簡(jiǎn)介：舢帥咖ⅢⅧ川洲0㈣Ⅲ川刪Y3333307學(xué)校代碼LQ2墨§分類號(hào)B223密級(jí)公玨UDC蠡§QQ量學(xué)號(hào)12坌51互隸．初大◆誓博士學(xué)位論文重組慢病毒介導(dǎo)的MCM7基因沉默對(duì)白血病及肝癌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的影響研究生姓名一旦亮一．導(dǎo)師姓名陵寶寶申請(qǐng)學(xué)位類別醫(yī)堂墟±一級(jí)學(xué)科名稱直瘞醫(yī)堂二級(jí)學(xué)科名稱囪型堂答辯委員會(huì)主席魅釜生學(xué)位授予單位丕直太堂論文答辯日期2Q3Z生§目】Z目學(xué)位授予日期評(píng)閱人2017年5月20日EFFECTSOFLENTIVIRUSMEDIATEDKNOCKDOWNOFMCM7GENEONHUMANIEUKEMIACEILSANDHEPATOCE¨ULARCARCINOMACEIISADISSERTATIONSUBMITTEDTOSOULHEASTUNIVERSITYBYTIANLIANGSUPEⅣISEDBYCHENBA0一ANSCH00IOFMEDICAISCIENCESOUTHEASTUNIVERSITYMAY2017

簡(jiǎn)介：狂犬?。≧ABIES）是由狂犬病病毒（RABIESVIRUS，RV）引起的一種人獸共患病。人和大多數(shù)溫血?jiǎng)游镆赘?，臨床上以怕光，精神沉郁，進(jìn)行性麻痹和最終死亡為主要特征，致死率幾乎100％。RV有N、P、M、G和L共5種結(jié)構(gòu)蛋白，其中，G蛋白是決定RV致病性的關(guān)鍵蛋白。許多研究表明G蛋白某些氨基酸位點(diǎn)的突變會(huì)改變RV的致病性以及病毒的一些生物學(xué)屬性，如胞間擴(kuò)散，膜融合，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等。而RV其它蛋白對(duì)其致病性是否有影響卻知之甚少。2006年，SHIMIZUK等人利用反向遺傳學(xué)技術(shù)把NICE（由固定毒株NISHIGAHARA在雞胚成纖維細(xì)胞中連續(xù)傳100代后獲得的，對(duì)成年小鼠無(wú)致病性）M蛋白基因替換成NISHIGAHARA株（固定毒株，腦內(nèi)接種可致死成年小鼠）M蛋白基因后，重組病毒CE（NIM）重新獲得了致病力，腦內(nèi)接種可致死成年小鼠。此結(jié)果為人們對(duì)RV致病機(jī)制的深入研究打開(kāi)了新的篇章。因此，從多個(gè)角度進(jìn)一步探討M蛋白對(duì)RV致病性的影響對(duì)于明確RV的致病機(jī)制和有效防控狂犬病具有重要意義。本研究以探討單獨(dú)的M蛋白接種對(duì)RV致病性的影響為目的，進(jìn)行了如下試驗(yàn)1表達(dá)狂犬病病毒M蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建和鑒定。試驗(yàn)內(nèi)容①以RTPCR技術(shù)擴(kuò)增狂犬病病毒BD06株M蛋白基因；②將M蛋白基因序列插入桿狀病毒載體質(zhì)粒PFASTBACI中，構(gòu)建重組質(zhì)粒PFASTBACIM；③用鑒定正確的重組質(zhì)粒PFASTBACIM轉(zhuǎn)化DH10BACECOLI感受態(tài)菌，構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒BACM，并以PCR法鑒定；④以脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000介導(dǎo)重組穿梭質(zhì)粒BACM轉(zhuǎn)染SF9昆蟲細(xì)胞，獲取重組桿狀病毒ACMNPVM，取細(xì)胞病變上清，以電鏡觀察重組病毒形態(tài)；⑤用小鼠抗HIS標(biāo)簽單克隆抗體、兔抗RV陽(yáng)性血清和犬抗RV陽(yáng)性血清通過(guò)WESTERNBLOT方法鑒定重組M蛋白的表達(dá)及其反應(yīng)原性。2重組M蛋白的純化及多克隆抗體的制備。試驗(yàn)內(nèi)容①利用鎳離子親和層析柱純化重組M蛋白；②用純化的重組M蛋白免疫大耳白兔，每次免疫后1周，耳緣靜脈采血并分離血清；③通過(guò)WESTERNBLOT試驗(yàn)分析兔抗M蛋白多克隆抗體同狂犬病病毒AG株、PV2061株、SRV9株、CVS11株、ERA株和BD06株M蛋白之間是否存在交叉反應(yīng)；④以FAVN試驗(yàn)測(cè)定兔抗M蛋白多克隆抗體是否具有病毒中和活性。3M蛋白生物學(xué)特性初步研究。以探索接種M蛋白后對(duì)腦內(nèi)與外周攻毒小鼠潛伏期、發(fā)病率的影響為目的。具體試驗(yàn)步驟如下①將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為腦內(nèi)攻毒組和外周攻毒組兩個(gè)大組，兩組中又分別設(shè)立了高劑量攻毒組和低劑量攻毒組；②將純化的M蛋白與等體積油佐劑混合后分別于0D，7D，14D通過(guò)腹腔注射免疫四個(gè)大組中的小鼠，同時(shí)大組內(nèi)設(shè)立透析液組、ACMNPV組作為對(duì)照；③第3次免疫后，于第5天對(duì)小鼠進(jìn)行斷尾采血并分離血清，用WESTERNBLOT試驗(yàn)分析重組M蛋白免疫原性；④第3次免疫后1周，對(duì)兩大組小鼠分別進(jìn)行腦內(nèi)和外周肌肉注射攻毒試驗(yàn)，攻毒后連續(xù)觀察14天，記錄小鼠攻毒后的潛伏期、發(fā)病數(shù)以及死亡數(shù)。通過(guò)以上試驗(yàn)，獲得以下結(jié)果1成功構(gòu)建了重組桿狀病毒ACMNPVM，且該重組病毒電鏡下具有典型的桿狀病毒形態(tài)，其感染SF9昆蟲細(xì)胞后，通過(guò)SDSPAGE試驗(yàn)鑒定，重組桿狀病毒表達(dá)了一約25KD的蛋白，用小鼠抗HIS標(biāo)簽單抗、兔抗RV陽(yáng)性血清和犬抗RV陽(yáng)性血清通過(guò)WESTERNBLOT試驗(yàn)對(duì)其反應(yīng)原性鑒定，在25KD附近也出現(xiàn)了單一的條帶。2變性條件下純化的重組M蛋白SDSPAGE條帶單一，純度良好；透析復(fù)性后，以該純化M蛋白免疫大耳白兔制備的兔抗M蛋白多克隆抗體與現(xiàn)有主要狂犬病疫苗株及流行毒株M蛋白反應(yīng)性能良好，WESTERNBLOT鑒定結(jié)果顯示在25KD左右均出現(xiàn)了一特異性條帶；FAVN試驗(yàn)結(jié)果顯示，兔抗M蛋白多克隆抗體的病毒中和效價(jià)為0。3小鼠攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，單獨(dú)接種M蛋白后，腦內(nèi)接種3LD50或50LD50狂犬病病毒CVS24株時(shí)，不同小組動(dòng)物的潛伏期、發(fā)病和死亡率均無(wú)明顯差異；外周接種100LD50狂犬病病毒BD06株時(shí)，ACMNPVM組的小鼠全部發(fā)病，透析液組和ACMNPV組小鼠死亡率為80（810）；外周接種3LD50狂犬病病毒BD06株時(shí)，ACMNPVM組、透析液組和ACMNPV組的小鼠均無(wú)發(fā)病。通過(guò)以上研究結(jié)果，得出以下結(jié)論1成功構(gòu)建了重組桿狀病毒ACMNPVM，且該重組病毒表達(dá)的M蛋白具有良好的反應(yīng)原性，為后續(xù)研究M蛋白其它生物學(xué)特性奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。2可用鎳離子親和層析法對(duì)桿狀病毒表達(dá)的M蛋白進(jìn)行純化；重組M蛋白免疫原性良好；制備的兔抗M蛋白多克隆抗體與現(xiàn)有狂犬病疫苗株及流行毒株均有良好反應(yīng)性；M蛋白誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗體無(wú)病毒中和活性。3單獨(dú)的M蛋白接種對(duì)不同組別中腦內(nèi)攻毒小鼠的潛伏期、發(fā)病率和死亡率的均無(wú)明顯影響；對(duì)不同劑量外周攻毒的小鼠的潛伏期也無(wú)明顯影響，但有提升小鼠的發(fā)病率的趨勢(shì)。提示單獨(dú)接種M蛋白可能會(huì)影響狂犬病病毒致病性。論文創(chuàng)新點(diǎn)1利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了狂犬病病毒BD06M蛋白，建立了純化方法，制備了抗M蛋白多克隆抗體，為深入研究M蛋白的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。2探索了單獨(dú)的狂犬病病毒M蛋白接種對(duì)狂犬病病毒致病性的影響，為進(jìn)一步明確狂犬病病毒致病機(jī)制提供了基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

簡(jiǎn)介：CLASSIFIEDINDEXCONFIDENTIALYES／NOCODE10224NO1009617DISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREEEPIDEMIOLOGICALINVESTIGATIONOFPORCINEKOBUVIRUSANDGENOMESEQUENCEANALYSISOFCH／王IZ／2011STRAINCANDIDATESHAZHANGSUPERVISORPROFHONGYANCHENDEGREECATEGORYMASTEROFSCIENCECOLLEGENORTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITYFIRSTLEVELDISCIPLINEBIOLOGYSECONDLEVELDISCIPLINEZ00109YHARBINCHINAJUNE2013東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文321病毒RNA提取20322CDNA合成20323PCR21324產(chǎn)物鑒定以及回收23325PCR產(chǎn)物連接與轉(zhuǎn)化24326重組質(zhì)粒提取、鑒定及基因序列測(cè)定24327PKV全基因組序列拼接、分析和序列比對(duì)24328VPL基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析25329參考序列2533結(jié)果25331結(jié)構(gòu)基因及非結(jié)構(gòu)基因的擴(kuò)增與克隆25332CH／HZ／2011基因組結(jié)構(gòu)組成26333CH／HZ／20115’UTR、3’UTR的分子特征27334VPL基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析2734討論3L4結(jié)論32致謝33參考文獻(xiàn)34附錄40攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文41

簡(jiǎn)介：發(fā)熱伴血小板減少綜合征SEVEREFEVERWITHTHROMBOCYTOPENIASYNDROME，SFTS是新發(fā)的一種自然疫源性疾病，2009年首次在中國(guó)被發(fā)現(xiàn)。這種疾病是由一種新發(fā)現(xiàn)的布尼亞病毒引起的。2010年，本人的博士指導(dǎo)教師于學(xué)杰教授將其分離出來(lái)并命名為發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒SEVEREFEVERWITHTHROMBOCYTOPENIASYNDROMEVIRUS，SFTSV，簡(jiǎn)稱為發(fā)熱伴病毒或新布尼亞病毒，其屬于布尼亞病毒科白蛉病毒屬，是一種分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒，基因組包括L、M和S三個(gè)片段。SFTS的病例主要分布于中國(guó)中東部的山區(qū)、丘陵地帶。該病的高發(fā)季節(jié)主要集中在每年的四到九月，但發(fā)病時(shí)間亦存在地域性差異。該病主要發(fā)病人群是50歲以上的農(nóng)民，其病死率約為12％～30％。該病以發(fā)熱、白細(xì)胞減少、血小板降低為主要癥狀，并伴有全身不適、乏力、頭痛、肌肉酸痛以及惡心和嘔吐等臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者出現(xiàn)多器官衰竭致死。病例大部分呈零星的散在分布，也有個(gè)別的聚集性病例。已證實(shí)，SFTSV可以通過(guò)接觸病人血液和分泌物感染，存在人與人間的傳播。發(fā)現(xiàn)至今，關(guān)于SFTS的病原、流行特征、臨床診斷和治療的研究均取得一定進(jìn)展。但SFTSV的傳播循環(huán)模式尚無(wú)明確的定論，目前僅局限于對(duì)流行區(qū)的家畜、嚙齒類動(dòng)物和媒介節(jié)肢動(dòng)物的流行病學(xué)調(diào)查研究。許多的研究報(bào)道，在硬蜱屬的長(zhǎng)角血蜱、微小牛蜱、龜形花蜱中檢測(cè)到SFTSV。因長(zhǎng)角血蜱是中國(guó)的優(yōu)勢(shì)蜱種，推測(cè)長(zhǎng)角血蜱可能是中國(guó)地區(qū)SFTSV的主要傳播媒介和潛在宿主。近年來(lái)，各種新發(fā)和再發(fā)的蜱傳疾病對(duì)公共衛(wèi)生安全以及畜牧業(yè)的健康發(fā)展造成很大威脅。為此，本課題主要研究長(zhǎng)角血蜱在SFTSV傳播循環(huán)模式中的作用，同時(shí)對(duì)蜱攜帶的其它病原微生物如無(wú)形體和埃立克體進(jìn)行檢測(cè)以及蜱傳疾病的人群流行病學(xué)研究，預(yù)測(cè)相關(guān)病原的潛在致病性，為預(yù)防和控制蜱傳疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論指導(dǎo)。目的1蜱作為SFTSV的宿主研究11檢測(cè)草地未吸血長(zhǎng)角血蜱的三個(gè)不同生活周期SFTSV的感染率，分析長(zhǎng)角血蜱在SFTS傳播中的作用。12建立實(shí)驗(yàn)室SFTSV感染動(dòng)物模型，探討SFTSV在長(zhǎng)角血蜱中的傳播循環(huán)模式。2SFTSV的核蛋白NP的原核表達(dá)擬對(duì)SFTSV的核蛋白NP的全序列進(jìn)行原核表達(dá)，獲取高效表達(dá)的重組目的蛋白，用于后續(xù)的健康人群的SFTSV抗體檢測(cè)。3長(zhǎng)角血蜱攜帶無(wú)形體和埃立克體的檢測(cè)檢測(cè)草地上長(zhǎng)角血蜱無(wú)形體和埃立克體的攜帶率，分析無(wú)形體和埃立克體的感染對(duì)公共衛(wèi)生造成的潛在危害。4健康人群蜱傳疾病的流行病學(xué)調(diào)查分析蓬萊市健康人群蜱傳疾病SFTSV、無(wú)形體的抗體水平情況，掌握其抗體動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，以期進(jìn)一步提高對(duì)該類疾病的認(rèn)識(shí)，為疫情控制提供流行病學(xué)依據(jù)。方法120135～20137和20155分別在山東膠南和浙江岱山運(yùn)用布旗法采集野外草地游離未吸血蜱。2運(yùn)用RTPCR和PCR對(duì)草地上長(zhǎng)角血蜱攜帶的病原體進(jìn)行檢測(cè)，擴(kuò)增的陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行克隆轉(zhuǎn)化測(cè)序，并用CLUSTALX21、MEGAALIGN、MEGA60軟件建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)進(jìn)行核苷酸、核苷酸序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析。3運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR監(jiān)測(cè)染毒昆明小鼠一周內(nèi)SFTSV病毒載量的變化趨勢(shì)。4運(yùn)用空斑形成單位法檢測(cè)培養(yǎng)收獲的病毒滴度。5采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA和間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)IFA檢測(cè)染毒昆明小鼠SFTSV抗體水平。6運(yùn)用PCR法擴(kuò)增SFTSVNP基因，并克隆至PET32A載體，構(gòu)建原核表達(dá)載體PET32ANP，經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)化表達(dá)菌BL21DE3，再經(jīng)誘導(dǎo)、純化得到PET32ANP融合蛋白，采用WESTERNBLOT驗(yàn)證融合蛋白PET32ANP的抗原性。7201511～20161在山東省蓬萊市小門家、大柳行、大辛店三個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)六個(gè)行政村運(yùn)用多階段單純隨機(jī)抽樣抽樣方法，采集健康人群血清628份，采用ELISA檢測(cè)健康人群血清中無(wú)形體和SFTSV抗體。結(jié)果1長(zhǎng)角血蜱作為新布尼亞病毒的傳播媒介、宿主的研究結(jié)果11蟀標(biāo)本SFTSV檢測(cè)結(jié)果本課題組在山東膠南草地共采集蜱3300只，其中幼蜱120只，稚蜱1620只，成蜱1560只。經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定和16SRRNA基因分子生物學(xué)鑒定，草地上采集到的蜱標(biāo)本主要是長(zhǎng)角血蜱。本次研究山東膠南草地上長(zhǎng)角血蜱共有8管SFTSV陽(yáng)性，以最小感染率計(jì)算長(zhǎng)角血蜱SFTSV的總感染率為02％，幼蜱、稚蜱、成蜱的SFTSV感染率分別為00120、012％21620，039％61560。這一研究表明未吸血長(zhǎng)角血蜱可以攜帶SFTSV。12不同時(shí)期長(zhǎng)角血蜱叮咬染毒小鼠后，長(zhǎng)角血蜱SFTSV的感染情況正常幼蜱叮咬染毒小鼠，運(yùn)用RTPCR檢測(cè)飽血后長(zhǎng)角血蜱SFTSV的陽(yáng)性率為18％950，蛻皮進(jìn)化成稚蜱SFTSV的陽(yáng)性率為117％14120。正常稚蜱叮咬染毒小鼠，運(yùn)用RTPCR檢測(cè)飽血后長(zhǎng)角血蜱稚蜱SFTSV的陽(yáng)性率為20％210，蛻皮進(jìn)化成成蜱時(shí)SFTSV的陽(yáng)性率為117％14120。13只正常成蜱叮咬染毒小鼠，運(yùn)用RTPCR檢測(cè)飽血后成蜱SFTSV的陽(yáng)性率為462％613，產(chǎn)卵孵化成幼蜱時(shí)SFTSV的陽(yáng)性率為538％713。這一研究，表明蜱能經(jīng)卵和經(jīng)期傳播SFTSV，蜱是SFTSV的自然宿主。13不同時(shí)期染毒長(zhǎng)角血蜱叮咬正常小鼠后，小鼠SFTSV的感染情況染毒稚蜱叮咬正常小鼠后，小鼠SFTSV的感染率為40％410染毒成蜱叮咬正常小鼠，小鼠SFTSV的感染率為20％210，RTPCR結(jié)果與小鼠SFTSV抗體結(jié)果一致。這一研究表明，蜱可以從感染動(dòng)物獲得SFTSV并能傳播SFTSV給動(dòng)物，說(shuō)明蜱是SFTSV的傳播媒介。2草地游離蜱攜帶埃立克體和無(wú)形體檢測(cè)結(jié)果21蜱標(biāo)本埃立克體和無(wú)形體的檢測(cè)結(jié)果浙江岱山草地共采集蜱標(biāo)本780只，其中幼蜱0只，稚蜱630只，成蜱150只。用埃立克體的16SRRNA、GLTA和GROEL基因特異性引物進(jìn)行巢氏PCR檢測(cè)，以最小感染率計(jì)算浙江岱山長(zhǎng)角血蜱埃立克體的感染率為04％3780，3管均為稚蜱。山東的蜱標(biāo)本中未檢測(cè)出埃立克體。DNA序列分析顯示，來(lái)自長(zhǎng)角血蜱中的埃立克體與EHRLICHIA種屬的16SRRNA同源性為983％～998％，與EEWINGII的同源性最高。核苷酸序列同源性分析顯示GROEL和GLTA基因的同源性分別為896％～938％和685％～904％，與EEWINGII是在一個(gè)分支上。隨機(jī)抽取山東膠南蜱標(biāo)本1680只，其中幼蜱120只，稚蜱1200只，成蜱360只。用無(wú)形體16SRRNA基因特異性引物進(jìn)行巢氏PCR檢測(cè)，以最小感染率計(jì)算山東膠南長(zhǎng)角血蜱無(wú)形體的感染率為01831680，其中兩管稚蜱，一管成蜱，無(wú)形體的感染率分別為017％21200和028％1360。浙江岱山的蜱標(biāo)本中未檢測(cè)出無(wú)形體。核苷酸序列同源性分析顯示來(lái)自山東長(zhǎng)角血蜱中的16SRRNA與無(wú)形體種屬的同源性為990％～995％。3蜱傳疾病的人群血清流行病學(xué)研究31成功構(gòu)建了PET32ANP融合蛋白原核表達(dá)載體05MMIPTG，誘導(dǎo)10H，重組目的蛋白PET32ANP在BL21細(xì)菌中獲得高效表達(dá)。電泳分析表明目的蛋白以包涵體表達(dá)為主，純化后的PET32ANP融合蛋白具有良好的抗原性。將純化復(fù)性后的PET32ANP融合蛋白作為抗原包被ELISA板，每孔300NG，用于后續(xù)健康人群SFTSV抗體檢測(cè)。32蓬萊市健康人群血清流行病學(xué)研究321SFTSV總陽(yáng)性率共檢測(cè)血清標(biāo)本628份，其中無(wú)形體陽(yáng)性血清22份，陽(yáng)性率為35％22628SFTSV陽(yáng)性血清33份，陽(yáng)性率為525％33628。322無(wú)形體抗體檢出情況三個(gè)不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)正常人群無(wú)形體抗體陽(yáng)性率分別為284％6211，385％8208和383％8209。其中，男性無(wú)形體抗體陽(yáng)性率為345％11319，女性無(wú)形體抗體陽(yáng)性率為356％11309青壯年、中年、老年三個(gè)不同年齡組無(wú)形體抗體陽(yáng)性率分別為473％10211、412％11267和067％1150。農(nóng)民、工人及其他無(wú)形體抗體陽(yáng)性率分別為437％20458，132％176，106％194。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)、性別、職業(yè)之間無(wú)形體抗體陽(yáng)性率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞01。不同年齡之間無(wú)形體抗體陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜01。323SFTSV抗體檢出情況三個(gè)不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)正常人群SFTS抗體陽(yáng)性率分別為569％12211，529％11208和478％10209。青壯年、中年、老年三個(gè)不同年齡組SFTS抗體陽(yáng)性率分別為332％7211，749％20267和4％6150。男性SFTS抗體陽(yáng)性率為439％14319，女性SFTS抗體陽(yáng)性率為615％19309。農(nóng)民、工人及其他人SFTS抗體陽(yáng)性率為655％30458，132％176，213％294。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)、性別之間SFTS抗體陽(yáng)性率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞01。不同年齡、職業(yè)人群SFTS抗體陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜01。結(jié)論及意義1草地未吸血長(zhǎng)角血蜱可攜帶SFTSV、無(wú)形體和埃立克體，說(shuō)明長(zhǎng)角血蜱是這些病原菌的和病毒的自然宿主。2不同時(shí)期的長(zhǎng)角血蜱叮咬染毒小鼠后，運(yùn)用RTPCR檢測(cè)飽血和蛻皮后的長(zhǎng)角血蜱SFTSV的陽(yáng)性率，證實(shí)SFTSV在長(zhǎng)角血蜱體內(nèi)能經(jīng)期傳播成蜱叮咬染毒小鼠后，運(yùn)用RTPCR檢測(cè)飽血的成蜱陽(yáng)性，產(chǎn)卵后幼蜱陽(yáng)性，證實(shí)SFTSV在長(zhǎng)角血蜱體內(nèi)存在經(jīng)卵傳播。這一試驗(yàn)證明長(zhǎng)角血蜱是SFTSV的儲(chǔ)存宿主。3RTPCR檢測(cè)證明長(zhǎng)角血蜱能夠從染毒小鼠獲得SFTSV也能將SFTSV傳播給小鼠，證明蜱是SFTSV的傳播媒介。4蓬萊市健康人群中SFTSV和無(wú)形體抗體陽(yáng)性率較高，提示蓬萊市存在SFTSV和無(wú)形體的流行及隱性感染。不同職業(yè)的人群的感染率不同，這主要是因?yàn)椴煌巳号c蜱接觸機(jī)會(huì)不同，我們需加強(qiáng)易感人群對(duì)無(wú)形體和SFTSV感染的的預(yù)防意識(shí)，提高疾病防控部門對(duì)無(wú)形體病和SFTS的快速診斷能力。

簡(jiǎn)介：I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文題目牡蠣皰疹病毒魁蚶株交叉引物等溫?cái)U(kuò)牡蠣皰疹病毒魁蚶株交叉引物等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法的建立及貝類派琴蟲流行增檢測(cè)方法的建立及貝類派琴蟲流行病學(xué)調(diào)查病學(xué)調(diào)查英文題目英文題目THEESTABLISHMENTOFCPATECHNIQUESINDETECTINGOSHV1SBANDEPIDEMIOLOGICALSURVEYOFPERKINSUSSPINSHELLFISH專業(yè)水產(chǎn)養(yǎng)殖水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)研究方向研究方向病原微生物檢測(cè)病原微生物檢測(cè)姓名趙小金趙小金指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師王崇明研究員王崇明研究員蔡生力教授蔡生力教授二O一五年四月十三十三日學(xué)校代碼10264研究生學(xué)號(hào)M120101084III

簡(jiǎn)介：目的支氣管哮喘是以氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性為特征表現(xiàn)的、一類復(fù)雜的呼吸道炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，與遺傳、變應(yīng)原刺激、空氣污染和呼吸道病毒感染等因素有關(guān)。在引發(fā)呼吸道感染的諸多病毒中，呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，RSV既是引起嬰幼兒和免疫缺陷人群下呼吸道感染最常見(jiàn)的病原體，也是誘發(fā)支氣管哮喘或引起哮喘加重的常見(jiàn)原因。RSV感染調(diào)控支氣管哮喘的機(jī)制尚不完全明確，推測(cè)可能與病毒感染影響肺組織局部免疫應(yīng)答類型和強(qiáng)弱有關(guān)。通常認(rèn)為TH1TH2免疫應(yīng)答失衡是介導(dǎo)支氣管哮喘，特別是過(guò)敏性哮喘發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵的免疫學(xué)事件。利用卵清蛋白OVALBUMIN，OVA誘發(fā)的過(guò)敏性哮喘實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，本?shí)驗(yàn)小組前期研究表明感染發(fā)生的時(shí)間點(diǎn)影響RSV對(duì)過(guò)敏性哮喘的調(diào)控作用致敏前病毒感染（RSVOVA）能夠抑制實(shí)驗(yàn)鼠過(guò)敏性哮喘的發(fā)展，而致敏后病毒感染OVARSV無(wú)此抑制效應(yīng)。具體地，致敏前病毒感染降低哮喘鼠氣道高反應(yīng)性，以及減少哮喘肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。有趣的是，致敏前病毒感染明顯減少了肺組織中ΓΔT細(xì)胞的數(shù)量。由于在該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭羞^(guò)繼回輸?shù)摩＆細(xì)胞能夠明顯增加炎性細(xì)胞特別是嗜酸性粒細(xì)胞肺組織浸潤(rùn)，我們推測(cè)肺組織中的ΓΔT細(xì)胞發(fā)揮促哮喘效應(yīng)，因而致敏前RSV感染抑制過(guò)敏性哮喘可能與減少肺組織中的發(fā)揮哮喘促進(jìn)作用的ΓΔT細(xì)胞有關(guān)。不足的是，該研究并沒(méi)有充分明確在此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭笑＆細(xì)胞是促進(jìn)哮喘進(jìn)展的免疫細(xì)胞，也沒(méi)能揭示致敏前病毒感染減少肺組織ΓΔT細(xì)胞的可能機(jī)制。RSV感染增加肺組織局部TH2型細(xì)胞因子的釋放，引發(fā)TH2型優(yōu)勢(shì)應(yīng)答的建立，這可能是RSV誘發(fā)支氣管哮喘和引起哮喘加重的關(guān)鍵。RSV感染引起TH2型優(yōu)勢(shì)應(yīng)答的機(jī)理尚不完全清楚，是否有近年來(lái)研究較熱門的、具有TH2型免疫應(yīng)答促進(jìn)效應(yīng)的白細(xì)胞介素INTERLEUKIN，IL33的參與呢IL33是一種在上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞核中組成性表達(dá)的“警惕素”，因此有較大可能在RSV感染的情形下從病毒損傷的這些細(xì)胞被動(dòng)釋放另一方面，大量研究已證實(shí)IL33與其受體ST2組成的信號(hào)通路（即IL33ST2信號(hào)通路）在介導(dǎo)TH2型優(yōu)勢(shì)應(yīng)答建立和支氣管哮喘發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的重要作用IL33ST2信號(hào)通路活化引起下游TH2型細(xì)胞因子如IL13的大量產(chǎn)生，促使TH2型優(yōu)勢(shì)應(yīng)答在疾病的早期即建立RSV病毒感染和感染誘發(fā)的TH2型優(yōu)勢(shì)應(yīng)答與IL33ST2信號(hào)通路的關(guān)聯(lián)性目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究圍繞ΓΔT細(xì)胞和IL33ST2信號(hào)通路探討RSV感染調(diào)控支氣管哮喘的免疫學(xué)機(jī)制。一方面，在OVA過(guò)敏性哮喘實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停覀兺ㄟ^(guò)過(guò)繼回輸實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確了ΓΔT細(xì)胞發(fā)揮的促TH2型免疫應(yīng)答和促哮喘效應(yīng)。隨后，我們重點(diǎn)探究了在這一實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭兄旅羟安《靖腥緶p少肺組織ΓΔT細(xì)胞的機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)致敏前RSV感染通過(guò)增加肺組織中ΓΔT細(xì)胞發(fā)生依賴FASL的細(xì)胞凋亡造成其數(shù)量減少，從而削弱其發(fā)揮的促哮喘效應(yīng)，抑制了支氣管哮喘的發(fā)展另一方面，利用RSV病毒急性感染實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，我們探討了RSV感染、TH2型優(yōu)勢(shì)免疫應(yīng)答和IL33ST2信號(hào)通路之間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)性，旨在為加深理解RSV調(diào)控肺組織局部免疫應(yīng)答和支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展提供新的思路。方法通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA檢測(cè)MOCK、OVA、RSVOVA和OVARSV組別鼠（過(guò)繼與非過(guò)繼回輸ΓΔT細(xì)胞）肺組織中TH1型細(xì)胞因子干擾素ΓINTERFERONΓ，IFNΓ、TH2型細(xì)胞因子IL4和TH17型細(xì)胞因子IL17A水平通過(guò)ELISA檢測(cè)哮喘鼠血清中總免疫球蛋白（IMMUNOGLOBULIN，IG）E、OVAIGE、OVAIGG1和OVAIGG2A水平流式細(xì)胞術(shù)分析哮喘鼠肺組織和脾臟中ΓΔT細(xì)胞表面FAS配體即FASL的表達(dá)流式細(xì)胞術(shù)分選哮喘鼠肺組織中ΓΔT細(xì)胞，體外培養(yǎng)24小時(shí)后FITCANNEXINⅤ和PI雙染法測(cè)定其凋亡發(fā)生利用QRTPCR和ELISA分別在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平測(cè)定RSV感染后不同時(shí)間點(diǎn)肺組織中細(xì)胞因子IL33、IL13、IL5、IL4、IFNΓ和IL17A的產(chǎn)生通過(guò)QRTPCR檢測(cè)RSV感染肺組織中ST2的轉(zhuǎn)錄水平流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)病毒感染肺組織中CD45ST2細(xì)胞浸潤(rùn)，并分析ΓΔT細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和CD3CD4細(xì)胞表面IL33受體ST2的表達(dá)蘇木素伊紅染色（HEMATOXYLINEOSINSTAINING，HE）分析病毒感染后肺組織病理改變?nèi)鹗考匪_WRIGHTGIEMSA“染色”支氣管肺泡灌洗液BRONCHOALVEOLARLAVAGEFLUID，BALF中炎性細(xì)胞，并根據(jù)各類細(xì)胞組織學(xué)形態(tài)行炎性細(xì)胞分類計(jì)數(shù)測(cè)定RSV感染后不同時(shí)間點(diǎn)肺組織病毒滴度，表示為半數(shù)組織細(xì)胞感染量TISSUECULTUREINFECTIVEDOSE，TCID50ST2單克隆抗體阻斷IL33ST2信號(hào)通路，利用上述實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)細(xì)胞因子產(chǎn)生、肺組織病理、BALF炎性細(xì)胞和肺組織RSV病毒滴度的改變流式細(xì)胞術(shù)分析IL33ST2信號(hào)通路阻斷后病毒感染鼠肺組織中ST2嗜酸性粒細(xì)胞和ST2CD3CD4數(shù)量變化。結(jié)果⑴致敏前RSV感染減少IL4和IL17A的分泌，同時(shí)增加IFNΓ的產(chǎn)生。⑵過(guò)繼回輸ΓΔT細(xì)胞增加IL4的產(chǎn)生，抑制IFNΓ的分泌，但對(duì)IL17A無(wú)明顯影響。⑶致敏前RSV感染明顯減少總IGE和OVAIGE的產(chǎn)生，而過(guò)繼回輸ΓΔT細(xì)胞增加了哮喘鼠血清中總IGE和OVAIGG1水平。⑷致敏前RSV感染明顯增加哮喘鼠肺組織中FASLΓΔT細(xì)胞數(shù)量，但在脾臟無(wú)此發(fā)現(xiàn)。⑸致敏前RSV感染增加肺組織ΓΔT細(xì)胞發(fā)生依賴FASL的細(xì)胞凋亡。⑹RSV急性感染增加肺組織中IL33和ST2表達(dá)，并增加CD45ST2細(xì)胞肺組織浸潤(rùn)。⑺RSV感染增加肺組織中ST2ΓΔT細(xì)胞、ST2嗜酸性粒細(xì)胞和ST2CD3CD4細(xì)胞的浸潤(rùn)。⑻RSV急性感染增加IL4、IL5、IL13和IL17A的表達(dá)，而阻斷IL33ST2信號(hào)通路明顯減少IL13表達(dá)，但對(duì)IL4和IFNΓ無(wú)明顯影響。⑼阻斷IL33ST2信號(hào)通路明顯減輕RSV感染誘發(fā)的肺組織病理改變，并減少了感染鼠肺組織中ST2嗜酸性粒細(xì)胞和ST2CD3CD4細(xì)胞。⑽阻斷IL33ST2信號(hào)通路對(duì)RSV病毒的增殖和清除無(wú)明顯影響。結(jié)論①在OVA過(guò)敏性哮喘模型，ΓΔT細(xì)胞增強(qiáng)TH2型免疫應(yīng)答，發(fā)揮促哮喘效應(yīng)，而致敏前RSV感染明顯增加肺組織中ΓΔT細(xì)胞發(fā)生FASL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，從而削弱了其發(fā)揮的哮喘促進(jìn)效應(yīng)，減輕了哮喘發(fā)展。②IL33ST2信號(hào)通路參與了RSV感染誘發(fā)的TH2型應(yīng)答和肺組織炎癥的建立，并且IL33反應(yīng)性的CD45ST2細(xì)胞，包括ST2ΓΔT細(xì)胞、ST2嗜酸性粒細(xì)胞和ST2CD3CD4細(xì)胞可能是RSV感染模型中TH2型細(xì)胞因子如IL13的來(lái)源細(xì)胞。③RSV通過(guò)影響肺組織ΓΔT細(xì)胞以及活化IL33ST2信號(hào)通路左右局部免疫應(yīng)答平衡，調(diào)控支氣管哮喘的發(fā)展。

簡(jiǎn)介：背景博爾納病病毒BNADISEASEVIRUS，BDV是單股負(fù)鏈非節(jié)段性有包膜的RNA病毒，有高度嗜神經(jīng)性，BDV感染后在細(xì)胞內(nèi)呈低拷貝復(fù)制，呈慢性持續(xù)感染狀態(tài)，使細(xì)胞產(chǎn)生非溶解性病變，引起宿主細(xì)胞凋亡及細(xì)胞功能改變。該病毒宿主廣泛，能感染所有的溫血?jiǎng)游?，引起博爾納病。近年來(lái)大量流行病學(xué)研究提示BDV同人神經(jīng)精神疾病的發(fā)生和發(fā)展存在著密切的關(guān)系。BDV致病機(jī)制尚不明確，目前有多種假說(shuō)，主要包括免疫反應(yīng)，神經(jīng)遞質(zhì)，神經(jīng)可塑性，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。對(duì)BDV感染后宿主代謝的改變更是知之甚少。PLENTIKOVMV等人的研究顯示BDV感染大鼠后會(huì)引起去甲腎上腺素、多巴胺、五羥色胺、5羥基吲哚乙酸和3，4二羥乙酸等多種代謝產(chǎn)物的變化，可以推測(cè)在病毒感染過(guò)程中存在著細(xì)胞代謝異常，明確這些代謝物的具體變化，對(duì)于闡明BDV的慢性持續(xù)感染機(jī)制有重要意義。目的獲得BDV感染OL細(xì)胞的廣譜代謝物，比較BDV感染與正常OL細(xì)胞之間代謝產(chǎn)物的變化，闡明BDV感染的某些生化機(jī)制，并闡釋造成代謝產(chǎn)物變化的病理生理機(jī)制，最終為BDV致病提供證據(jù)支持。方法從BDV持續(xù)感染細(xì)胞中提取BDV病毒液，用所得病毒液重新感染OL細(xì)胞，通過(guò)RTPCR，免疫熒光和WB確定感染成功。生長(zhǎng)狀態(tài)良好的OL細(xì)胞傳代培養(yǎng)至28板后分為2組每組14板，一組用于BDV病毒感染，另外一組作為對(duì)照組。在BDV感染第14天分別提取兩組細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物進(jìn)行核磁共振1HNUCLEARMAGICRESONANCE，1HNMR檢測(cè)，數(shù)據(jù)用偏最小二乘判別分析PLSDA處理。結(jié)果從病毒感染細(xì)胞中成功提取到了具有感染能力的BDV病毒，并成功地用該病毒重新感染OL細(xì)胞。對(duì)BDV感染組和對(duì)照組組各14例樣本進(jìn)行1HNMR分析，定量化分析了21種代謝產(chǎn)物，結(jié)果顯示兩組樣本間存在明顯差異，BDV感染組的丙酮酸鹽濃聚物水平顯著低于對(duì)照組P0，谷氨酸、谷氨酰胺和天冬氨酸水平明顯高于對(duì)照組P0。結(jié)論1HNMR分析是一種簡(jiǎn)便實(shí)用，成本較低的代謝組學(xué)分析方法，適合用于病毒感染致病機(jī)制研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BDV感染主要影響氨基酸代謝、脂類代謝和糖酵解途徑。病毒感染后細(xì)胞代謝產(chǎn)物中谷氨酸鹽顯著增加，或許可以解釋BDV感染宿主所引起的精神行為癥狀。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)墼絲2UDC重慶醫(yī)科大學(xué)密級(jí)碩士學(xué)位論文論文題目豎堡塑壅塞童旦簽墮絲壁鎏里墮塑堡垡塑塑堂塹塞作者姓名三墮指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別謝鵬教授重塞墾型盔堂箜二墮盎堂墮碩士學(xué)科、專業(yè)名稱生塑匡堂三墨論文答辯年月三Q壘笙墨旦2014年5月目錄莢漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照1中文擅要2英文搐要。4前言。61材科與方法82結(jié)果193討論。29全文總結(jié)3L參考文獻(xiàn)。32文獻(xiàn)綜述36致謝。44攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文。45攻讀學(xué)位期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議。46

簡(jiǎn)介：目的核苷（酸）類似物是目前臨床使用的主要抗HBV藥物，但長(zhǎng)期應(yīng)用易發(fā)生耐藥，影響療效。研究來(lái)自國(guó)內(nèi)不同地區(qū)HBV流行株核苷酸類似物耐藥突變的種類、分布及與宿主的關(guān)系，以了解核苷（酸）類似物基因耐藥概況，為耐藥突變的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)提供依據(jù)，并作為優(yōu)化治療方案的參考，從而最大限度的提高抗病毒療效，減少和延遲耐藥發(fā)生。方法提取2223例HBV感染者血清HBVDNA，PCR擴(kuò)增HBV基因P區(qū)片段后測(cè)序，使用BIOEDIT軟件分析測(cè)序結(jié)果。共檢測(cè)19個(gè)耐藥相關(guān)位點(diǎn)，包括主要耐藥位點(diǎn)（RTA181、RTT184、RTS202、RTM204、RTN236、RTM250），次要補(bǔ)償耐藥位點(diǎn)（RTL80、RTV173、RTL180）以及尚未完全證實(shí)的耐藥位點(diǎn)（RTV84、RTS85、RTV207、RTS213、RTV214、RTQ215、RTL229、RTI233、RTP237、RTNH238），覆蓋HBV對(duì)拉米夫定、阿德福韋酯和恩替卡韋發(fā)生耐藥的主要位點(diǎn)。結(jié)果在2223例血清標(biāo)本中，1202例（5407％）檢測(cè)出耐藥突變，其中980例（4408）檢測(cè)出主要耐藥位點(diǎn)突變。突變檢出率表現(xiàn)出年齡和地域依賴性，即隨年齡增長(zhǎng)突變陽(yáng)性率增高，北方人群耐藥突變率高于南方。主要耐藥位點(diǎn)RTM204、RTA181、RTN236、RTT184、RTS202、RTM250構(gòu)成比依次為5100、2727、1387、425、273、088。在檢測(cè)的病毒株中，多點(diǎn)突變（6620）多于單點(diǎn)突變（3380）。全部RTM204V突變株伴有RTL180M突變，而3555％RTM204I與RTL180M同時(shí)出現(xiàn)（Χ226054，P結(jié)論1核苷（酸）類似物耐藥突變率較高，年齡和地域依賴性顯著。2耐藥突變位點(diǎn)眾多，以RTM204VI最常見(jiàn)，其次是RTA181TV；多點(diǎn)突變多于單點(diǎn)突變，RTM204VI常以不同比率與其他突變伴隨出現(xiàn)。3不同突變組成的復(fù)合模式多見(jiàn)，達(dá)32種，可提示交叉和多重耐藥性。4耐藥突變的高陽(yáng)性率和組成的復(fù)雜性，決定了該項(xiàng)檢測(cè)對(duì)耐藥病毒株的發(fā)現(xiàn)和臨床合理用藥的指導(dǎo)意義，應(yīng)積極開(kāi)展耐藥突變的檢測(cè)。

簡(jiǎn)介：目的兒童下呼吸道感染現(xiàn)在已成為兒科發(fā)病率最高的一種疾病，而90％以上的感染是由病毒引起。呼吸道病毒涉及7個(gè)病毒科的10多類共239個(gè)類別的病毒。2005年9月瑞典科學(xué)家ALLER等，在呼吸道感染患兒鼻咽分泌物中發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)小病毒人博卡病毒HUMANBOCAVIRUS，HBOV。此后，世界各地的研究證明博卡病毒不僅會(huì)引起小兒呼吸道感染，還會(huì)引發(fā)包括成人的病毒性腸胃炎疾病。目前世界各國(guó)對(duì)HBOV的研究主要集中于檢測(cè)方法的建立和HBOV感染的流行病學(xué)調(diào)查。迄今為止，江蘇地區(qū)尚未有博卡病毒感染及流行相關(guān)報(bào)導(dǎo)。本研究通過(guò)PCR檢測(cè)鎮(zhèn)江及周邊地區(qū)呼吸道和胃腸道疾病患兒博卡病毒感染情況，并對(duì)獲得的HBOV基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，以對(duì)該地區(qū)HBOV分子流行病學(xué)做初步研究在此基礎(chǔ)上，本研究選擇3株鎮(zhèn)江地區(qū)HBOV代表毒株，對(duì)代表毒株的全基因組序列進(jìn)行克隆測(cè)序，以此研究鎮(zhèn)江地區(qū)HBOV毒株遺傳特征，為該地區(qū)臨床HBOV感染的診斷和治療提供理論基礎(chǔ)。方法12010年1月至2011年12月，從鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科采集156份呼吸道疾病患兒鼻咽分泌液樣品和310份急性胃腸炎患兒糞便樣品，同時(shí)收集100份體檢健康兒童糞便樣品。提取病毒核酸，通過(guò)PCR方法檢測(cè)樣品中HBOV基因，對(duì)PCR擴(kuò)增的590BP的陽(yáng)性特異性條帶進(jìn)行TA克隆后送上海生工生物公司進(jìn)行基因測(cè)序獲得HBOV基因序列片段。檢索GENBANK中相關(guān)HBOV基因序列，與本研究中獲得的HBOV基因序列共同構(gòu)建HBOV基因序列數(shù)據(jù)集以FASTA格式保存，通過(guò)CLUSTALW軟件進(jìn)行序列數(shù)據(jù)集進(jìn)行多重序列聯(lián)配，對(duì)生成的生成的＊ALN文件進(jìn)一步用MEGA40軟件進(jìn)行序列同源性及系統(tǒng)發(fā)育分析。2在以上鎮(zhèn)江地區(qū)HBOV分子流行病學(xué)研究基礎(chǔ)上，選擇該地區(qū)3株HBOV代表毒株并提取病毒核酸，GENBANK中提交的HBOV全基因組序列設(shè)計(jì)7對(duì)引物，對(duì)3株代表毒株進(jìn)行全基因組PCR擴(kuò)增、克隆測(cè)序及全基因組序列拼接，獲得鎮(zhèn)江地區(qū)HBOV代表毒株株全基因組序列同時(shí)檢索GENBANK中所有具有全基因組序列的HBOV毒株，與本研究中獲得的HBOV全基因組序列共同構(gòu)建HBOV基因序列數(shù)據(jù)集以FASTA格式保存，通過(guò)CLUSTALW軟件進(jìn)行序列數(shù)據(jù)集進(jìn)行多重序列聯(lián)配，對(duì)生成的生成的ALN文件進(jìn)一步用MEGA40軟件進(jìn)行序列同源性及系統(tǒng)發(fā)育分析用SIMPLOT20及RDP30等軟件進(jìn)行病毒基因重組可能性進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析。結(jié)果1PCR法檢測(cè)結(jié)果表明156份鼻咽分泌物樣品中有4份PCR擴(kuò)增陽(yáng)性，陽(yáng)性率為256％310份糞便樣品有11份PCR擴(kuò)增陽(yáng)性，陽(yáng)性率為355％糞便樣品陽(yáng)性率大于鼻咽分泌物樣品。100份體檢健康兒童糞便樣品有1份PCR擴(kuò)增陽(yáng)性，陽(yáng)性率為10％。測(cè)序結(jié)果分析表明16個(gè)DNA序列均為HBOV基因序列，且均與GENBANK中提交的HBOV1基因型毒株高度同源，提示鎮(zhèn)江地區(qū)流行的HBOV均為HBOV1基因型。系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)16株毒株均屬于HBOV1，并聚類在3個(gè)主要類群中，提示鎮(zhèn)江地區(qū)有三種不同的HBOV１毒株同時(shí)流行。序列同源性分析顯示該16毒株同源性為987％996％，與分離自上海兒童的7株HBOV1和重慶的3株HBOV１同源性最高，均達(dá)到98％以上，從進(jìn)化樹(shù)上看，該26個(gè)毒株聚類在同一大類群之中。2在HBOV分子流行病學(xué)研究基礎(chǔ)上選擇毒株名為ZJ42、ZJ68及ZJ92的3株HBOV毒株為代表毒株進(jìn)行全基因組PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示本研究設(shè)計(jì)的全基因組擴(kuò)增引物均能擴(kuò)增出HBOV特異性基因條帶，且目的條帶經(jīng)克隆測(cè)序后為HBOV基因序列。序列拼接結(jié)果顯示HBOVZJ42全基因組序列共5301個(gè)核苷酸毒株ZJ68和ZJ92具有相同的基因組長(zhǎng)度為5300個(gè)核苷酸以全基因組序列在GENBANK中進(jìn)行BLAST搜索，結(jié)果證實(shí)3株HBOV代表毒株均為HBOV1基因型?；谌蚪M序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示，本研究中的3株代表毒株聚類在三個(gè)不同的遺傳類群中，其中ZJ92與來(lái)自我國(guó)香港的HBOV毒株HK24及上海的HBOV毒株SH8兩株毒株遺傳關(guān)系最近ZJ42與來(lái)自泰國(guó)的毒株CU25緊密聚類在一起而ZJ68與來(lái)自我國(guó)上海的R3080522001和SH1親緣關(guān)系最近?；贖BOV全基因組序列進(jìn)行病毒基因重組分析結(jié)果顯示，包括本研究中代表毒株在內(nèi)的HBOV1和HBOV4之間存在明顯的基因重組信號(hào)，所有的HBOV2毒株為該重組事件的重組毒株。該重組信號(hào)被進(jìn)一步的序列同源性掃描和系統(tǒng)進(jìn)化分析所證實(shí)。結(jié)論1本研究中鼻咽分泌物樣品均采集自臨床上具有呼吸道疾病的兒童病例，而糞便樣品均采集自急性腹瀉兒童，因此，根據(jù)研究結(jié)果可以推測(cè)，HBOV感染與臨床兒童呼吸道疾病及急性腹瀉有一定關(guān)聯(lián)性。HBOV陽(yáng)性率在不同地區(qū)有明顯差異，這可能是世界范圍內(nèi)不同地域的氣候、人群生活習(xí)慣及種族特征等不同因素所導(dǎo)致的。鎮(zhèn)江地區(qū)僅發(fā)現(xiàn)HBOV１在兒童群體中流行，證明HBOV1為該地區(qū)博卡病毒主要流行基因型。系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明鎮(zhèn)江地區(qū)的毒株與重慶和上海的毒株有共同的分子起源。2本研究設(shè)計(jì)的HBOV全基因組擴(kuò)增引物可以很好的擴(kuò)增基因1型HBOV１全基因組，可以給以后HBOV１全基因組的擴(kuò)增提供參考鎮(zhèn)江地區(qū)3株代表毒株全基因組測(cè)序表明該地區(qū)博卡病毒主要流行基因型是HBOV1鎮(zhèn)江地區(qū)3株代表毒株可能有三種不同的遺傳起源，也說(shuō)明在同一地區(qū)，即使是同一種基因型的HBOV也有可能有2種以上不同的亞群同時(shí)在人群中流行。HBOV毒株之間的基因重組現(xiàn)象證明HBOV2可能是HBOV1和HBOV4毒株之間重組產(chǎn)生的。

簡(jiǎn)介：同等學(xué)力申請(qǐng)碩士學(xué)位圖書分類號(hào)R3923；R51262；Q789山東Y7A7668單位代碼88501學(xué)號(hào)T02096省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文論文題目表達(dá)HBVPRES2／S基因重組腺病毒的研制及其免疫學(xué)研究論文類型基礎(chǔ)研究研究所院裊嘉省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研姓名專業(yè)指導(dǎo)教師職稱孟紅病原生物學(xué)王建偉研究員論文完成日期2005年3月1洪濤，王健偉戰(zhàn)勝瘟疫諾貝爾獎(jiǎng)百年鑒叢書病毒與傳染病分冊(cè)上海上海科教出版社，20022洪濤，王健偉等編SARS冠狀病毒圖譜，科學(xué)出版社，編輯中3闡飆主編，主健偉，景懷琦副主編新發(fā)現(xiàn)傳染病化工出版社20034王健偉血小板生成素見(jiàn)李元主編基因工程藥物北京化工出版社，20025王健偉病毒基因組學(xué)見(jiàn)金奇主編微生物基因組學(xué)科學(xué)出版社。出版中6王健偉，阮力腺病毒見(jiàn)賀聯(lián)印，許熾嫖主編熱帶醫(yī)學(xué)第二版，北京人民衛(wèi)生出版社。20042182247臨床微生物學(xué)，主要譯者之一，科學(xué)出版社，2005，出版中8王健偉病原學(xué)見(jiàn)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心編傳染性非典型肺炎預(yù)防控制教材北京中國(guó)協(xié)和醫(yī)科人學(xué)出版社，2003951049洪濤，馬貴平，千健偉瘋牛病與朊病毒見(jiàn)邵一鳴主編常見(jiàn)新發(fā)傳染病防治手冊(cè)杭州浙江人學(xué)山版社，20054562IO千健偉生物安全實(shí)驗(yàn)室良好技術(shù)規(guī)范生物安全規(guī)劃教材北京人民衛(wèi)生出版社9專利7項(xiàng)見(jiàn)祁國(guó)明主編，生物安全培訓(xùn)教材全國(guó)實(shí)驗(yàn)室2005，出版中1千健偉，何金生，洪濤用于預(yù)防嬰幼兒腹瀉的重組腺病毒，專利號(hào)ZL0L】3】0847。2王健偉，何金生，洪濤表達(dá)人輪狀病毒VP7的重組腺病毒及制備方法和用途，專利號(hào)ZL021041253。3王健偉魏強(qiáng)，洪濤一種腫瘤治療劑及其用途申請(qǐng)?zhí)?0041000878344陳曄光，王治，王健偉，任麗麗，盂安明一種抗SARS病毒的SIRNA及其應(yīng)用申請(qǐng)?zhí)?003101017336。5陳嘩光，王治，王健偉，任麗麗，孟安明抗SARS病毒的SIRNA及其應(yīng)用，申請(qǐng)?zhí)?003】01017340。6王健偉，王火然，洪濤基于NSP4基因的輪狀病毒基因疫苗申請(qǐng)?zhí)?005100074063。7干健偉，董京芳乇彥斌，洪濤人甲型流感病毒保護(hù)性多肽、其用途、疫苗和診斷工具申請(qǐng)?zhí)?00510051548X2005年3月4目申請(qǐng)10獲獎(jiǎng)1洪濤王健偉戰(zhàn)勝瘟疫諾貝爾獎(jiǎng)百年鑒叢書病毒與傳染病分冊(cè)專著2003年第五屆全國(guó)優(yōu)秀科普作品圖二餑類三等獎(jiǎng)2秦川魏強(qiáng)，王健偉等SARS冠狀病毒感染恒河猴等動(dòng)物的模型建立2004年北京市科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)導(dǎo)師小組成員介紹1劉菊華女，59歲，研究員，從事微生物學(xué)研究30年。2郭嵐女，28歲，病毒學(xué)博士，助理研究員。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多腹瀉兒童及靈長(zhǎng)類動(dòng)物腸道病毒宏基因組學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R5118R3927UDC密級(jí)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目慢性乙型肝炎和原發(fā)性肝癌患者中腺病毒中和抗體的慢性乙型肝炎和原發(fā)性肝癌患者中腺病毒中和抗體的流行病學(xué)研究流行病學(xué)研究作者姓名熊域皎熊域皎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)內(nèi)科學(xué)論文答辯年月2015年5月2015年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）賈蓓賈蓓教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院重慶醫(yī)科大重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生研究生學(xué)位論文學(xué)位論文英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱HEK293HUMANEMBRYONICKIDNEY293人胚腎細(xì)胞293FBSFETALBOVINESERUM胎牛血清PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液DMEMDULBECCOSMODIFIEDEAGLESMEDIUMDULBECCOS改良的EAGLE培養(yǎng)基DMSODIMETHYLSULPHOXIDE二甲基亞砜DDH2ODOUBLEDISTILLEDH2O雙蒸水PSPENICILLINSTREPTOMYCIN青鏈霉素CO2CARBONDIOXIDE二氧化碳ADADENOVIRUS腺病毒ADCCHIMPANZEEADENOVIRUS猿腺病毒GFPGREENFLUESCENTPROTEIN綠色熒光蛋白CSCLCAESIUMCHLIDE氯化銫VPVIRUSPARTICLE病毒顆粒ODOPTICALDENSITY光密度CPECYTOPATHICEFFECT細(xì)胞病變效應(yīng)HHOUR小時(shí)SSECOND秒MINMINUTE分RPMROLLSPERMINUTE每分鐘轉(zhuǎn)速ΜLMICROLITER微升MLMILLILITER毫升UGMICROGRAM微克MGMILLIGRAM毫克

簡(jiǎn)介：研究背景乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV感染是危害人類健康的重大傳染病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)全球約有20億人曾感染過(guò)HBV，其中慢性HBV感染者約為35億人，估計(jì)每年約有100萬(wàn)人死于因HBV感染所導(dǎo)致的相關(guān)疾病，如肝硬化、肝衰竭和原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌（HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC）。我國(guó)是HBV感染的高流行地區(qū)，HBV攜帶者達(dá)9300萬(wàn)人，其中慢性乙肝患者達(dá)2500萬(wàn)，成為我國(guó)最為重要的三大傳染病之一，也是引起HCC主要原因。近十年來(lái)，隱匿性乙型肝炎病毒感染OCCULTHEPATITISBVIRUSINFECTION，OBI廣泛受到輸血醫(yī)學(xué)及臨床工作者的重視。定義為表面抗原檢測(cè)陰性，而血清或肝臟組織中HBVDNA檢測(cè)為陽(yáng)性，實(shí)為乙型肝炎病毒HBV的一種潛伏性感染形式，而且是輸血、器官移植、血液透析傳播乙肝病毒的重要原因。我國(guó)慢性乙型肝炎感染主要是由圍生期母嬰傳播導(dǎo)致，由于新生兒免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟，容易導(dǎo)致免疫耐受而產(chǎn)生慢性感染，隨著年齡增長(zhǎng)發(fā)展為肝硬化、肝癌的幾率也顯著升高。不但在輸血傳播疾病中OBI廣泛受到關(guān)注，自2008年以來(lái)越來(lái)越多的各國(guó)研究人員開(kāi)始關(guān)注母嬰傳播OBI的分子免疫機(jī)制。OBI可發(fā)生于乙型肝炎表面抗體乙型肝炎核心抗體ANTIHBSANTIHBC陽(yáng)性人群，也可發(fā)生于ANTIHBSANTIHBC陰性人群中，其檢測(cè)結(jié)果主要依賴于檢測(cè)乙型肝炎表面抗原HEPATITISBVIRUSANTIGEN，HBSAG和HBVDNA試劑的靈敏度。研究表明，OBI形成最常見(jiàn)的原因是HBV基因變異尤其是S區(qū)及前S區(qū)變異，可影響HBV蛋白的表達(dá)，導(dǎo)致HBSAG陰性，或者引起抗原表位構(gòu)相變化，影響抗原抗體反應(yīng)，導(dǎo)致試劑難以檢測(cè)。導(dǎo)致OBI的其他原因還包括HBV其他結(jié)構(gòu)區(qū)域變異，如X區(qū)變異，前C和C區(qū)變異等另外，HBSAG分泌障礙導(dǎo)致大量HBSAG滯留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不能分泌到胞外，從而導(dǎo)致HBSAG陰性的假象。再次，其他病毒感染的干擾，如HBV與其他嗜肝性病毒或者HIV重疊感染，也可相互影響導(dǎo)致HBV復(fù)制受到限制呈現(xiàn)出HBSAG陰性的感染狀態(tài)。在PRESS區(qū)的任一突變都可以導(dǎo)致改變HBSAG的抗原性并且會(huì)抑制ANTIHBS的產(chǎn)生。該區(qū)域的第124到147氨基酸序列包含“A”決定簇和包含應(yīng)答ANTIHBS顯性B細(xì)胞抗原簇。研究目的本研究通過(guò)對(duì)HBSAG陽(yáng)性孕婦生產(chǎn)的嬰幼兒進(jìn)行跟蹤隨訪，以探究經(jīng)乙肝疫苗主被動(dòng)免疫和高效價(jià)乙肝免疫球蛋白HEPATITISBIMMUNOGLOBULIN，HBIG被動(dòng)免疫以后，嬰幼兒乙型肝炎與隱匿性乙型肝炎感染的發(fā)生率及其分子免疫特征，進(jìn)而為乙肝或OBI的預(yù)防、臨床發(fā)生發(fā)展和個(gè)性化治療方案提供理論指導(dǎo)。研究方法本研究采集乙肝表面抗原陽(yáng)性的母親及其分娩的嬰幼兒出生至少3個(gè)月以上后的血漿樣本，并在48個(gè)月內(nèi)進(jìn)行隨訪，第二次采集血液樣品。嬰幼兒樣本在南方醫(yī)院肝病中心使用美國(guó)雅培公司試劑盒采用化學(xué)發(fā)光法（CMIA）進(jìn)行HBSAG定量（＜005IUML為陰性），ANTIHBS的定量（＜10MIUML為陰性），HBEAG（SCO值＜1為陰性）的檢測(cè)。在廈門大學(xué)國(guó)家傳染病診斷試劑與疫苗技術(shù)工程研究中心NIDVD采用EIA進(jìn)行全部樣品的ANTIHBC的定量檢測(cè)，核酸標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)自于英國(guó)NIBSC。應(yīng)用廣州達(dá)瑞公司乙型肝炎病毒E抗原時(shí)間分辨免疫熒光試劑盒對(duì)母親樣本進(jìn)行HBEAG的定量。采用羅氏公司高純度核酸提取試劑盒提取血清HBVDNA核酸，根據(jù)文獻(xiàn)，采用高靈敏度的巢式PCR和QPCR等的方法進(jìn)行HBVPRESS、S區(qū)和BCPPC區(qū)的擴(kuò)增，擴(kuò)增使用的TAQ酶為TAKARA公司的RTAQ和LATAQ酶。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)羅氏公司切膠純化回收試劑盒回收后送立菲公司進(jìn)行SANGER測(cè)序，測(cè)序儀器為ABI3730。獲得序列經(jīng)SEQMAN和MEGA6序列分析軟件進(jìn)行比對(duì)和進(jìn)化分析。從GENBANK基因數(shù)據(jù)庫(kù)選取我國(guó)B型，C型和D型HBV野毒株全基因序列作為參考序列進(jìn)行比對(duì)分析。翻譯成蛋白質(zhì)進(jìn)行突變分析，系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)方法對(duì)所得樣本的基因型進(jìn)行分型。對(duì)于有疑問(wèn)的樣本進(jìn)行T載體克隆并分析鑒定。應(yīng)用高靈敏度的實(shí)時(shí)熒光定量QPCR方法對(duì)嬰幼兒和母親樣本分別進(jìn)行HBVDNA定量，標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)自于英國(guó)NIBSC，靈敏度可達(dá)5IUML。研究結(jié)果1目標(biāo)人群本研究共納入77位嬰幼兒及兒童，年齡分布396個(gè)月，共采集到92份樣本，其中62位只有1次隨訪抽血，15位有2次隨訪抽血。并收集到62位HBSAG陽(yáng)性母親的68份血漿樣本，其中56位只有1次隨訪抽血，6位是進(jìn)行了2次隨訪抽血。同時(shí)還收集到6份HBSAG陽(yáng)性母親的臍帶血樣品。納入的母親平均年齡28歲。本研究中涉及到的新生兒乙肝疫苗接種率為100％，疫苗接種時(shí)間為產(chǎn)后24小時(shí)之內(nèi)，同時(shí)在與乙肝疫苗不同側(cè)臀部注射高效價(jià)乙肝免疫球蛋白HBIG進(jìn)行被動(dòng)免疫。2血清學(xué)指標(biāo)1對(duì)嬰幼兒樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，39％377HBSAG陽(yáng)性患兒，其余均為HBSAG陰性117％977HBEAG陽(yáng)性26％277HBSAG陰性HBEAG陽(yáng)性HBVDNA陰性52％477HBSAG陰性ANTIHBS陰性ANTIHBC陰性。共有143％1177ANTIHBS水平大于1000MIUML，其中91％1011都是在出生后6個(gè)月接種第三針乙肝疫苗以后檢測(cè)的，ANTIHBS在小于6個(gè)月、612個(gè)月、大于12個(gè)月各年齡階段中位數(shù)分別為16985792897MIUML3877152313012MIUML14224914988MIUML。共有80％7492嬰幼兒樣本檢測(cè)ANTIHBC陽(yáng)性，從6個(gè)月以后ANTIHBC水平顯著下降，18個(gè)月以后普遍降至為陰性。2對(duì)母親樣本檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，403％2562HBEAG陽(yáng)性。3對(duì)6例臍帶血檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，1例HBSAG為弱陽(yáng)性，有3例HBEAG陽(yáng)性，ANTIHBC全部陽(yáng)性。3HBVDNA檢測(cè)1在89份HBSAG陰性血漿樣本中（含59份初次采集樣品和15份第二次隨訪采集樣品），其中20份樣品擴(kuò)增出了BCPPC片段，第2次隨訪樣本HBVDNA均為陰性，所有樣本ANTIHBS值均為陽(yáng)性＞10MIUML，同時(shí)有4份樣品的HBEAG值是陽(yáng)性＞1SCO。共發(fā)現(xiàn)87處突變，其中3例發(fā)現(xiàn)A1762TG1764A雙突變，8例發(fā)現(xiàn)了G1896A，但是這8例均為HBEAG陰性，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)G1752A，A1846T，T1858C等處突變。2HBSAG陰性樣品中共有13份樣品擴(kuò)增出了S片段，同樣沒(méi)有第2次隨訪血液樣本，有8例同時(shí)擴(kuò)出了BCPPC和S兩個(gè)片段。ANTIHBS值均為陽(yáng)性＞10MIUML，ANTIHBC也全部為陽(yáng)性。其中3例HBEAG陽(yáng)性。在S片段共發(fā)現(xiàn)8處氨基酸突變，分別為G45E、T139L、T47A、S53L、C76S、Q101R、T125M和P127T，未發(fā)現(xiàn)重要的V39A、P41H、E64K、G145R突變。392份樣本（上述89份樣品，再加3份初次隨訪HBSAG陽(yáng)性樣品）中HBSAG陰性經(jīng)QPCR檢測(cè)后HBVDNA陽(yáng)性病毒載量，VIRALLOAD，VL＞5IUML的樣品共有13例，ANTIHBS也均為陽(yáng)性＞10MIUML，且HBEAG都為陰性＜1SCO，有4例是BCPPC，S和VL均為陽(yáng)性，其中BCPPC或者S陽(yáng)性和VL陽(yáng)性的有5例。46例臍帶血中有1例巢式PCR擴(kuò)增S片段為陽(yáng)性。4S基因序列母嬰比對(duì)對(duì)HBSAG陽(yáng)性的3例嬰兒樣品進(jìn)行分析，樣品B75的S片段的與其母親的比較有4個(gè)堿基不一致，分別是357位，381位，480位，636位，導(dǎo)致4個(gè)氨基酸變異，分別為T68I，Y76C，Q109L，Y161F。而B74和B76與其母親的HBVS片段氨基酸完全一致。通過(guò)系統(tǒng)進(jìn)樹(shù)分析，13例HBVDNAS片段陽(yáng)性樣品中B基因型10例，C基因型2例，D基因型1例。與12位母親獲得相應(yīng)的HBVS序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，有6對(duì)母嬰序列高度一致并且基因型相同，但是另外6對(duì)母嬰HBVS序列與基因型不同。研究結(jié)論對(duì)廣州市南方醫(yī)院（三甲級(jí)）HBV母嬰傳播調(diào)查顯示，母親為乙肝表面抗原陽(yáng)性的新生兒出現(xiàn)HBSAG陽(yáng)性的比率為39％377，出現(xiàn)HBEAG陽(yáng)性的比率為117％977，出現(xiàn)HBVDNA陽(yáng)性的比率為364％2877。由于第2次48個(gè)月內(nèi)隨訪采集的血液樣本中未發(fā)現(xiàn)HBVDNA陽(yáng)性樣品，因此本研究調(diào)查中所有的HBSAG陰性，HBVDNA陽(yáng)性的嬰幼兒認(rèn)為是一過(guò)性O(shè)BI感染狀態(tài)，未發(fā)現(xiàn)持續(xù)性O(shè)BI，根據(jù)OBI判定標(biāo)準(zhǔn)，其中182％1477確定為一過(guò)性O(shè)BI。在目前的醫(yī)療新生兒24小時(shí)內(nèi)聯(lián)合接種乙肝疫苗和HBIG并按計(jì)劃完成疫苗免疫可以有效阻斷96％以上HBV母嬰傳播。

簡(jiǎn)介：目的研究分析邢臺(tái)地區(qū)丙型肝炎患者病毒基因型分布特征，以及與疾病進(jìn)展、嚴(yán)重程度、獲得持續(xù)病毒學(xué)免疫應(yīng)答SVR的關(guān)系，探討持續(xù)病毒學(xué)免疫應(yīng)答影響因素，為判斷其預(yù)后及提供針對(duì)性的個(gè)體化治療提供依據(jù)。方法1、資料來(lái)源2010年12月至2014年12月，邢臺(tái)市人民醫(yī)院初診治療的丙型肝炎患者231例，診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)于2004年3月制定發(fā)布的丙型肝炎防治指南。2、數(shù)據(jù)來(lái)源21數(shù)據(jù)采集本論文分析探討了231例丙型肝炎患者的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，包括丙肝基因分型，丙肝RNA載量，SVRALT，AST，WBC，同時(shí)整理相關(guān)病例基礎(chǔ)性資料。22指標(biāo)檢測(cè)221基因分型HCV基因分型測(cè)定試劑為泰普生物科學(xué)有限公司提供，采用PCR熒光探針?lè)ǎ瑑x器為ABI7500PRISM熒光PCR儀。222病毒載量HCVRNA測(cè)定試劑為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，方法為RTPCR熒光探針?lè)?，儀器為ABI7300熒光PCR儀。223生化指標(biāo)AST測(cè)定試劑為北京萬(wàn)泰德瑞診斷技術(shù)有限公司提供，測(cè)定方法為速率法，儀器為日立7600110全自動(dòng)生化分析儀。224血象分析WBC測(cè)定試劑為邁瑞儀器廠家提供，方法為五分類法，儀器為邁瑞5380。3、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用SPSS170軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組計(jì)量資料比較采用方差分析，兩組計(jì)量資料比較采用T檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用X2檢驗(yàn)和FISHER確切概率法。結(jié)果1、基本情況符合入選診斷標(biāo)準(zhǔn)丙型肝炎病例231例，其中男性132例，女性99例。年齡分布平均年齡為443±37歲。職業(yè)分布以自由職業(yè)者居多，其次是工人，經(jīng)商，農(nóng)民。地域分布城市多于農(nóng)村。2、基因分型在入選231例患者中，基因型1B亞型109例，占472％2A亞型89例，占385％1A亞型15例，占65％2B亞型13例，占56％未成功分型5例，占22％。男性1B型明顯多于女性，女性2A型多于男性?；蛐蜑?型的丙型肝炎患者治療后獲得SVR的比率高于1型。3、持續(xù)病毒學(xué)免疫應(yīng)答231例治療的丙型肝炎患者總共獲得SVR者185例，獲得SVR的比率為801％。男性組SVR率705％，明顯低于女性組929％，兩組比較X2值17918，P＜0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義年齡40歲及以下的SVR率為978％，高于40歲以上人群SVR率為69％，X2值28333，P＜0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義飲酒患者SVR率861％，不飲酒的SVR率為790％，兩者比較X2值0971，P值為0325，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義肝硬化患者的SVR率為25％，無(wú)肝硬化患者的SVR率為889％兩者比較X2值70680，P＜0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義脂肪肝患者的SVR率為500％，無(wú)脂肪肝患者的SVR率為853％，兩者比較X2值22629，P＜0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以治療前病毒載量小于等于510G10拷貝ML為界分兩組，病毒載量低的SVR率為933％，病毒載量高的SVR率為619％，兩組比較X2值34849，P＜0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義對(duì)比231例丙型肝炎患者治療開(kāi)始前SVR組與非SVR組的ALT、AST和白細(xì)胞水平，T值分別為0652，0449和0062，P值分別為0850，0654和0951，差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療前ALT，AST，WBC水平與SVR無(wú)關(guān)分別將三項(xiàng)生化指標(biāo)進(jìn)行分層，其中ALT以小于等于60UL，AST以小于等于70UL，白細(xì)胞以小于等于6109為分界，對(duì)比各層SVR率，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果，X2值分別為2398，0247和2235，P值分別為0122，0619和0135，各項(xiàng)指標(biāo)各分層之間SVR率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ALT，AST，白細(xì)胞與丙肝患者治療結(jié)束時(shí)獲得SVR率之間沒(méi)有明顯關(guān)系。4、病毒載量不同基因型之間HCV病毒載量不相同。其中1型（主要為1B亞型）的病毒載量明顯高于2型和3型。5、基因型不同基因型之間肝病程度不同，1B亞型病例中進(jìn)展為肝硬化和肝癌的比例高于其他基因型。6、藥物不良反應(yīng)藥物引起的主要不良反應(yīng)中，發(fā)熱、乏力、頭痛、白細(xì)胞降低等不良反應(yīng)出現(xiàn)的機(jī)率最大，不同基因型之間不良反應(yīng)的發(fā)生率差別不大，不同基因型之間ALT，AST，WBC差別不大。結(jié)論1、邢臺(tái)地區(qū)流行的丙型肝炎基因型以1B亞型為主，其次為2A亞型。丙肝患者治療過(guò)程中基因型、RVR、CEVR能較好地預(yù)測(cè)SVR患者性別、年齡、是否肝硬化或脂肪肝以及治療前病毒載量都與病人治療結(jié)束時(shí)能否獲得SVR有關(guān)。2、不同基因型患者性別，RNA病毒載量，SVR及導(dǎo)致肝硬化肝癌率比較存在明顯不同，丙肝患者治療前進(jìn)行基因型分析對(duì)患者治療，預(yù)后及指導(dǎo)用藥有重要臨床意義?；蛐团c治療不良反應(yīng)的關(guān)系不密切。3、丙型肝炎患者治療前進(jìn)行基因分型，治療中動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)HCV病毒載量，積極防治不良反應(yīng)發(fā)生，能使治療的療效最大化。