簡(jiǎn)介：貴州大學(xué)2015屆碩士研究生學(xué)位論文屆碩士研究生學(xué)位論文貴州省仔豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查貴州省仔豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)基因分析及相關(guān)基因分析學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向研究方向獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)導(dǎo)師師王開功教授指導(dǎo)小組指導(dǎo)小組文明教授周碧君教授程振濤副教授溫貴蘭副教授研究生毛黎紅生毛黎紅中國(guó)﹒貴州﹒貴陽(yáng)2015年6月密級(jí)分類號(hào)S8513論文編號(hào)201501031966貴州省仔豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)基因分析貴州省仔豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)基因分析目錄中文摘要中文摘要IABSTRACTIII英文縮略表英文縮略表VI文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述1試驗(yàn)研究試驗(yàn)研究12第一章第一章PEDV、TGEV和RVRTPCR檢測(cè)方法建立與臨床應(yīng)用檢測(cè)方法建立與臨床應(yīng)用121材料材料1211疫苗與試劑1212主要儀器122方法方法1321引物設(shè)計(jì)1322PEDV、TGEV和RV三聯(lián)疫苗總RNA的提取1323PEDV、TGEV和RVRTPCR方法建立1424PEDV、TGEV、RVRTPCR檢測(cè)方法驗(yàn)證153結(jié)果結(jié)果1631PEDV、TGEV和RVRTPCR方法優(yōu)化1632PEDV、TGEV和RVRTPCR方法驗(yàn)證1733PEDV、TGEV和RVRTPCR方法臨床應(yīng)用194討論2141關(guān)于豬病毒性腹瀉主要病原確診2142關(guān)于豬病毒性腹瀉檢測(cè)方法22第二章第二章貴州省仔豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查貴州省仔豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查231材料材料2311血清、病料樣本采集2312主要實(shí)驗(yàn)試劑2313主要實(shí)驗(yàn)儀器242方法方法2421仔豬病毒性腹瀉發(fā)病狀況調(diào)查2422仔豬病毒性腹瀉臨床癥狀調(diào)查2423仔豬病毒性腹瀉大體病變觀察2424PEDV、TGEV和RV血清抗體檢測(cè)2525PEDV、TGEV和RV病原核酸檢測(cè)253結(jié)果結(jié)果2531仔豬腹瀉發(fā)病情況調(diào)查結(jié)果2532仔豬腹瀉臨床癥狀調(diào)查結(jié)果2833仔豬腹瀉大體病變觀察2834PEDV、TGEV和RV血清抗體檢測(cè)2935PEDV、TGEV和RV病原核酸檢測(cè)3236PEDV、TGEV和RV混合感染情況檢測(cè)結(jié)果33

簡(jiǎn)介：】LILLLLLILLLLIILLLLLⅢY3291963密級(jí)論文編號(hào)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒抑制B2M基因表達(dá)的分子機(jī)制及其生物學(xué)意義MECHANISMANDSIGNIFICANCEOFINHIBITIONOFB2MGENEEXPRESSIONBYHIGHLYPATHOGENICPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYSYNDROMEVIRUS博士研究生齊鵬飛指導(dǎo)教師馬志永研究員申請(qǐng)學(xué)位類別農(nóng)學(xué)博士業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)方向人畜共患病及獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)單位上海獸醫(yī)研究所研究生院2016年5月究養(yǎng)專研培SECRECYNOCHINESEACADEMYOFAGRICULTURALSCIENCESDISSERTATIONMECHANISMANDSIGNIFICANCEOFINHIBITIONOFB2MGENEEXPRESSIONBYHIGHLYPATHOGENICPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYSYNDROMEVIRUSPHDCANDIDATEPENGFEIQISUPERVISORPROFZHIYONGMAMAJORPREVENTIVEVETERINARYMEDICINESPECIALTYZOONOSESANDVETERINARYPUBLICHEALTHMAY2016

簡(jiǎn)介：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬流感病毒的分離鑒定、生物學(xué)特性及HA基因的克隆與序列分析姓名柴春霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)指導(dǎo)教師夏平安崔保安20080601致謝轉(zhuǎn)眼聞在河南農(nóng)大攻讀碩士三年時(shí)光已經(jīng)過去導(dǎo)師夏平安副教授和崔保安教授‘在我的學(xué)習(xí)、生活和工作中給予了無(wú)微不至的關(guān)懷和幫助。導(dǎo)師高尚的思想修養(yǎng)，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，求實(shí)開拓的創(chuàng)新精神及熱情待人、嚴(yán)于律己的生活作風(fēng)，淵博的知識(shí)，將成為我的動(dòng)力和努力的方向，使我終身受益，至論文完成之際，謹(jǐn)向恩師致以最崇高的敬意和最衷心的感謝I感謝導(dǎo)師組寧長(zhǎng)申教授、張龍現(xiàn)教授、王川慶教授、張改乎研究員、李文剛教授、許蘭菊教授、陳陸副教授、賀秀嬡副教授及其他各位老師在完成學(xué)習(xí)任務(wù)和課題研究中對(duì)我的指導(dǎo)和裁助，在此致以最誠(chéng)摯的謝意感謝傳授我知識(shí)的全體老師感謝研究生處的領(lǐng)導(dǎo)和老師感謝牧醫(yī)工程學(xué)院的領(lǐng)導(dǎo)和老師L衷心感謝陳紅英老師和邱妍博士等在試驗(yàn)操作過程中給予我的熱情幫助和耐心指導(dǎo)，以及論文寫作中給予的建議和指導(dǎo)，使我的試驗(yàn)進(jìn)展和論文寫作得以順利完成。感謝張紅英老師、王亞賓老師、陳麗穎老師、魏戰(zhàn)勇老師、楊明凡老師、楊霞老師、金鉞老師三年來(lái)的幫助和關(guān)心L向哺育和培養(yǎng)我的母校和傳授我知識(shí)的全體老師致以崇高的敬意感謝研究生處、院黨總支的領(lǐng)導(dǎo)和老師三年來(lái)對(duì)我的關(guān)心和幫助感謝試驗(yàn)過程中給予我無(wú)私幫助共同進(jìn)步的黨占國(guó)、王建舉、尹彥濤、王保利同學(xué)和牧醫(yī)工程學(xué)院05級(jí)全體碩士研究生。感謝師姐閬海范、胡梅，師兄趙現(xiàn)敏，師妹李素萍、李偉娟、劉明莉、程金萍、張風(fēng)華、趙琳，師弟邱璜、盧高峰、王中明、李鵬、劉磊、劉玉松、范旭、徐鴻運(yùn)對(duì)試驗(yàn)的順利進(jìn)行提供的無(wú)私幫助I讓我再一次對(duì)夏平安老師三年的教育之恩表示虔誠(chéng)的謝意。祝恩師家庭和睦，身體健康，工作順心。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)碩士學(xué)術(shù)碩士學(xué)術(shù)學(xué)位論文學(xué)位論文河南省豬流行性腹瀉病毒流行病學(xué)調(diào)查及CHHENZZ株培養(yǎng)特性研究ETIOLOGICALINVESTEGATIONOFPCINEEPIDEMICDIARRHEAVIRUSINHENANPROVINCETHECULTIVATIONACTERISTICSOFPEDVISOLATEDSTRAINCHHENZZ2015年06月學(xué)位申請(qǐng)人學(xué)位申請(qǐng)人周兵強(qiáng)周兵強(qiáng)指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師吳志明吳志明研究員研究員一級(jí)學(xué)科一級(jí)學(xué)科獸醫(yī)學(xué)獸醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科二級(jí)學(xué)科基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)學(xué)位類別學(xué)位類別農(nóng)學(xué)碩士農(nóng)學(xué)碩士獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得河南科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的其他學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名日期關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解河南科技大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校擁有對(duì)所有學(xué)位論文的復(fù)制權(quán)、傳播權(quán)、匯編權(quán)及其它使用權(quán)（特殊情況需要保密的論文應(yīng)提前說(shuō)明，但在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定）。需要保密的論文請(qǐng)?zhí)顚懕緦W(xué)位論文在年月至年月期間需要保密，解密后適用本授權(quán)書。（需要保密的學(xué)位論文無(wú)須向圖書館提供論文的電子文檔）研究生簽名導(dǎo)師簽名日期

簡(jiǎn)介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文雞傳染性支氣管炎病毒2006～2007年?yáng)|北地區(qū)分離株分子流行病學(xué)研究姓名張琳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師李書華20080620ABSTRACTSMSII葛MOLECULAREPIDEMIOLOGYOFTHEINFECTIOUSBRONCHITISVIRUSISOLATEDINNORTHEASTOFCHINABETWEEN2006AND2007ABSTRACTTHEBIOLOGICALCHARACTERISTIESOFNINEAVIANINFECTIOUSBRONCHITISVIRUSESFIBVWEREISOLATEDFROMOUTBREAKSINCHICKENSINTHENORTHEASTPROVINCESOFCHINABETWEEN2006AND2007WEREANALYZEDSTRUCTURALPROTEINGENESWERECLONED，SEQUENCEDANDCOMPAREDWITHIBVREFERENCESTRAINSILLORDERTOTRACETHESOURCEOFNORTHEASTPROVINCESIBVISOLATESTODETERMINEIBVGENOTYPESEXISTINNORTHEASTPROVINCESANDTHEPHYLOGENETIERELATIONSHIPSBETWEENNORTHEASTPROVINCESISOLATES’ANDREFERENCESTRAINS、TYPICALSIGNSINCLUDINGSTUNTING，CURLINGANDDEATHOFEMBRYOWEREOBSERVEDINTHESIXTHTOTENTHPASSAGESWHENEACHOFTHENINEISOLATESWASINOCULATEDINTO9DAYOLDTO11DAYOLDSPECIFICPATHOGENFREESPFCHICKENEMBRYOSFURTHERMORETHENINEISOLATESCOULDNOTHEMAGGLUTINATESCHICKENREDBLOODCELLSDIAGNOSESBASEDONELECTRONMICROSCOPYEXAMINATIONPERFORMEDONALLANTOICFLUIDSOFDIFFERENTPASSAGESSHOWEDALLNINEISOLATESHADTYPICALCORONAVIRUSMORPHOLOGYVIRIONSENVELOPED，SLIGHTLYPLEOMORPHIC，SPHERICAL，80NM一120HMINDIAMETERSURFACEPROJEETIONSOFENVELOPEDISTINCTCLUBSHAPED，SPACEDWIDELYAPARTANDDISPERSEDEVENLYOVERALLTHESURFACE、ACOORDINGTOTHENDVINTERFERENCETESTALLTHENINEISOLATESHADOBVIOUSINHIBITORYEFFECTTOTHENDVLASOTASTRAIN勱EABOVERESULTSELEMENTARILYSUGGESTEDTHATTHENINEVIRUSESISOLATEDINTHISSTUDYWEREAVIANINFECTIOUSBRONCHITISVIRUSESTHESTRUCTURALPROTEINGENESWHICHWERETHEMOSTVARIOUSINIBVGENOMEOFTHENINEISOLATESWEREAMPLIFIEDBYREVERESETRANSCRIPTASEPOLYMERASECHAINREACTIONANDTHEYWEREPROVEDTOBEIBVBVCLONINGSEQUENCINGANDANALYSISWITHCOMPARISONOFOTHERSTRAINSSUCHASTHEH120WHICHISAREFERENCEVACCINESTRAIN，ALLTHERESULTSSHOWEDTHATALLTHENINESTRAINSISOLATEDFROMTHENORTHEASTPROVINCESWEREIBVPHYLOGENICANALYSISBASEDONSLGENESEQUENCESSHOWEDTHATNINEISOLATESHAVE761％T0994％NUCLEOTIDEIDENTITYFROMEACHOTHERAMONGHLJ0605，HLJ0708，JL0712，LN071001ANDTL0608THES1GENENUCLEOTIDEIDENTITYWEREFROM9690ATO979％；ANDHLJ075L，HU0752，LN071002MDJ0610HADS1GENENUCLEOTIDEIDENTITYFROM969％T0995％HLJ0752MDJ0610ANDLN071002HADHIGHS1GCNENUCLEOTIDEIDENTITYBETWEENHLJ0752ANDMDJ0610IDENTITYWERE994％HLJ0752ANDUN071002HAD995％NUCLEOTIDEIDENTIYBETWEENMDJ0610ANDLN071002THEIDENTITYWASABOUT988％BUTAMONGHU0605，HLJ0708，幾0712，LN071001。TL0608ANDHU075L。HLJ0752，LN071002。L、缸J0610THENUCLEOTIDEIDENTITYWASLOWFROM761％T0793％ACOORDINGTOTHETHERESULTSOFTHESERUMNEUTRALIZATIONTESTANDTHEPHYLOGENETICTREE，THECONCLUSIONWASASFOLLOWSTHESEQUENCEIDENTITYANDTHEPHYLOGENETICRELATIONSHIPSBETWEENTHEGENESDERIVEDFROMTHE9ISOLATESANDOTHER38REFERCNCESTRAINSINDICATEDTHATIBVISOLATESOFCHINAANDWORLDWIDEWEREBRANCHEDINTOEIGHTGENETICCLUSTERSIBVISOLATESINNORTHEASTPROVINCESWERECLASSIFIEDINTO1，4，8GENETICCLUSTERSTHUS。ITCANBEDEMONSTRATEDTHATNOTONLYPOINTMUTATIONS。INSERTIONSANDDELETIONSBUTALSOARECOMBINATIONEVENSHAVINGCONTRIBUTEDTOTHEGENETICDIVERSITYANDEMERGENCYOFIBVVARIANTSINNORTHEASTPROVINCESINCHINATHATARETHEMAINREASONCAUSINGTHEVARIATIONOFTHEIBVSTRAINSKEYWORDSAVIANINFECTIOUSBRONCHITISVIRUS；NORTHEASTPROVINCESIBVISOLATESSPIKEPROTEINGENE；GENETICVARIATIONIII

簡(jiǎn)介：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文中國(guó)2007年部分地區(qū)雞傳染性支氣管炎病毒分子流行病學(xué)研究姓名劉喬然申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師劉勝旺20080601和97．1％。但通過SI基因核螢酸及推導(dǎo)氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)C剛CH，LHLJ／07VLISL基岡核螢酸存在18個(gè)特異性位點(diǎn)的點(diǎn)突變幣¨15個(gè)氨基酸的替換。這表明，在免疫雞群中很難重新分離到疫苗株，由于我國(guó)長(zhǎng)期使用弱毒疫苗，致使某些毒株在免疫壓力下發(fā)生了點(diǎn)突變。但MASS型流行株在我國(guó)長(zhǎng)期存在并流行，因此MASS型疫苗仍有應(yīng)用的必要性。關(guān)鍵詞雞傳染性支氣管炎病毒，中國(guó)分離株，分子流行病學(xué)IL

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R446密級(jí)公開單位代碼10422學(xué)號(hào)2013120103⑧∥菇辦孑博士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位論文題目豬博卡病毒類病毒顆粒的表達(dá)以及在流行病學(xué)方面的應(yīng)用VIRUSLIKEPARTICLESOFPORCINEBOCAVIRUSGENERATEDBYRECOMBINANTBACULOVIRUSESCANBEAPPLIEDTOSEROEDIDEMICSTUDIESSEROEDLDEMLCSTUDLES作者姓名學(xué)院名稱張文靜醫(yī)學(xué)院專業(yè)學(xué)位名稱臨床醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師王傳新教授合作導(dǎo)師李天成高級(jí)主任研究官2016年5月10日目錄L中文摘要’12英文摘要63符號(hào)說(shuō)明114正文一前言12一日U舌L么二資料與方法‘15三結(jié)果’23四討論‘25五結(jié)論’27六附圖‘29七參考文獻(xiàn)34八綜述’406致謝‘437攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄488學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況499外文論文50

簡(jiǎn)介：甜莢號(hào)S82鰱塑UDC。四川農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文密級(jí)學(xué)號(hào)?！幌U投監(jiān)QL牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測(cè)、流行病學(xué)研究及J分離株E2基因的克隆表達(dá)鐘發(fā)剮、指導(dǎo)教師姓名T程安謄’教授四川農(nóng)業(yè)大學(xué)。王新華研究員C新疆農(nóng)星科學(xué)院申謂學(xué)位級(jí)另旺J監(jiān)J專業(yè)名稱甄瞳蛀匿堂論文提交目期2鯉G生生苴簽臣論文答辯日期2堂8生且學(xué)位授予單位和日期酉2哇壅些盔堂2塑8笙旦簪辯委員會(huì)主席整曼匠熊茲擐評(píng)閱二人盎跫建茁擐苤唇強(qiáng)越援置盎拯夔攫’皇墓僮越接囂掛塹越援，?！??！薄?’J2008年6月肽和全長(zhǎng)E2蛋白的真核重組質(zhì)粒PVAXL一E2；經(jīng)過PCR、酶切及測(cè)序表明PPROEXHTAE2和PVAXL一E2重組表達(dá)載體構(gòu)建成功。將PPROEXHTAE2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5、JML09和BL21并誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)目的蛋白用SDSPAGE檢測(cè)，目的蛋白沒有表達(dá)；用GENESCORT佃試劑轉(zhuǎn)染PVAXL一E2質(zhì)粒、PGFP質(zhì)粒陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照到B呱一2L細(xì)胞，PGFP質(zhì)粒表達(dá)檢測(cè)表明，綠色熒光蛋白得到了一定的表達(dá)，間接證明目的載體轉(zhuǎn)染后瞬時(shí)表達(dá)，但在PVAXLE2質(zhì)粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)上清中用SDSPAGE檢測(cè)沒有檢測(cè)到表達(dá)的目的蛋白。對(duì)E2基因應(yīng)用軟件預(yù)測(cè)及序列分析，構(gòu)建了含有不同抗原表位I118一144340一100300一1345的PET28AEDI、PET28AED2、PET28AED3、PET28AED4四個(gè)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌并誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá)，SDSPAGE電泳檢測(cè)結(jié)果顯示所表達(dá)出了E2A、E2B、E2C、E2D融合蛋白相對(duì)分子量分別為186KDA、282KDA、292KDA、438KD，與預(yù)測(cè)蛋白分子量大小一致。WESTERNBLOT分析結(jié)果表明，所表達(dá)的融合蛋白E2B、E2C、E2D被?？笲VDV陽(yáng)性血清識(shí)別。選擇PET28AED4質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌并誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá)，并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了純化。通過方陣滴定法初步建立了檢測(cè)BVDV血清抗體的間接EIISA方法，對(duì)收集的約43份血清樣品進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果與進(jìn)口試劑盒檢測(cè)結(jié)果符合率達(dá)到9355％，證明了所表達(dá)的重組蛋白作為包被抗原檢測(cè)牛病毒性腹瀉病毒血清抗體是可行的，為試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)化奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞牛病毒性腹瀉病毒，抗原捕獲ELISA，分子流行病學(xué)，E2基因，克隆表達(dá)4

簡(jiǎn)介：揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文Ⅰ群禽腺病毒的分離鑒定和生物學(xué)特性研究及重組禽腺病毒的構(gòu)建姓名張明明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師秦愛建20080501揚(yáng)州大學(xué)博士論文了這些分離到的禽腺病毒屬于I群禽腺病毒。同時(shí)，禽腺病毒在雞群、鴨群、鵝群中非常普遍，有必要對(duì)這些病毒的生物學(xué)特性進(jìn)行研究。為了更好的了解分離株的生物學(xué)特性以便探討其作為活病毒疫苗載體的可能性，通過病毒凝集實(shí)驗(yàn)、電鏡形態(tài)觀察、細(xì)胞病變、動(dòng)物攻毒實(shí)驗(yàn)等方法對(duì)上述疑為I群禽腺病毒3個(gè)分離株進(jìn)行了研究。電鏡觀察病毒粒子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)病毒為球型、無(wú)囊膜，直徑為7080衄，具有腺病毒典型的二十面體結(jié)構(gòu)。紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)證明，分離到的病毒均不能凝集雞的紅細(xì)胞，與I群禽腺病毒的特征一致。細(xì)胞培養(yǎng)表明病毒分離株不能引起雞胚成纖維細(xì)胞CEF的細(xì)胞病變，而在雞胚腎細(xì)胞CEK上可以產(chǎn)生典型的禽腺病毒的細(xì)胞病變，表現(xiàn)為細(xì)胞變圓，折光性增強(qiáng)等病變。雞胚接種試驗(yàn)未見明顯肉眼可見的病變，雞胚生長(zhǎng)發(fā)育正常，這與I群禽腺病毒分離株CELOV的特性不完全一致。通過大劑量皮下注射和口服兩種途徑接種1日齡的SPF雞，進(jìn)行人工致病性試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)雞在感染病毒后，未出現(xiàn)任何明顯臨床癥狀。在10日齡時(shí)，皮下注射和口服攻毒的小雞的體重都明顯輕于對(duì)照組，而在20、30日齡時(shí)，各組和健康對(duì)照組之間體重沒有明顯差異，表明該分離株對(duì)SPF雞的體重影響不大，呈一過性。在10日齡時(shí)，攻毒組小雞主要免疫器官重量略低于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)后期各組免疫免疫器官的重量基本一致。組織病理學(xué)切片觀察結(jié)果表明，部分臟器有輕微病變，大部分臟器基本沒有病變，后期組織器官均正常。這表明該病毒對(duì)免疫器官?zèng)]有明顯的生長(zhǎng)抑制和可見的病理?yè)p傷。以上體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均表明病毒分離株致病性低，生物安全性高，可能是較好的禽腺病毒載體。前期研究中篩選了FAV二JS的復(fù)制非必需區(qū)，將CMV調(diào)控外源基因表達(dá)的表達(dá)盒插入的禽腺病毒FAVJS株左右臂構(gòu)建了通用轉(zhuǎn)移載體PFACMV31。在此研究基礎(chǔ)上，從本實(shí)驗(yàn)室分離的所有禽腺病毒中選擇ⅣⅣJS進(jìn)行重組禽腺病毒的構(gòu)建。本研究根據(jù)CELOV全基因序列設(shè)計(jì)引物，從Ⅳ胴JS基因組中PCR擴(kuò)增出腺病毒的主要晚期啟動(dòng)子MLP，將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測(cè)序，并與CELOV的MLP進(jìn)行了序列比較，兩者同源性為99％。在此基礎(chǔ)上，將FAVIJS株MLP片段克隆至PCD№鎢1，ZE0，然后再將PFACMV31中含有部分L片段和完整R片段的瑚R片段克隆至同一PCDNA31／ZE0中，隨后將含有MLP片段、部分L片段和完整R片段的大片段克隆至PFACMV31，將PFACMV31中的CMV啟動(dòng)子替換為MLP啟動(dòng)子，而其它部分不變，從而構(gòu)建了MLP啟動(dòng)子控制的通用轉(zhuǎn)移載體PFAMLP31。在此基礎(chǔ)上插入EGFP報(bào)告基因，構(gòu)建了MLP啟動(dòng)子控制表達(dá)EGFP的

簡(jiǎn)介：分類號(hào)望3曼魚密級(jí)公玨單位代碼10086學(xué)號(hào)20132100177黃淮海地區(qū)重組型大豆花葉病毒的侵染性與生物學(xué)特性分析PATHOGENICITYANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFRECOMBINANTSOYBEANMOASICVIRUSINTHEHUANGHUAIHAI學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師學(xué)科專業(yè)學(xué)位類別授予單位答辯日期林靜謝令琴研究員張盂臣研究員遺傳學(xué)理學(xué)碩士河北農(nóng)業(yè)大學(xué)二。一六年五月二十九日摘要大豆花葉病毒SOYBEANMOSAICVIRES，SMV病是一種世界性的病毒性病害，在各大豆產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，嚴(yán)重影響大豆的產(chǎn)量和商品價(jià)值。病毒的變異、重組是新病毒產(chǎn)生、寄主范圍改變以及致病性變化的重要原因。了解病毒信息，明確病毒的致病性，對(duì)防控病毒的大面積流行有著重要的作用。重組型SMV是2011年YANG等從重慶大豆產(chǎn)區(qū)發(fā)現(xiàn)的一種新型SMV病毒類型，目前對(duì)于這種新型SMV類型的系統(tǒng)性研究還未開展，新型SMV的出現(xiàn)也使大豆病害防治和抗病育種工作面臨新的挑戰(zhàn)。本研究目的是在發(fā)現(xiàn)重組型SMV的基礎(chǔ)上調(diào)查黃淮海地區(qū)SMV的組成情況，通過分離純化獲得重組型SMV分離物，并對(duì)其進(jìn)行全基因組測(cè)序，分析其系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分類和地位；選取一些國(guó)內(nèi)外的大豆品種，利用重組型SMV進(jìn)行抗性鑒定，分析其致病性和侵染力與非重組型SMV差異；構(gòu)建感染重組型SMV的模式作物的酵母雙雜文庫(kù)，奠定深入研究重組型SMV侵染機(jī)制的物質(zhì)平臺(tái)。具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下1從黃淮海地區(qū)共采集357份病樣，利用DSAELISA和RTPCR兩種方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示162份病樣呈SMV陽(yáng)性，檢出率為454％。其中，83份病樣僅檢測(cè)出非重組型SMV，7份病樣僅檢測(cè)出重組型SMV，其余72份病樣均檢測(cè)出兩種類型SMV。此外，重組型SMV在河北省、安徽省及北京市的大豆產(chǎn)區(qū)均有分布。在162個(gè)SMV樣品中，含非重組型SMV的病樣占比956％，含重組型SMV的病樣占比487％；結(jié)果表明黃淮海SMV病害仍以非重組型SMV為主，但重組型SMV也廣泛分布，需要進(jìn)一步關(guān)注。2利用菜豆品種TOPCROP采用枯斑分離的方式獲得了一個(gè)來(lái)源于河北省的重組型SMV分離物HBRS。利用RTPCR方法對(duì)其進(jìn)行全基因組擴(kuò)增和測(cè)序結(jié)果顯示，HBRS除POLYA尾巴外，由9993個(gè)核苷酸組成，翻譯后形成3202個(gè)氨基酸，比非重組型SMV分離物SC6多出135個(gè)氨基酸。系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果顯示，除重組類型SMV外，HBRS與SC6親緣關(guān)系最近。其中，HBRS的5’UTR與P1的2／3N端與BCMV同源性最高，其余均與SMV同源性最高。研究結(jié)果表明，HBRS仍屬于SMV一種，是由BCMV和SMV在P1編碼區(qū)重組而來(lái)。3選取15份以往抗性鑒定中表現(xiàn)較好的大豆品種，利用人工接種的方法鑒定對(duì)HBRS抗性表現(xiàn)，結(jié)果顯示對(duì)HBRS表現(xiàn)免疫、中抗和感病的材料分別有5份，1份和8份。進(jìn)一步選取其中4個(gè)抗感層次不同的品種進(jìn)行接種SC6后對(duì)比分析，并利用QRTPCR方法對(duì)兩種類型的SMV在大豆葉片中的濃度積累進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，癥狀上SC6侵染寄主后容易形成壞死斑，HBRS則主要以輕花葉為主；但HBRS在4個(gè)大豆品種中病毒積累濃度卻顯著高于SC6，結(jié)果表明HBRS對(duì)大豆更具有侵染性，但致病力較SC6弱。4以可系統(tǒng)侵染本氏煙的重組型SMV分離物HBRS為毒源，構(gòu)建感染HBRS本氏煙的酵母雙雜CDNA文庫(kù)。利用SMART技術(shù)獲得本氏煙的雙鏈CDNA

簡(jiǎn)介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文表達(dá)豬輪狀病毒VP4基因和共表達(dá)VP4與LTB重組乳酸菌表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及其免疫學(xué)評(píng)價(jià)姓名喬薪瑗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師李一經(jīng)20080620丕北農(nóng)業(yè)大堂農(nóng)學(xué)博士堂位論文PNZ8L12VP4LTB。每只小鼠分別免疫109CCU單位的重組菌，每次連續(xù)免疫三天，第一次加強(qiáng)免疫在第一次免疫后的17、18、19天，第二次加強(qiáng)免疫在第一次免疫后的33、34、35天。每次免疫后的第7天收集小鼠血清；每次免疫后的L、2、7天收集糞便；眼洗液是在每次免疫后的第7天以50皿的PBS沖洗眼結(jié)膜獲得；陰道洗液是在每次免疫后的第7天用200此的PBS沖洗陰道獲得；母鼠分娩后的3、5、7天收集乳汁。所有收集的樣品保存于20℃?zhèn)溆?。為保持黏膜系統(tǒng)的穩(wěn)定，許多防御機(jī)制都參與進(jìn)行持久有效地作用。分泌性IGA的參與也是防御機(jī)制之一，IGA抗體通過阻止病原微生物的入侵和定植并競(jìng)爭(zhēng)受體和代謝底物。為評(píng)價(jià)黏膜免疫反應(yīng)，通過ELISA方法來(lái)檢測(cè)黏膜樣品中特異性IGA抗體的水平。在糞便、眼洗液和陰道洗液中我們檢測(cè)到了高水平的特異性IGA，與對(duì)照組相比差異顯著。其中免疫PPG1VP4的小鼠中特異性IGA抗體水平高于免疫PNZ8112VP4的小鼠，免疫PPG1VP4LTB的小鼠中特異性IGA抗體水平也高于免疫PNZ8L12Ⅵ4LTB的小鼠，這是因?yàn)長(zhǎng)EMEI393同LACTOCOCCUSLACFISNZ9000相比具有更好的腸道定植能力。免疫PPO1VP4LTB和PNZ8112VP4LTB的小鼠糞便、眼洗液和陰道樣品中IGA抗體水平均高于免疫PPG1VP4和PNZ8112一VP4的小鼠。這是由于添加了黏膜免疫佐劑LTB的緣故，表明LTB能加強(qiáng)黏膜系統(tǒng)反應(yīng)。具有低免疫原性的疫苗尤其需要強(qiáng)有力的佐劑來(lái)加強(qiáng)抗原遞呈，本研究證明LTB作為一種安全有效的佐劑具有極大的潛力。免疫PPG1VP4和PPG1VP4LTB的小鼠血清中IGG的效價(jià)相當(dāng)，但都高于免疫PPG1的對(duì)照組。免疫PNZ8112Ⅵ4和PNZ8112VP4LTB的小鼠血清中IGG抗體的效價(jià)相當(dāng)，但都高于免疫PNZ8112的對(duì)照組。在本研究中，口服免疫表達(dá)VP4和Ⅵ，4LTB的重組乳酸菌不僅能誘導(dǎo)產(chǎn)生黏膜免疫，而且誘導(dǎo)產(chǎn)生了系統(tǒng)免疫。通過口服免疫產(chǎn)生的黏膜免疫反應(yīng)不只局限于胃腸道，也引起了其他黏膜部位的免疫反應(yīng)。IGA抗體能和抗原結(jié)合并阻止其進(jìn)入，降低炎性反應(yīng)的程度，從而阻止了對(duì)組織的損傷，通過分泌性IGA抗體在黏膜表面對(duì)病原體進(jìn)行排斥和清除，這對(duì)預(yù)防輪狀病毒感染是至關(guān)重要的。將新分離的免疫鼠脾細(xì)胞稀釋成5X106個(gè)／ML并培養(yǎng)66H，分別用O59∥ML，59∥RNL和25∥ML的VP4抗原進(jìn)行刺激，收獲培養(yǎng)上清用于檢測(cè)細(xì)胞因子。脾淋巴細(xì)胞的增殖通過ELISA進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明05舭和5L酌NL的VP4與259∥ML的VP4相比，具有更強(qiáng)的刺激增殖作用。IL4和IFN吖的檢測(cè)采用BIOSOURCE檢測(cè)試劑盒，方法參照說(shuō)明書。結(jié)果表明免疫組中IL4和IFN吖的分泌顯著高于對(duì)照組，組間差異顯著，且分泌IL4的水平顯著高于IFN吖。這些數(shù)據(jù)表明，通過口服途徑免疫重組菌后引起了顯著的細(xì)胞因子反應(yīng)，從而加強(qiáng)了抵抗輪狀病毒感染的保護(hù)作用。免疫母鼠產(chǎn)仔后的3、5、7天收集乳汁，通過ELISA方法檢測(cè)乳汁中的特異性抗體，結(jié)果顯示乳汁樣品中有較高水平的特異性IGA，表明免疫重組菌產(chǎn)生的抗體對(duì)于幼齡動(dòng)物的被動(dòng)免疫保護(hù)有一定作用。綜上所述，本研究所獲得的結(jié)果表明，乳酸乳球菌和干酪乳桿菌可用做口服免疫傳遞抗原引起黏膜和系統(tǒng)免疫。乳酸菌作為疫苗傳遞載體能夠定植于不同的黏膜部位，例如胃腸道、生殖道等，可被用于接種在病原體入侵的部位來(lái)抵抗感染。乳酸菌安全無(wú)毒的特點(diǎn)使它們更適合于用做口服疫苗載體來(lái)傳遞異源抗原，重組乳酸菌具有較好的免疫原性，并能引起較好Ⅱ

簡(jiǎn)介：論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特IIII以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名問水20J1年6月F二日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容?？诒菊撐牟槐Ｃ??？诒菊撐谋Ｃ?，在一年解密后適用本授權(quán)。請(qǐng)?jiān)谝陨峡趦?nèi)劃“4”研究生簽名I刁術(shù)導(dǎo)師簽名工驢垃胗弓月、D。／年年6，占馴糾四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文與PKR轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異。結(jié)果表明GOTLR7與GORIGI在體外參與了抗H9N2流感病毒感染的免疫反應(yīng)，并誘導(dǎo)抗病毒小分子的產(chǎn)生。GPV感染PBMC后，GOTLR21與其他免疫相關(guān)基因均無(wú)顯著性變化，我們猜測(cè)可能是由于GPV病毒需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能引起TLR21受體的識(shí)別，從而產(chǎn)生抗病毒因子，本實(shí)驗(yàn)作用時(shí)間為8小時(shí)不能有效的誘導(dǎo)宿主經(jīng)由TLR21的抗病毒反應(yīng)。為了進(jìn)一步探討GOTLR7與GOTLR21是否具有抗病毒免疫學(xué)活性，我們構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒PEGFPC1GOTLR7與PDSREDLN1GOTLR21并轉(zhuǎn)染傳代雞胚成纖維細(xì)胞DF110H，然后孵育新城疫病毒NEWCASTLEDISEASEVIRUS，NDV，經(jīng)絕對(duì)定量PCR反應(yīng)及病毒滴度檢測(cè)而觀察轉(zhuǎn)染GOTLR7與GOTLR21質(zhì)粒是否對(duì)DF1細(xì)胞中NDV的增殖或復(fù)制存在影響。GOTLR7與GOTLR21真核表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染DFL細(xì)胞，而后孵育NDV病毒，研究結(jié)果顯示孵育NDV病毒12H后轉(zhuǎn)染有GOTLR7細(xì)胞中NDV的復(fù)制受到顯著的抑制，而轉(zhuǎn)染GOTLR21并未對(duì)病毒增殖造成影響；孵育NDV病毒24H時(shí)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的病毒拷貝數(shù)均有所上升，但是轉(zhuǎn)染GOTLR7組中NDV拷貝數(shù)及TCIDS0數(shù)值均顯著低于對(duì)照組，而轉(zhuǎn)染GOTLR21組中病毒增殖情況與對(duì)照組比較仍無(wú)顯著差異。因此，本實(shí)驗(yàn)再次驗(yàn)證GOTLR7參與抗RNA病毒免疫反應(yīng)，并能抑制RNA病毒NDV的復(fù)制，而GOTLR21并不參與此反應(yīng)。大量研究表明哺乳動(dòng)物抗病毒TLR分布于細(xì)胞內(nèi)的核內(nèi)體。為了驗(yàn)證禽類抗病毒TLR的細(xì)胞分布，我們將真核表達(dá)質(zhì)粒PEGFPC1GOTLR7分別轉(zhuǎn)染DFL、GEF與BHK21。24H后對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色發(fā)現(xiàn)GOTLR7在DF1、BHK21與GEF上的細(xì)胞定位不同，具體表現(xiàn)為DF1和BHK21細(xì)胞中GOTLR7熒光信號(hào)集中分布于細(xì)胞核一側(cè)，呈現(xiàn)極化狀態(tài)；而GEF細(xì)胞上GOTLR7熒光信號(hào)圍繞分布于細(xì)胞核周圍，非分布于細(xì)胞核一側(cè)。我們分別采集PEGFPC1GOTLR7轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞24H、48H與72H時(shí)的圖片發(fā)現(xiàn)GOTLR7的細(xì)胞定位隨表達(dá)時(shí)間發(fā)生了變化，具體表現(xiàn)為24H時(shí)，GOTLR7分布于細(xì)胞核的一側(cè)，而在48H及72H，GOTLR7綠色熒光集中分布于遠(yuǎn)離細(xì)胞核的胞質(zhì)內(nèi)，呈現(xiàn)球形，推測(cè)其定位于某細(xì)胞器。將真核表達(dá)質(zhì)粒PDSREDLN1GOTLR21分別轉(zhuǎn)染DF1、GEF、MDCK與BHK21。24H后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，發(fā)現(xiàn)在不同細(xì)胞類型上GOTLR21分布特征一致，均表現(xiàn)為緊緊圍繞于細(xì)胞核周圍。分別采集PDSREDLN1GOTLR21轉(zhuǎn)染BHK2124H、48H與72H的圖片發(fā)現(xiàn)，GOTLR21的細(xì)胞定位隨表達(dá)時(shí)間也發(fā)生了變化。具體表現(xiàn)為轉(zhuǎn)染24H時(shí)，GOTLR21紅色熒光表現(xiàn)為緊緊圍繞細(xì)胞核周圍，呈現(xiàn)圓圈狀特征，而在48H時(shí)發(fā)現(xiàn)其濃縮為圓II

簡(jiǎn)介：福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文泉州市豬圓環(huán)病毒病流行病學(xué)調(diào)查研究姓名吳秋玉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師馬玉芳林振勝20081001福建農(nóng)林大學(xué)專業(yè)碩士學(xué)位論文ABSTRACTTHEPORCINECIRCOVIRUSDISEASEISTHATTHEWEANEDPIGLETSSUFFERINGFROMPOSTWEANINGMULTISYSTEMATICWASTINGSYNDROMEPMWSANDPORCINEDERMATITISANDNEPHROPATHYSYNDROME，PDNS，WHICHCAUSEDBYPCV2INTHISINVESTIGATION，SURVEY、ELISAANDPCRWEREUSEDTOTESTTHOSEBLOODSELBM，SAMPLESOFSPECIMENOROTHERSAMPLESOFTISSUES、SWAB、MANUREWHICHPROVIDEDBYTHEINTENSIVESWINEFARMSANDEXTENSIVESWINEFARMSINQUANZHOUCITY，F(xiàn)UJIANPROVINCETHISSTUDYCANBEAREFERENCEOFHOWTOCONTROLTHEPCVDISEASEFORTHOSESWINEFARMERSINOURAREASINCE2006，WEDIDTHOUSANDSOFSURVEYFROMTHOSEVETSINOURCITYTHESURVEYSHOWEDTHAT2408％HAVETHESYMPTOMOFPCV，54COPIESALEPOSITIVELYINFECTEDBYPCVANDTHEREISNOTASWINEFARMINOCULATINGTHEVACCINEOFTHEPCVELISAWASUSEDTOTEST882SERUMSAMPLESFROM51INTENSIVESWINEFARMTHERESULTSSHOWEDTHATPCV2POSITIVERATEHASREACHED2551％225／882。THEINTENSIVESWINEFARMSTOOK2361％，ANDTHEEXTENSIVESWINEFARMSTOOK2804％12OFTHE28INTENSIVESWINEFARMSAND5OFTHE23EXTENSIVESWINEFARMSWERENEGATIVEPCRTECHNIQUEWASUSEDTOTEST122CLINICALSAMPLESFORPMWSANDPDNSTHERESULTSSHOWEDTHATTHEPOSITIVERATEOFPCVINFECTIONWAS4426％54／122ANDTESTED187CLINICALSAMPLESFROM35SWINEFARMS，THEPOSITIVERATEOFPCVWEREONLY1604％30／187OFTHECLINICALSAMPLESANDONLY2875％10／35SWINEFARMSWEREPOSITIVEINPCVFROMTHEABOVEINVESTIGATIONS，WECANSEETHATMOSTOFTHESWINEFARMSHAVETHEPCV2，ITISAHUGEPOTENTIALDANGERTOTHESWINEFARMINGBUSINESSINOURCITYWEWORKEDOUTTHEFOLLOWINGMEASURES，SUCHASVACCINEINOCULATION，EMPHASIZEDFEEDINGMANAGEMENT，DRUGSANDSOONTOPROTECTANDCONTROLTHEPCV2INFECTIONINPORCINEACCORDINGTOTHEPRACTICALFACTKEYWORDSPORCINECIRCOVIMSDISEASE；EPIDEMIOLOGY；INVESTIGATION2

簡(jiǎn)介：論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名／司拋馴年‘月／夕日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容?？诒菊撐牟槐Ｃ??？诒菊撐谋Ｃ?，在一年解密后適用本授權(quán)。請(qǐng)?jiān)谝陨峡趦?nèi)劃“4”研究生簽名／虱沈?qū)熀灻m占年6月，7日年Z月胗日四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩上學(xué)位論文5真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和重組蛋白的表達(dá)經(jīng)PCR和酶切鑒定，表明PCDNA31IFNA與PCDNA31IFN7質(zhì)粒構(gòu)建成功。對(duì)體外培養(yǎng)BHK21細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，并經(jīng)免疫印跡驗(yàn)證確認(rèn)PCDNA31IFNA與PCDNA31IF№質(zhì)?？稍贐HK21細(xì)胞中成功表達(dá)，重組鵝IFNA與IFN7蛋白分別約為20KDA和18KDA，重組蛋白均在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后表達(dá)量較高。6鵝I型與II型干擾素蛋白的抗病毒活性研究運(yùn)用免疫印跡、定量PCR和流式細(xì)胞儀分析技術(shù)，對(duì)鴨瘟病毒的標(biāo)簽熒光蛋白、病毒拷貝數(shù)、病毒滴度進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)外源鵝I型與II型干擾素蛋白均可有效抑制鴨瘟病毒在DEF中的增殖和復(fù)制，證明了鵝I型與II型干擾素蛋白具有抗病毒功能。另外，鵝源干擾素可誘導(dǎo)鴨源細(xì)胞中干擾素及其抗病毒基因的轉(zhuǎn)錄上調(diào)，表明其在鴨源細(xì)胞中也具有生物學(xué)活性。本研究為進(jìn)一步研究重組鵝干擾素的抗病毒功能及其應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞鵝；干擾素及其受體；組織分布；免疫學(xué)特性；抗病毒功能II

簡(jiǎn)介：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文犬細(xì)小病毒病的流行學(xué)調(diào)查及綜合防治措施研究姓名劉舜梁申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王川慶20081001河南農(nóng)業(yè)大學(xué)2005級(jí)獸醫(yī)碩士研究生畢業(yè)論文4CPV臨床診斷實(shí)驗(yàn)本試驗(yàn)應(yīng)用犬細(xì)小病毒抗原快速檢測(cè)試劑盒、血凝／血凝抑制試驗(yàn)對(duì)60份具有腹瀉和嘔吐癥狀的患犬糞便樣本進(jìn)行了犬細(xì)小病毒檢測(cè)。這二種方法檢測(cè)結(jié)果存在一定的差異，它們檢測(cè)出的陽(yáng)性份數(shù)分別為30，29，符合率高達(dá)9833％。5CPV臨床治療實(shí)驗(yàn)本試驗(yàn)用犬細(xì)小病毒單克隆抗體配合靜脈注射用犬免疫球蛋白和靜脈注射用犬血白蛋白對(duì)150例犬細(xì)小病毒病患犬進(jìn)行治療。結(jié)果表明與抗病毒藥療法、抗病毒血清療法、單純使用單克隆抗體以及無(wú)配血反應(yīng)健康犬全血輸血療法等的治療方法相比，采用犬細(xì)小病毒單克隆抗體治療的治愈率最高達(dá)8000％。2