痰培養(yǎng)陽性率3768（2669），共檢出34株病原菌，以銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌和念珠菌為主。痰液病原體核酸檢測陽性率8077，明顯高于痰培養(yǎng)結果，以肺炎克雷伯桿菌、巨細胞病毒和甲型流感病毒為主，混合感染占4872（3878）。人冠狀病毒HCOVNL63、HCOV229E和HCOVOC43的檢出率分別為513、256和128，未檢出HCOVHKU1。結論我國華中地區(qū)成人CAP住院患者以40歲以上中老年為主，病原體以革蘭陰性桿菌為主，因此在對CAP患者進行抗感染治療時應充分考慮以上特點。采用PCR方法可以提高病原體陽性率，但仍需繼續(xù)設法提高檢驗水平，還需根據(jù)患者實際情況綜合判斷可能致病菌。研究中檢出了人冠狀病毒HCOVOC43、HCOV229E和HCOVNL63，未檢出HCOVHKU1，它們在CAP患者發(fā)病中所起的作用還不清楚，需要進一步研究。

簡介：背景巨細胞病毒（CYTOMEGALOVIRUSCMV）屬于皰疹病毒Β亞科組的DNA病毒，病毒初次感染人體后，由于其較低的毒力及病毒特性可逃避宿主免疫監(jiān)視，病毒可在體內長期存在。多數(shù)人群在兒童時期感染CMV，病毒持久性存在于體內是基于多種病毒與宿主之間的復雜的免疫關系決定，這種“低毒力”病毒和免疫功能正常宿主之間保持相對平衡，不會導致特異性臨床表現(xiàn)。在某些特殊人群中，比如孕婦，感染CMV可有潛在嬰兒致畸風險；先天性CMV感染可導致患兒耳聾、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙。在免疫缺陷患者中，比如腫瘤、AIDS、移植患者，CMV可成為重要病原體，除直接病毒復制導致非特異臨床表現(xiàn)，組織損傷之外，免疫缺陷患者體內病毒激活可導致繼發(fā)性細菌或真菌感染。男男性行為者（MENWHOHAVESEXWITHMENMSM）人群HCMV感染率達到95％，流行病學調查顯示MSM是HIV易感人群，HIV感染者最終50會出現(xiàn)CMV感染的各種疾病。目前我國無針對MSM人群HCMV感染的流行病學調查，鑒于本地區(qū)MSM人群HIV感染率較高，因此，本研究對重慶市MSM人群開展HCMV感染流行病學調查，了解該地區(qū)男同性戀巨細胞病毒感染情況。目的調查重慶地區(qū)男男性行為者MENWHOHAVESEXWITHMEN，MSM人巨細胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV）感染現(xiàn)狀。方法1、研究對象選擇采用非概率抽樣法，對907例MSM（來源為2012年2014年重慶地區(qū)進行臨床藥物實驗預防艾滋病感染的MSM人群）和170例健康成人血清（同期健康體檢的成年男性）。2、采用ELISA方法檢測HCMV的IGG、IGM抗體。3、統(tǒng)計分析采用統(tǒng)計學分析軟件SPSS170進行統(tǒng)計分析。各組間率的比較采用行X列Χ2檢驗，當1＜T＜5且N＞40時采用校正四格表Χ2檢驗，當T＜1或N≤4O時采用FISHER的精確檢驗，以P＜005為差異有統(tǒng)計學意義。結果1、907例MSM中HIV130例，HIV777例130例HIVMSM中HCMV既往感染率為9846，感染后再活化率為625；777例HIV（）MSM中HCMV既往感染率為9678，感染后再活化率為505170例健康對照組既往感染率9294，感染后再活化率127。2、HIV（）MSM的HCMV既往感染率及感染后再活化率雖然高于HIV對照組，但兩者比較差別無統(tǒng)計學意義Χ2＝0583P＞005；Χ2＝0369P＞005。3、MSM的HCMV既往感染率及感染后再活化率明顯高于健康成人，且兩者比較差別有統(tǒng)計學意義（Χ2＝6835P＜005；Χ2＝4227P＜005）。結論1、重慶地區(qū)MSM人群的HCMV既往感染率及感染后再活化率明顯高于健康成人，提示MSM人群面臨HCMV感染威脅較嚴重。2、MSM人群中HIV（）病毒攜帶者血清既往感染率及感染后再活化率雖然高于HIV（）對照組，但兩者比較差別無統(tǒng)計學意義。3、本研究再次證實中國成人HCMV感染率很高。

簡介：背景流行性感冒病毒共分為甲、乙、丙、丁型，其中季節(jié)性H3N2亞型流感在人群中普遍流行。HA蛋白和NA蛋白是H3N2流感病毒表面主要的兩種抗原，經(jīng)常頻繁地發(fā)生變異，對發(fā)生流感感染和造成流行具有重要意義，其中HA蛋白的遺傳變異進化發(fā)生得最頻繁。HA蛋白的抗原位點、受體結合部位及關鍵的糖基化位點如果發(fā)生氨基酸替換，病毒的致病性和感染的宿主種類就會相應發(fā)生改變。NA蛋白又作為藥物治療的重要靶點，酶活性中心的關鍵位點發(fā)生變異會導致耐藥性。因此研究H3N2亞型流感病毒的HA基因和NA基因在流感流行中的基因進化規(guī)律和分子變異特點具有重要意義。目的了解2014年4月至2015年3月山東省流感病毒病原學監(jiān)測的描述性流行病學分布情況，以及在H3N2亞型流感病毒的流行過程中HA基因和NA基因的分子流行病學分布特點，為預測流感發(fā)展趨勢及預防控制流行提供基礎理論依據(jù)。方法本研究首先對山東省流感監(jiān)測數(shù)據(jù)庫進行流感病毒病原學監(jiān)測情況的基本描述，然后選擇山東省疾病預防控制中心流感實驗室于2014年4月至2015年3月期間分離保存的H3N2亞型流感毒株102株，并對其進行復蘇，最后共95株H3N2亞型流感病毒毒株進行RTPCR擴增和基因測序。利用DNASTAR軟件的EDITSEQ模塊編輯序列及MEGALIGN模塊分析同源性多序列比對采用MOLECULAREVOLUTIONARYGEICSANALYSIS50MEGA50軟件的CLUSTALW程序系統(tǒng)發(fā)生樹的構建使用MEGA50軟件NEIGHBJOININGNJ法。結果1山東省于2014年4月至2015年3月共收集了21276份流感樣病例鼻咽拭子標本，描述分析發(fā)現(xiàn)2014年10月至2015年3月為流感流行高峰期，感染人群主要為0～15歲人群，以5歲以下比例最高共分離出2371株流感病毒細胞株，其中AH3N2流感病毒占比例最高（1665株），并且2014年11至2015年1月是H3N2亞型流感的流行高峰期。2山東省所分離的H3N2亞型流感病毒的HA和NA基因序列的同源性分析結果分別為980～100％和977～100％。HA基因系統(tǒng)發(fā)生樹分析顯示，大多數(shù)山東省分離的H3N2流感病毒的HA基因聚集成一簇，與ASWITZERL97152932013H3N2的親緣關系最近，與ATEXAS502012H3N2的親緣關系較遠。NA基因系統(tǒng)發(fā)生樹分析提示，大多數(shù)山東省分離的H3N2流感病毒NA基因聚集分布在一個大分支，與ASWITZERL97152932013H3N2的遺傳距離最短，與ATEXAS502012H3N2的遺傳距離最長，均未發(fā)現(xiàn)明顯的地域和時間特征。3HA蛋白共52個位點發(fā)生氨基酸替換，其中抗原決定簇（HA1蛋白）位點發(fā)生了17個，裂解位點序列并沒有發(fā)生變異，丟失糖基化位點NES134136和NSS156158，同時新增糖基化位點NYT170172。NA蛋白有51個位點發(fā)生氨基酸替換，酶活性中心位點118DN、371VI發(fā)生變異，催化位點156VI、425TN發(fā)生變異，5個抗原位點發(fā)生變異，丟失糖基化位點NWS7779和NDS320322，同時新增糖基化位點NIT8486和NAS236238。結論12014年4月至2015年3月山東省流感病毒流行的優(yōu)勢毒株是H3N2亞型流感病毒，其流行高峰時間為冬春季（2014年11月、2014年12月、2015年1月）。22014年4月至2015年3月山東省分離的H3N2亞型流感流行株的HA基因和NA基因的同源性較高，但與當年疫苗株的遺傳距離稍遠，與下一年的疫苗株遺傳距離較近HA蛋白和NA蛋白均有部分抗原決定位點出現(xiàn)氨基酸替換現(xiàn)象，HA基因普遍可能發(fā)生了抗原性漂移，WHO推薦的2014～2015年疫苗株對H3N2亞型流感病毒保護效果可能較差，而2015～2016年的疫苗株可能對其具有一定保護效果。3部分H3N2亞型分離毒株的HA基因和NA基因的糖基化位點也發(fā)生了變異，不同功能的基因片段發(fā)生糖基化位點的變異可能產生不同的影響。4所有毒株的NA蛋白的酶活性中心的NA抑制劑抑制位點未發(fā)現(xiàn)變異，所以推測病毒均對奧司他韋敏感。

簡介：背景兒童社區(qū)獲得性肺炎CAP已經(jīng)逐漸成為導致全世界5歲以下兒童死亡的第一位病因。全球每年死于肺炎的患兒統(tǒng)計數(shù)據(jù)大約是200萬，這占到全球范圍內兒童死亡總數(shù)的20％。病毒感染是小兒CAP區(qū)別于成人的重要特征。其中以呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUSRSV占首位1，其他病毒如腺病毒ADENOVIRUS，ADV、流感病毒INFLUENZAVIRUS，IFV、人類偏肺病毒HUMANMETAPNEUMONIAEVIRUS，HMPV副流感病毒（PARAINFLUENZAVIRUS，PIV）等。就中醫(yī)病名而言，兒童CAP可劃為“肺炎喘嗽”，風寒郁肺證常作為小兒病毒性肺炎起初的重要證候，如何全面地、科學地闡述這一中醫(yī)證候內涵與本質，成為現(xiàn)代中醫(yī)學需解決的迫切問題。據(jù)相應的研究顯示，兒童病毒性肺炎的治療上，缺乏完全有效、安全的理想化合藥物，病毒唑RIBAVIRIN是唯一被美國兒科協(xié)會AAP謹慎推薦的“也許能夠使用”的合成核苷類抗病毒藥物。相較于此，中醫(yī)藥在治療小兒病毒性肺炎上顯示出明顯優(yōu)勢，且已經(jīng)為大量臨床和實驗研究所證實。代謝組學METABOLOMICS作為系統(tǒng)生物學的重要組成部分，是聚焦于生物體內源性代謝物性質、數(shù)量、種類及其整體變化規(guī)律的一門嶄新學科2。代謝組學可以有效避免既往蛋白組學或基因組學單獨采用一種或幾種指標，或者一條或幾條基因阻斷后的通路表達就預測或推斷生理狀態(tài)或病理情況的“真實世界”，同時卻可以及時地、有效地、客觀靈敏地映射生物體受外界擾動后機體內基因、蛋白、細胞或組織的“生化表型”，以整體衡量取代單一檢測，這十分契合中醫(yī)基礎理論的“整體觀、恒動觀”，是一種以“航拍視覺”替換單一“叢林搜索”的角度?；诖朔N宏觀認識，本課題采用代謝組學方法，結合患兒生命體征，血、尿常規(guī)，肝、腎功能等生化檢測，整體出發(fā)探討病毒性肺炎風寒郁肺證WC所導致的代謝差異的意義，試圖從小分子代謝角度解釋小兒病毒性肺炎風寒郁肺證的證候內涵。目的整體角度探討小兒病毒性肺炎風寒郁肺證患兒的血清和尿液的內源性差異代謝特征，闡釋小兒病毒性肺炎風寒郁肺證的差異代謝證候實質。方法小兒病毒性肺炎風寒郁肺證組學技術的臨床實驗挑選可以納入中西醫(yī)診斷標準的病毒性肺炎屬于風寒郁肺證型的患兒30例，設為風寒組WC，同時設立體檢時的正常健康兒童30例NH。分別在入院第二天收集兩組兒童的血清和尿液，采用氣相色譜質譜聯(lián)用儀GASCHROMATOGRAPHYMASSSPECTROMETRY，GCMS同時分析獲取WC組和NH組血清、尿液中的差異內源性代謝物，基于數(shù)據(jù)庫成立小兒病毒性肺炎風寒郁肺證的證候相關代謝集群，通過在線分析平臺XCMSONLINE預處理、NIST數(shù)據(jù)庫和已有標準品進行驗證、METABOANALYST確定差異性代謝物及代謝路徑，解釋所涉及的相關通路，揭示小兒病毒性肺炎風寒郁肺證的差異代謝特點和本質。結果1血清代謝組學模式識別分析結果顯示，風寒郁肺證與健康兒童組間能夠良好區(qū)分，眾多有機酸、氨基酸、脂類等差異性代謝物及代謝通路被確定。與健康兒童相比，風寒郁肺證患兒血清中丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、牛磺酸、賴氨酸等多種有機酸、氨基酸上調氨基丁酸、乙醇酸、甘油、1棕櫚酸單甘油酯、膽固醇、葡萄糖等下調。2尿液代謝組學模式識別分析結果顯示，風寒郁肺證與健康兒童組間雖有一定分離趨勢，但仍存在交叉重疊，進一步建模OPLSDA，兩組完全分離，說明代謝物存在差異。尿液代謝中甘氨酸、絲氨酸、色氨酸、Β羥基丁酸、葡萄糖酸、D半乳糖、肌苷、尿苷等物質上調羥基乙酸、硬脂酸、棕櫚酸等下調。結論1GCMS代謝組學技術平臺能夠良好區(qū)分和初步解答小兒病毒性肺炎風寒郁肺證WC與正常健康兒NH之間的差異代謝。2病毒性肺炎WC證患兒的血清和尿液代謝中主要以丙氨酸、甘氨酸、?；撬岽x、花生四烯酸、棕櫚酸代謝等代謝紊亂為標志。

簡介：原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含獲得廣西醫(yī)科大學或其他教育機構的學位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即在校期間論文的知識產權屬廣西醫(yī)科大學。學校有權保存論文的電子和紙質文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本論文的部分或全部內容，可以采用影印、復印或其他手段保存、匯編本論文，學?？梢韵驀矣嘘P機關或機構送交論文的電子和紙質文檔，允許論文被查閱和借閱。同意廣西醫(yī)科大學可以用不同的方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或者部分內容。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。學位論文作者簽名逢腳蝴期≯，步。如刁日目錄反轉錄病毒介導的過表達M濃21對肝癌細胞干樣生物學特性的影響摘要1ABSTRACT4▲』L刖舌8第一部分反轉錄病毒介導的過表達IILIR21穩(wěn)定細胞株的構建111材料與儀器112實驗方法153結果364討論425結論45參考文獻46第二部分過表達血R21對肝癌細胞干樣生物學特性的影響501材料與儀器502方法533結果624討論685結論72參考文獻73全文小結771結論772創(chuàng)新之處77

簡介：諾如病毒NOVIRUS，NV是引起非細菌性急性胃腸炎的主要病原體之一，近年來由諾如病毒引起的疫情暴發(fā)與流行逐漸增多，日益成為重要的公共衛(wèi)生問題。由于諾如病毒尚不能體外培養(yǎng)，且極易發(fā)生變異，傳統(tǒng)的血清學及免疫學檢測方法存在很大局限性，目前以PCR為核心的分子生物學檢測方法成為檢測諾如病毒的主要研究方向。本研究通過建立常規(guī)RTPCR與熒光定量RTPCR檢測方法，對水體樣品的前處理進行研究，并運用建立的方法對采集于江蘇部分地區(qū)的臨床、牡蠣和水體樣品進行檢測與評價，為進一步完善諾如病毒的檢測提供依據(jù)。同時了解江蘇部分地區(qū)諾如病毒的污染狀況，分析其分子流行病學特征，為諾如病毒的風險評估及分子流行病學調查提供基礎數(shù)據(jù)。一、諾如病毒常規(guī)RTPCR與熒光定量RTPCR檢測方法的建立及比較針對諾如病毒衣殼蛋白保守區(qū)及F1F2連接處的基因序列設計引物、探針，優(yōu)化反應體系，建立常規(guī)RTPCR和熒光定量RTPCR檢測方法。運用建立的方法對其他腸道病毒進行檢測，均無交叉反應，表明該兩種方法具有良好的特異性不同拷貝數(shù)的諾如病毒檢測結果顯示常規(guī)RTPCR檢測限為103COPIESΜL，熒光定量RTPCR檢測限為102COPIESΜL。對不同稀釋梯度含有GⅠ型、GⅡ型諾如病毒目的基因的標準重組質粒進行熒光定量RTPCR反應，結果GⅠ型標準質粒在102～108COPIESΜL范圍內有良好的線性關系，標準曲線為Y405853301LGX，相關系數(shù)R2達到0997，擴增效率E仃為100889％GⅡ型標準質粒在101～108COPIESΜL范圍內有良好的線性關系，標準曲線為Y406663229LGX，R2達到0996，EFF為104039％批內變異系數(shù)在018％～057％之間，批間變異系數(shù)在071％～262％之間，表明熒光定量RTPCR具有良好的重復性。運用建立的常規(guī)RTPCR和熒光定量RTPCR方法對22份臨床樣品進行同步檢測，并與南通市疾病預防控制中心的檢測結果相比對，常規(guī)RTPCR敏感度、特異度分別為7143％、100％，符合率達到9091％熒光定量RTPCR檢測結果與南通市疾病預防控制中心完全一致。運用建立的兩種方法進一步對180份臨床樣品進行檢測，其中常規(guī)RTPCR陽性率為556％，符合率達9722％熒光定量RTPCR陽性率為833％，符合率達100％統(tǒng)計分析兩種方法的檢測率有顯著性差異P＜005，并對陽性樣品測序，結果證實均為諾如病毒。二、水中諾如病毒富集方法的建立及優(yōu)化采用國內常見的混合纖維素酯濾膜，對人為污染諾如病毒的水樣進行病毒富集，優(yōu)化濾膜的吸附與洗脫過程，建立水體病毒富集方法。在吸附過程中對水樣PH值、多價陽離子及離子濃度進行優(yōu)化，隨后在洗脫過程中優(yōu)化洗脫液及其PH值和濃度。研究結果顯示，在吸附水體病毒過程中，當水樣PH值為35時，病毒平均吸附率為2896％，吸附效果優(yōu)于其它PH值向水樣加入NA、MG2、AL3，三種離子的平均吸附率分別4842％、2896％、1828％，NA吸附效果優(yōu)于MG2和AL3當水樣中NA濃度為02MOLL時，濾膜吸附效果較好，平均吸附率高達7215％，優(yōu)于NA其它濃度。在洗脫濾膜過程中，1％NAPPPB甘氨酸05％吐溫80洗脫液較好，平均洗脫率為10785％，優(yōu)于其它洗脫液當NAPP的濃度為05％時，平均洗脫率高達11994％，優(yōu)于其它濃度的洗脫液洗脫液的PH值為85、95、105、115時，平均洗脫率分別為2943％、11354％、13490％、10452％，表明當洗脫液的PH值為105時，其洗脫效果優(yōu)于其它PH值。運用建立的混合纖維素酯膜吸附洗脫法對人為污染100～103COPIESΜL諾如病毒液的待濾水進行富集，通過熒光定量RTPCR檢測，發(fā)現(xiàn)10～103COPIESΜL諾如病毒的待濾水經(jīng)富集后，均可檢出諾如病毒，未經(jīng)富集的待濾水均未檢出諾如病毒，表明該水樣富集方法的靈敏度為待濾水中病毒量達10COPIESΜL。三、江蘇部分地區(qū)諾如病毒分子流行病學分析在2014年1月～2014年12月間采集揚州、南通兩地區(qū)腹瀉病人的臨床樣品648份，揚州市翠園橋海鮮農貿市場、歐尚超市的牡蠣樣品136份以及市區(qū)二道河、安敦河和寶帶河中水體樣品60份，用熒光定量RTPCR方法對上述樣品進行諾如病毒檢測。結果顯示648份臨床樣品中，共檢測出85份陽性樣品，陽性率為1312％。其中，揚州地區(qū)陽性率為1913％57298，南通地區(qū)陽性率為8％28350，揚州地區(qū)諾如病毒的感染率顯著高于南通地區(qū)P＜00514歲以下兒童感染率為1804％57316，14歲以上患者感染率為806％22273，14歲以下兒童的感染率顯著高于其它人群P＜005男性感染率為1301％38292，女性感染率為1230％38309，男、女感染率差異不顯著P＞005。136份牡蠣樣品中，檢測出9份陽性樣品，陽性率662％。其中翠園橋海鮮農貿市場陽性率為764％567歐尚超市陽性率為580％469，統(tǒng)計分析揚州市兩個海鮮銷售市場諾如病毒感染率無顯著差異P＞005。60份水體樣品中，檢測出13份陽性樣品，陽性率為2167％。其中二道河水樣陽性率為10％220，安敦河水樣陽性率為20％420，寶帶河水樣陽性率為35％720，統(tǒng)計分析揚州市區(qū)三道河流諾如病毒污染率無顯著差異P＞005?；谥Z如病毒衣殼蛋白保守區(qū)的基因序列，應用MEGA50軟件對43份陽性臨床樣品和1份陽性水體樣品中諾如病毒進行基因分型，檢出GⅠ型諾如病毒2份，包括GⅠ2、GⅠ6亞型GⅡ型諾如病毒42份，包括GⅡ4、GⅡ6、GⅡ8、GⅡ17四種基因亞型。其中GⅡ4亞型有32份，占所有基因型別的7273％，并與世界流行株GⅡ42006VARIANT和GⅡ42010在同一分支上，同源性為97％。1份陽性水體樣品中諾如病毒與臨床樣品中的GⅡ4亞型同源性高達100％，說明人類諾如病毒感染與水源可能有著密切關系。同時發(fā)現(xiàn)1份GⅠ2GⅡ8間混合感染的臨床樣品，為我國首次發(fā)現(xiàn)該兩種亞型間的混合感染。