簡(jiǎn)介：分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文密級(jí)荸薺上攜帶病毒種類的鑒定及其分子生物學(xué)特性研究IDENTIFICATIONANDMOLECULARBIOLOGICALCHARACTERIZATIONOFVIRUSESINFECTINGWATERCHESTNUT研究生張方鵬學(xué)號(hào)2013301110176指導(dǎo)教師洪霓教授指導(dǎo)小組洪霓教授王國(guó)平教授王利平副教授徐文興副教授保義六宙IJ秋僅丁芳副教授專業(yè)植物病理學(xué)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士研究方向植物病毒學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間2016年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院二。一六年六月荸薺上攜帶病毒種類的鑒定及其分子生物學(xué)特性研究目錄摘要IABSTRACTIII縮略詞表VI第一章文獻(xiàn)綜述1第二章荸薺攜帶DNA病毒的鑒定及其分子特性分析9211采集荸薺樣品信息9212主要試劑9213小RNA測(cè)序及其生物信息學(xué)分析10214CTAB法提取荸薺基因組總DNA11215WCSV1的PCR檢測(cè)田問(wèn)樣品感染率11216PCR及其產(chǎn)物回收、克隆和測(cè)序一12217SOUTHERNBLOT1；22結(jié)果與分析15221小RNA測(cè)序的CLEANREADS數(shù)據(jù)分析15222WCSV1全基因組序列擴(kuò)增結(jié)果16223WCSV1基因組結(jié)構(gòu)及其序列分析18224來(lái)源于病毒的SRNAS的分析24225荸薺樣品潛帶WCSV1的檢測(cè)26226SOUTHEMBLOT分析2923討論33第三章荸薺攜帶兩種RNA病毒的基因組克隆及分子特性分析3631材料與方法36311植物材料與主要試劑36312小RNA測(cè)序及生物信息學(xué)分析36313引物設(shè)計(jì)與合成37314荸薺樣品總RNA的提取37315CDNA的合成37

簡(jiǎn)介：分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文密級(jí)柑橘黃化脈明病毒分子檢測(cè)及生物學(xué)研究RESEARCHONMOLECULARDETECTIONANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFCITRUSYELLOWVEINCLEARINGVIRUS研究生學(xué)號(hào)指導(dǎo)教師指導(dǎo)小組專業(yè)植物病理學(xué)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士程橋2013301110163洪霓教授洪霓王國(guó)平徐文興王利平丁芳教授教授副教授副教授副教授研究方向植物病毒學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間2016年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院二。一六年六月柑橘黃化脈明病毒分子檢測(cè)及生物學(xué)研究目錄摘要一IABSTRACTIII縮略語(yǔ)表V第一章文獻(xiàn)綜述111CYVCV的發(fā)現(xiàn)歷史112CYVCV分類地位一213CYVCV生物學(xué)特性3131CYVCV寄主范圍3132CYVCV危害特點(diǎn)～4133CWCV傳播方式514CYVCV分子生物學(xué)特性6141CYVCV基因組結(jié)構(gòu)6142CYVCV分子多樣性715CYVCV檢測(cè)方法8151生物學(xué)鑒定8152分子生物學(xué)檢測(cè)8153血清學(xué)檢測(cè)816研究目的及意義一9第二章柑橘黃化脈明病毒的RTPCR檢測(cè)1021試驗(yàn)材料10211樣品來(lái)源～10212研究所用主要試劑102_2試驗(yàn)方法11221引物設(shè)計(jì)與合成11222總RNA的提取11223RTPCR12224瓊脂糖凝膠電泳～1223結(jié)果與分析13231來(lái)源7個(gè)省份柑橘樣品CYVCV的RTPCR檢測(cè)13232分析CYVCV在湖北各地區(qū)柑橘樣品上分布特點(diǎn)14233分析不同種類柑橘樣品CYVCV侵染率15234CYVCV侵染率與柑橘表現(xiàn)癥狀之間關(guān)系分析1624小結(jié)與討論17第三章CYVCV甲基轉(zhuǎn)移酶基因MET和外殼蛋白基因CP序列分析1931試驗(yàn)材料19311樣品來(lái)源19312研究所用主要試劑1932試驗(yàn)方法20321引物設(shè)計(jì)與合成20322總RNA的提取，20323RTPCR10

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文核盤菌弱毒菌株SX276生物學(xué)特性及其攜帶RNA病毒的研究RESEARCHONBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDRNAVIRUSESFROMTHEHYPOVIRULENTSTRAINSX276OFSCLEROTINIASCLEROTIORUM研究生學(xué)號(hào)指導(dǎo)教師指導(dǎo)小組專業(yè)植物病理學(xué)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士李波2013301110182姜道宏教授付艷蘋教授謝甲濤副教授程家森副教授陳小林副教授陳桃講師研究方向黼物病理學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間2016年06月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院二。一六年六月核盤菌弱毒菌株SX276生物學(xué)特性及其攜帶RNA病毒的研究目錄摘要IABSTRACT。III略語(yǔ)表V第一章前言11核盤菌與作物菌核病111核盤菌的分類地位及病害循環(huán)L12核盤菌的寄主范圍及危害213核盤菌的致病機(jī)理314核盤菌的防治策略一4141選育抗病品種4142農(nóng)業(yè)防治5143化學(xué)防治5144生物防治62真菌病毒與生物防治621真菌病毒的發(fā)現(xiàn)622真菌病毒的分類7221真菌DSRNA病毒的分類8222真菌SSRNA病毒的分類9223真菌一SSRNA病毒的分類10224未分類的真菌病毒1123真菌病毒對(duì)寄主的影響1124弱毒相關(guān)病毒與生物防治123本研究的目的與意義13第二章利用高通量測(cè)序技術(shù)在核盤菌中挖掘真菌病毒資源141引言142研究材料～143研究方法15

簡(jiǎn)介：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學(xué)特性研究姓名王君瑋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師姜平20080601貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學(xué)特性研究CDV／SD／M06用D貂源、CDV／SD／M06／L，N貂源和CDV／SD／F06／HB狐源3。貂、狐、貉源犬瘟熱病毒不同分離株H扣N基因序列分析用RTPCR方法對(duì)分離的5個(gè)CDV分離株的H基因和N基因進(jìn)行了擴(kuò)增，并分別將其克隆到PGEMTVEXTOR進(jìn)行序列測(cè)定然后與OENBARD中己報(bào)道的CDV毒槲目比較結(jié)果為1H基因5個(gè)分離株H基因N協(xié)列同源性均達(dá)到975％以上，與國(guó)內(nèi)疫苗株CHNE源性為905～918％5個(gè)CDV分離株H基因推導(dǎo)的艙序列同源性比較表明HTP與THDL的AA同源性為100％，二者與其他分離毒株間AA序列同源性差別大，分別為879％一99I％；與ELM同源性普遍較低，為897％一918％而CLAN與ONDCRSTEPOORT，CONVAC洧著很高的同源性關(guān)系NT同源性分別為968％和972％；TIFF同源性分別為97。】％和956％2N基因54“分離株N基因L腑列同源性均達(dá)到945％以上，HTP與THDL的同源性最高998％國(guó)內(nèi)疫苗株CLAN與分離株的M序列同源性普遍較低909935％，而與疫苗株OILDERST印OORT的NT同源性高，達(dá)到971％從N蛋白齟序列看，分離株之間除HTP、THDL與HDA折列同源性較高99O％以上外，其他分離株之間AA同源性低而CLUL與ONDERSTEPOORT確“著很高的同源性關(guān)系，同源性比例達(dá)973％本研究結(jié)果提示，HD和刪C病區(qū)域相量巨較遠(yuǎn)，但具有較高的同源性，而與FIB具有相對(duì)較低的NT同源性，提示野毒株在易感動(dòng)物上可能存在種屬差異此外，分離毒株壬和N蛋白免疫原性可能與疫苗株有較大差別，可能與CD免疫失敗有關(guān)4犬瘟熱病毒實(shí)時(shí)熒光定量RTIPCR檢測(cè)方法的研究按熙CDVN基因序列，設(shè)計(jì)合成了特異性引物和探針，經(jīng)各反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了CDV的REALTIME熒光定量RT，PCR4僉測(cè)技術(shù)用20PMOLJML的引物濃度各1UL和20PMOL／ML的探針濃度03UL、獲得的熒光信號(hào)最強(qiáng)，曲線平滑敏感度為124X10刁NG／ML的病毒RNA；與NDV、AIV、NIPV等RNA病毒不發(fā)生交又反應(yīng)試驗(yàn)重復(fù)性的變異系數(shù)CN分別為23％、25％和42‰對(duì)采集的57份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)，熒光RTPC胎測(cè)陽(yáng)性檢出率為93％53／57，而BIOINDISTBITRAPIDCDV試劑盒、常規(guī)RTPCR陽(yáng)性檢出率分別為702％40／57和719％4I／57，與BZG吩7DIS嗽劑盒和蒂’規(guī)RTPCR的符合率分別為77。2％和789％，而BIO帥IST試劑盒與常規(guī)RTPCR符合率達(dá)982％結(jié)果表明，本研究建立的檢測(cè)CDV的熒光RTPCR方法具有快速、特異、敏感、可定量，并可同時(shí)檢測(cè)大量樣品等優(yōu)點(diǎn)，能用于CDV感染的早期診斷和海關(guān)檢疫5貉源犬瘟熱病毒H，F(xiàn)和N基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定將貉源CDV分離株的H、F和NN1，N2基因經(jīng)RTPCRF增后，連接到PMDL8T載體，對(duì)比測(cè)序結(jié)果表明各基因序列正確，并且符合閱讀框規(guī)則然后將各基因亞克隆到真核表達(dá)裁體PLRESLNEO礙“，經(jīng)PCR方法和限制酶酶切鑒定成功構(gòu)建了四種重組真核表達(dá)質(zhì)粒，分別命名為PIRSTN1、PIRESTN2、PIRESTH、PIRESTF用構(gòu)建的真核重組質(zhì)VⅡI

簡(jiǎn)介：授予學(xué)位單位代碼10434研宄生學(xué)號(hào)2014120242山東農(nóng)業(yè)大學(xué)全曰制碩士專業(yè)學(xué)位論文我國(guó)部分地區(qū)規(guī)?；Z場(chǎng)五種重要病毒病的流行病學(xué)調(diào)查EPIDEMIOLOGICALINVESTIGATIONOFFIVEIMPTANTVIRUSDISEASESONLARGESCALEGOOSEFARMSINSOMEREGIONSINCHINA姓名張敏學(xué)位類別獸醫(yī)碩士專業(yè)獸醫(yī)研究方向禽病學(xué)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院指導(dǎo)教師刁有祥教授2016年06月04曰關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名________________導(dǎo)師簽名______________________日期______________________

簡(jiǎn)介：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文駐馬店地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及流行病學(xué)調(diào)查姓名黃志偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師夏平安劉蓮芝20081201IDENTIFICATIONANDISOLATIONOFPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYSYNDROMEVIRUSANDTHEEPIDEMIOLOGYINVESTIGATIONOFZHUMADIANSUPERVISORPROFXIAPING’ALL，PRO￡1IULIANZHIMASTERCANDIDATEHUANGZHIWEIABSTRACTISOLATIONANDIDENTIFICATIONOFSUSPICIOUSPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYSYNDROMEPRRSVIRUSISRESEARCHEDONZHUMADIANCITYPIGFARMSTOUNDERSTANDTHETYPEOFSTRAIN。THISINVESTIGATIONPROVIDESTHEREFERENCETOPREVENTANDCONTROLTHEEPIDEMICPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYSYNDROMEINZHUMADIANAREA。MATERIALISGATHEREDFROMSICKPIGSINZHUMADIANPIGFARMS。INDIRECTIMMUNITYFLUORESCENCEEXPERIMENTHFANDREVERSESTRANSCRIPTIONTHEPOLYMERASECHAINREACTIONRTPERARECARRIEDOUT。BYPRIMERSOFPRRSVORF7GENE，WEISOLATEANDIDENTIFYTHEPRRSVVIRUSES，WE’VEOBTAINED1PRRSVNAMEDPRRSVHNZ一I／08BELONGINGTOTHEAMERICANTYPE?！疎PIDEMIOLOGYINVESTIGATIONISCARRIEDOUTUSINGESTABLISHEDREVERSESTRANSCRIPTIONTHEPOLYMERASECHAINREACTIONINZHUMADIAN。3L1SUSPICIOUSSICKPIGSAMPLESFROM160PIGFARMSIN10COUNTIESANDDISTRICTSAREEXAMINEDFORPOSTIVE／NEGATIVETEST。146PRRSVPOSITIVESAMPLESAREDETECTEDSAMPLEPOSITIVERATEIS469％。THEYCOMEFROM81PIGFARMSPIGFARMPRRSVINFECTIONRATEIS506％。THE20062008PRRSVPOSITIVERATESWERE528％，472％423％RESPECTIVELYAITSHOWSTHATPRRSVISC3NLNLONINZHUMADIAN。THELARGESCALEEPIDEMICPRRSHASBROUGHTENORMOUSECONOMICLOSSESTOPIGRAISINGINDUSTRY。WEHAVEADETAILEDUNDERSTANDINGOFTHEPATHOGENESISOFTHEDISEASE，CLINICALANDPATHOLOGICALCHANGESINTHEPROCESSOFDIAGNOSIS。THEMAINSYMPTOMSOFSICKPIGSARERESPIRATORYSYMPTOMSFORPIGLETS，ORSOWREPRODUCTIVEOBSTACLESPIGLETSRESPIRATORYSYMPTOMS。PRRSOCCURSMAINLYINPIGLETSYOUNGERTHAN30DAYOLDAND30TO60DAYOLDPIGSANDSOWSAMEANWHILETHEREISACERTAINPERCENTAGEOFINCIDENCETOSOWS。THEMAINREASONISPROBABLYBECAUSEPIGLETSHAVENOESTABLISHEDIMMUNESYSTEMANDTHUSLOWIMMUNITY。PRRSINFECTIONINVADESTHEALVEOLARMACROPHAGES，DAMAGESTHEIMMUNESYSTEMOFPIGS，LEADINGTOTHEPRRSVHIGHINFECTIONRATEANDHIGHMORBIDITYINPIGLETS。ASARESPIRATORYDISEASE，PRRSISIMPACTEDBYSEASONALCHANGES。ITMAINLYOCCURSINAUTUMNANDWINTER。AFTERWEUNDERSTANDTHEPREVALENCEANDTRENDSINACERTAINREGION，WECANTAKESPECIFICMEASURESTODECREASETHESPREADOFPRRSANDTEDUCETHELOSSCSCAUSEDBYPRRS。KEYWORDSPRRSV；SEPARATION；APPRAISAL；EPIDEMIOLOGY；INVESTIGATION39

簡(jiǎn)介：農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文PRRSVGP5蛋白基因重組牛痘病毒蛋白基因重組牛痘病毒的構(gòu)建的構(gòu)建及免疫學(xué)初步研究免疫學(xué)初步研究CONSTRUCTIONOFRECOMBINANTCPVOFPRRSVGP5PROTEINGENEINITIATYANALYSISONIMMUNOLOGY田野預(yù)防獸醫(yī)學(xué)延邊大學(xué)學(xué)校代碼10184分類號(hào)分類號(hào)密級(jí)UDC學(xué)號(hào)延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文PRRSVGP5蛋白基因重組牛痘病毒蛋白基因重組牛痘病毒的構(gòu)建的構(gòu)建及免疫學(xué)初步研究免疫學(xué)初步研究CONSTRUCTIONOFRECOMBINANTCPVOFPRRSVGP5PROTEINGENEINITIATYANALYSISONIMMUNOLOGY研究生姓名田野培養(yǎng)單位延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱張守發(fā)教授學(xué)科專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向分子免疫學(xué)論文提交日期年月日

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文美洲商陸抗病毒蛋白Ⅰ的基因克隆和表達(dá)及其生物學(xué)活性分析姓名王煒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師詹金彪20060501浙江太學(xué)碩士擎柱靜文王婷挑取轉(zhuǎn)化成功單克隆菌落擴(kuò)增，少量抽提質(zhì)粒，雙酶切、小量表達(dá)鑒定煎組質(zhì)粒。將禽霄燕確表遮藏俸PE44AL鼬諍L瀚轉(zhuǎn)純麓BL2巧E3∥硒誘導(dǎo)裘速，鬏集藩體沉淀，將沉淀超聲破菌，將耀聲所褥沉淀發(fā)復(fù)洗滌，尿素潞鼴包含體，透析笈性。炭性蛋自溶液用BLUE，SEPHAROSC6B崇和層析純化，經(jīng)SDS零AGE電泳穩(wěn)濺，熙M疆法梭濺紹黲毒性。鼴統(tǒng)計(jì)學(xué)方法魄較融PL綴翮瑚陡綴對(duì)照組纓施存活率的差髯。瓊脂糖凝膠電泳檢濺爨白的DNA酶圣管用，ELISA方法驗(yàn)證其向鞠聚麴翊蔓終爰，分子模瓠熬方法建立莢濺囊淤撬癀毒凝是與疆R露援豹模型。綣隳PC鼗產(chǎn)物經(jīng)1％瓊目旨游電泳，溴乙錠染色后，在紫辨斃下可撼一條絹黢懿約S糖醣酶舞帶，與預(yù)計(jì)戇釋靜冀段長(zhǎng)度大奪一致。露贍冀莰與曦俸連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)JM109，長(zhǎng)出白色克隆，抽提膜粒用恤I和脅槲HI雙酶切確諼辯涕片段插入，經(jīng)潮序涯寅該片段序歹|J舞掰扳道翡魏謹(jǐn)I孩菅酸簿麴基本一致。爨組質(zhì)靛PET44張蹬湄撤齠L和磁積LII漱酶切，1％璩顯簿糖凝膠漱泳?？梢姶笮〖s5500BP和800BP的兩個(gè)片段，說(shuō)明PAPL的編碼基因融插入PE鍛曩。含重縫予PE囂犍8鶼L瓣太弱籽菌B磁L綴F婚誘導(dǎo)裘遮，蓉波及菌體怒聲破菌艏沉淀和上清12％SDS樅6濺電泳，綴誘導(dǎo)菌液泳道及超聲沉淀泳遂臻可覓一分子萋約為2效D蘸蛋巍條帶，與Ⅳ瀠L豹分子萋湊合，囂來(lái)誘鼯蔚液與超聲上漓無(wú)相癩條帶，這說(shuō)疆配API戮包含體形茂正確表達(dá)。包含體愛(ài)復(fù)洗滌精縫度達(dá)70％鞋上，尿素溶解，透析復(fù)慷所得產(chǎn)物純度約3輯6，笈性率較低。愛(ài)性滾經(jīng)BL黔S印撩FOSE6B純化，SDS。黝心E檢測(cè)，維暴攝示其純度大予90％。W鞭法進(jìn)筇耀毪捻溺，表驥笈蛙純化囂的粉母I其柯麓蓖辯毒素A鏈殳1’A耀鎂戇纓照毒慳。魏往瓣美濺蠢醛撬癜湊蠶皇L瓣癌纓熬蠢黌黧懿殺傷俸耀，簸夠作用與超螺旋DNA具甯核酸內(nèi)切活性，與朋淑能夠相甄作用?？澱摲顚?shí)駿袈鯔剽F二PCR熬窮法，獲美潮巍港春醴孛竟隆褥囊了菠漉囂秘撩I旗因，并將其插入到載體質(zhì)粒P㈧時(shí)一中，成功構(gòu)建了N“I的表達(dá)質(zhì)粒PET_44A融PI。蘸綴質(zhì)敉轉(zhuǎn)純靜天腸稈蓊BL2LDE3在L黻℃誘警下，表達(dá)出分予爨約為291【D的蛋囪震，與耳豹餐皇分子爨一致。覆蛋爨艨電泳表爨嗣鶼蛋自囊藤以包含體形式袈逸，所得包含體經(jīng)反篾洗滌麝純度可遮70％以上。洗滌后的甑禽體綴艨豢溶鰓，透櫥復(fù)性，霹褥銎F少爨鮑菱髏蛋自，縫度在30％左右。復(fù)性渡經(jīng)BH一齜磚A∞SE6磐親和魄他渣，得到90％以TI掩純度。M疆法測(cè)定魏”L稻雕A2

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文自主性細(xì)小病毒載體的構(gòu)建和假細(xì)小病毒生物學(xué)特性的研究姓名顧梅崗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物物理指導(dǎo)教師黃青山2001520復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文自主性細(xì)小皰差戴體的構(gòu)建和假細(xì)小病毒生物學(xué)特性的研究一一摘要自主一生細(xì)小病毒的遺傳毒性低，具有腫瘤靶向性對(duì)正常組織無(wú)損害，并且宿主范圍相對(duì)較廣等特點(diǎn)使之可以作為腫瘤基因治療的載體。以自主性細(xì)小病毒MVMP的感染性質(zhì)粒，PMM984為基礎(chǔ)，將綠色熒光蛋白GFP基因插入非結(jié)構(gòu)蛋白VP編碼區(qū)，構(gòu)建了可以表達(dá)目的基因的重組細(xì)小病毒載體，PMVMGFP。PMVMGFP與包裝質(zhì)粒，P984NS一，共轉(zhuǎn)染A9細(xì)胞，包裝出了具有感染能力的重組細(xì)小病毒MVMGFP。通過(guò)共聚焦顯微鏡可以看到表達(dá)了GFP的細(xì)胞。研究證明，在重組病毒的包裝過(guò)程中包裝質(zhì)粒和重組載體間的同源性會(huì)引起序列重組而產(chǎn)生野生型病毒，降低重組病毒的滴度。用自主性細(xì)小病毒HI包裝質(zhì)粒PSRL9NS一包裝PMVMGFP產(chǎn)生了H1PSEUDO／MVMGFP重組細(xì)小病毒。同樣，用MVMP包裝質(zhì)粒P984NS包裝PHLGFP得到了MVMPSEUDO／H1GFP。利用流式細(xì)胞儀確定病毒的滴度。，結(jié)果顯示，假病毒的滴度比相應(yīng)的重組病毒高，說(shuō)明由于包裝質(zhì)粒和重組載體間的同源性降低，阻礙了野生型病毒的產(chǎn)生。所以通過(guò)包裝假病毒的方法反而可以提高重組病毒的產(chǎn)量。同時(shí)假病毒具有重要的應(yīng)用價(jià)值。在臨床治療中，重復(fù)感染會(huì)引起急劇的免疫反應(yīng)。如果用假病毒進(jìn)行重復(fù)的治療，就有可能因不同的抗原性而緩和免疫反應(yīng)，提高安全性，并且無(wú)需通過(guò)提高劑量來(lái)維持療效。通過(guò)LEICATCSNT共聚焦成像系統(tǒng)檢驗(yàn)GFP的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)重組病毒及其假病毒都能感染肝癌細(xì)胞株QGY7703，以及轉(zhuǎn)化細(xì)胞株，NBK和A9。雖然HL和MVM的外殼蛋白存在著差異，但兩者在進(jìn)入細(xì)胞，將各自的基因組轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi)，進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)方面是極為相似的。畢竟兩者的外殼蛋白，特別是和有效感染密切相關(guān)的VPLN末端，具有高度保守的區(qū)域，這代表了HL和MVM在感染過(guò)程中的相似性。而兩者的差異尤其是VPLN末端的12氨基酸片段的差異很可能影響著基因表達(dá)后病毒的某些行為。I，關(guān)鍵字載體，細(xì)小瀹毒假病毒，病蹴裝，綠色熒芫蛋白2

簡(jiǎn)介：摘要病毒的調(diào)控蛋白在病毒的基因表達(dá)與調(diào)控過(guò)程中具有重要的作用。BORF1是牛泡沫病毒編碼的唯一調(diào)控蛋白，能夠反式激活位于長(zhǎng)末端重復(fù)序列和ENV基因內(nèi)部的啟動(dòng)子。JDVTAT是JEMBRANADISEASEVIRUS編碼的反式調(diào)控因子可以通過(guò)結(jié)合RNA的TAR序列提高轉(zhuǎn)錄效率。工CPO和B工CPO分別是人疙疹病毒和牛疙疹病毒編碼的調(diào)節(jié)蛋白可以促進(jìn)病毒基因的表達(dá)。本文以這上述四種蛋白為材料，經(jīng)PCR構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒，并利用大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)。通過(guò)對(duì)誘導(dǎo)條件的優(yōu)化獲得可溶性表達(dá)蛋白，結(jié)果BORF1和工CPON端片斷在37℃即能夠可溶性表達(dá)，而JDVTAT和BICPO需要進(jìn)行低溫誘導(dǎo)在18℃進(jìn)行可溶性表達(dá)。在此基礎(chǔ)上根據(jù)不同蛋白的特性利用親合層析，離子交換層析和分子排阻層析等方法對(duì)蛋白進(jìn)行純化，通過(guò)優(yōu)化條件，四種蛋白均獲得較高純度。對(duì)于純化效果理想的BORF1進(jìn)行結(jié)晶相關(guān)研究，運(yùn)用動(dòng)態(tài)光散射和圓二色譜的方法對(duì)分子的均一性和二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)定。發(fā)現(xiàn)在溶液中BORFI是以多聚體的形式存在的，其二級(jí)結(jié)構(gòu)中A螺旋的含量較低。利用氣相擴(kuò)散法進(jìn)行BORF1的晶體生長(zhǎng)，摸索晶體生長(zhǎng)的條件。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BORF1在以聚乙二醇PEG作為沉淀劑時(shí)，生成了類似晶體的沉淀，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行晶體生長(zhǎng)條件的優(yōu)化。關(guān)鍵詞病毒調(diào)控蛋白，蛋白表達(dá)，蛋白純化，氣相擴(kuò)散法，結(jié)晶南開大學(xué)碩士畢業(yè)學(xué)位論文前言1前言11蛋白質(zhì)晶體學(xué)的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法111蛋白質(zhì)結(jié)晶的基本原理及主要影響因素生物大分子包括蛋白質(zhì)，多膚，核酸和多糖等及其復(fù)合體是細(xì)胞生命功能實(shí)現(xiàn)的基礎(chǔ)，生物大分子要發(fā)揮其生物學(xué)功能需要具備穩(wěn)定的特征的三維結(jié)構(gòu)及三維結(jié)構(gòu)在各個(gè)水平的運(yùn)動(dòng)，探求結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系是當(dāng)代分子生物學(xué)的中心問(wèn)題之一。解析生物大分子的三維結(jié)構(gòu)能夠?yàn)檎J(rèn)識(shí)其功能提供新的視點(diǎn)，并有助于解釋己經(jīng)積累多年的生化數(shù)據(jù)。而且，精確的三維結(jié)構(gòu)也是定點(diǎn)突變和分子設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)。迄今為止，已有相當(dāng)多的生物大分子的結(jié)構(gòu)得到解析〔截止2004年4月，PDB中的結(jié)構(gòu)己經(jīng)超過(guò)25,004個(gè)，其中大多數(shù)的生物功能已經(jīng)得到了深入研究，并基于結(jié)構(gòu)對(duì)這些生物大分子進(jìn)行了分類和相互關(guān)系的研究。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的研究手段主要包括X射線衍射、核磁共振NMR、三維電鏡重組及中子衍射等。目前應(yīng)用最廣泛的是X射線晶體衍射和核磁共振NMRX一射線晶體學(xué)適用于研究各種大小蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，細(xì)菌核糖體30S小亞基和50S大亞基的晶體結(jié)構(gòu)解析己經(jīng)先后完成。X一射線晶體學(xué)曾經(jīng)是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測(cè)定的唯一手段，在現(xiàn)在和可見的將來(lái)仍將是原子水平上解析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的最主要和最有效的手段。WIMBERLYBTETAL,2000要解析蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，首先要得到高分辨率的蛋白質(zhì)晶體。與小分子結(jié)晶一樣，蛋白質(zhì)在溶液中達(dá)到過(guò)飽和狀態(tài)時(shí)，分子之間可以以規(guī)則的方式堆積起來(lái)形成晶體析出，也可以以無(wú)規(guī)則堆積方式形成沉淀。蛋白質(zhì)結(jié)晶學(xué)研究，簡(jiǎn)而言之，就是尋找合適的溶液條件和合適的方法，使蛋白質(zhì)在過(guò)飽和溶液中以晶體形式析出，而不是形成沉淀。不同的蛋白質(zhì)具有不同的性質(zhì)，蛋白質(zhì)結(jié)晶沒(méi)有什么一成不變的規(guī)律可言。要得到蛋白質(zhì)的結(jié)晶，需要解決從蛋白克隆、表達(dá)、純化，到結(jié)晶條件篩選、條件優(yōu)化、等環(huán)節(jié)中可能出現(xiàn)的問(wèn)題①蛋白質(zhì)純度對(duì)結(jié)晶的影響蛋白質(zhì)結(jié)晶過(guò)程中，雜質(zhì)、晶核，還有其他一些未知因素的存在，會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)晶產(chǎn)生影響。一般來(lái)說(shuō)，蛋白質(zhì)純度越高，越有利于結(jié)晶。但有時(shí)也有例外，

簡(jiǎn)介：華中師范大學(xué)碩士學(xué)位論文一株甜菜夜蛾核型多角體病毒某些生物學(xué)特性的研究姓名蘇越申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師洪華珠200061STUDIESONSOMEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFSPODOPTERAEXIGUANUCLEARPOLYHEDROSISVIRUSABSTRACTTILISTHESISREPORTEDTHERESEARCHRESULTSOFTHEMORPHOLOGYOBSERVATION，HOSTRAIL【GEDETERMINATIONANDINVIVOBIOASSAYOFSPODOPTERAEXIGUANUCLE81“POLYHEDROSISVIRUSAMERICANISOLATE111ECOMPARATIVESTUDIESONTHETOXITYANDRESTRICTIONENDONUCLEASEANALYSISOFSENPVAMEFICANISOLATEANDZHONGSHMLUNLVERSITYISOLATEWEREALSEPORTEDSCREENEDWITHTHEELECTRONMICROSCOPE也EEXTRACTOFTHESPODOPTERAEXIGUANUCLEARPOLYHEDROSISVIRUSPESTICIDEWEREPUREPOLYHEDRAANDSENPVAMEFICANISOLARWASMULTIPLENUCLEARPOLYHEDROSISVIRUSNLETHIRDINSTARLARVAEFROMFOURDIFFERENTKINDOFINSECTS，SPODOPTERAEXISUAHELIOTHISARMISERASPODOPTERALITURAANDPKTELLAXYLOS據(jù)LLAWEREFEDWITHSENPVAMERICANISOLATEATTHECONCENTRATIONOF1310’PIB“1111N圯RESULTSHOWEDTH砒ONLYSELARVAEWERESERIOUSLYINFECTEDANDDIEDFOURDAYSLATERTHEOTHERSREMAINEDALIVE，F(xiàn)ROMWHICHWECOULDDRAWACONCLUSION吐LATTHESCNPVHASHIGHSPECIFICHOSTRANGEINVIVOTHE碡SUITSOFINVIVOBIOASSAYINDICATEDTHATTHCLC50OFSENPVAMERICANISOLATETOTHIRDINSTARFOURTHINSTARANDFIRHINSTARSELARVAEWAS125910PIBSLML。6466XLO’鷹S加11AND152010“PMSTMLRESPECTIVELY丁HIRDINSTARSE】A1VAEWEMINFECTEDWITHSENPVAMEDCANISOLATEATTHECONCENTRATIONOF1310‘P113S／ML，L3103PTBS／ML，1310PMAML，13L仃，PIBS／M1AND13X106PIBS／RRD，ANDTHELT∞WAS8柏DAYS641DAYS，525DAYS499DAYSAND428DAYSRESPECDVELYTHCFOURTHINSIAL“ANDFI觸INSTARSELARVAEWEREBOTHINFECTEDATTHECONCENTRATIONOF13103PMS，IILL。1310PMS／ML，13L礦PⅢS，F(xiàn)NL，13X106PIBSLMLAND1310’PMS，ML。THELTSOTOFOURTHINSTARSELARYAEWAS882DAYS798DAYS。782DAYS，637DAYSAND577DAYSRESPECTIVELYWHILETHELTSOTOFIFMINSTARSELARVAEWAS939DAYS，870DAYS，818DAYS，769DAYSAND733DAYSRESPECTIVELYTHERESULTSSHOWEDTHATWHENVIRUSCONCENTRATIONANDTEMPERATUREWEREFIXED。THESENSITIVITYWASREDUCEDASLARVAEINSTARINCRCASEDHOWEVERWHENLARVAEINSTARANDTEMPERATUREWEREFIXEDTHESETMITIVITYWAS

簡(jiǎn)介：蘭州大學(xué)博士學(xué)位論文病毒和DNA多面體的幾何學(xué)和拓?fù)鋵W(xué)姓名胡廣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)化學(xué)、物理化學(xué)指導(dǎo)教師邱文元20100501蘭州大學(xué)博士學(xué)位論文的構(gòu)建方法，且構(gòu)筑了一些形形色色的多面體鏈環(huán)?；谶@些模型，我們進(jìn)一步尋找一些有用的紐結(jié)不變量去刻畫DNA納米結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。如果把DNA鏈看成兩條反平行的紐帶，這些不變量就包括交叉點(diǎn)數(shù)，UNKNOTTING數(shù)和辮子指數(shù)。而如果將DNA多面體索烴嵌入到相應(yīng)的曲面上，虧格數(shù)和SEIFERT環(huán)數(shù)就成為兩個(gè)有用的不變量。此外，我們還借助了這些不變量去描述DNA多面體的歐拉定理，和酶作用引起的拓?fù)滢D(zhuǎn)換。關(guān)鍵詞多面體理論，紐結(jié)理論，多面體鏈環(huán)，病毒多面體，DNA多面體

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文IL24原核和腺病毒表達(dá)載體構(gòu)建、活性檢測(cè)及ADIL24蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名魏麗麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師宋方洲20080501重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文ECOLIEDLAEPFBSGFPGSTHL蛆IEFIL24IPGIPTGKANKDALBMALDITOFMCSMEZMGMLMLNMRNAMTTODPBSESCHERICHIACOLIETHYLENECLIAMINETETRAACETICACIDEPPENDORFFETAJBOVINESERUMGREENFLUORESCENTPROTEINGLUTATHIONESTRANSFERASEGENEHOURISOELECTRICFOCUSINGINTERLEUKIN24IMMOBILIZEDPHGRADIENTISOPROPYLBDTHIOGALACTOSIDEKANAMYCINKILODALTONLURIABENANIMATIXASSISTEDLASERDESORPTION／IONIZATIONMASSSPECTROMETRYTIMEOFFLIGHTMULTICLONALSITEMEZEREINMILLIGRAMMILLILITERMINUTEMESSENGERRNA3一【4，5DIMEHYL一2一THIAZOLYL一2，5一DIPHENYL一2HTETRAZOLIUMBROMIDEOPTICALDENSITYPHOSPHATEBUFFEREDSALINE2大腸桿菌乙二胺四乙酸二鈉微量離心管胎牛血清綠色熒光蛋白谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶小時(shí)碘乙酰胺等點(diǎn)聚焦白細(xì)胞介素24固相PH梯度異丙基斛13D半乳糖苷卡那霉素千道爾頓LB培養(yǎng)基基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時(shí)間質(zhì)譜多克隆位點(diǎn)密執(zhí)毒素毫克毫升分鐘信使RNA噻唑蘭光密度磷酸鹽緩沖液

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文論文題目建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒的細(xì)胞分子生物學(xué)和免疫學(xué)研究論文題目建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒的細(xì)胞分子生物學(xué)和免疫學(xué)研究作者姓名作者姓名徐鶯徐鶯指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師施農(nóng)農(nóng)教授施農(nóng)農(nóng)教授學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)遺傳學(xué)遺傳學(xué)所在學(xué)院所在學(xué)院生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院提交日期提交日期2008年4月1日2008年4月1日STUDYOFMOLECULARCELLBIOLOGYANDIMMUNOLOGYOFCYMBIDIUMMOSAICVIRUSANDODONTOGLOSSUMRINGSPOTVIRUSADISSERTATIONFORMASTER’SDEGREESUBMITTEDTOTHEGRADUATESCHOOL,HANGZHOUNORMALUNIVERSITYHANGZHOU,ZHEJIANG,CHINAGRADUATESTUDENTXUYINGSUPERVISORPROFESSORSHINONGNONGMAJORGENETICSAPRIL2008

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10225學(xué)號(hào)S13390學(xué)位論文我國(guó)東北地區(qū)野生鳥類感染雞貧血病毒的分子指導(dǎo)教師姓名申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別論文提交日期授予學(xué)位單位流行病學(xué)研究劉婉思曾祥偉副教授東北林業(yè)大學(xué)王笑梅研究員哈爾濱獸醫(yī)研究所碩士2013年4月東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)論文答辯日期授予學(xué)位日期答辯委員會(huì)主席論文評(píng)閱人素夕厶櫛素大學(xué)生理學(xué)2013年6月2013年6月摘要摘要雞貧血病毒CHICKENANEMIAVIRUS，CAV是雞傳染性貧血CIA的病原，主要感染雛雞，引起以雞群死亡率升高，再生障礙性貧血，骨髓黃化，胸腺等淋巴器官萎縮為特征的免疫抑制性傳染病。以往CAV的流行病學(xué)報(bào)道大多是集中在家禽，而有關(guān)野生鳥類感染的數(shù)據(jù)極少。1998年，有日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)CAV可以感染鵪鶉、鴿子和烏鴉，說(shuō)明雞并不是CAV的唯一宿主。野生鳥類生存環(huán)境范圍比較大，而且每年都會(huì)發(fā)生遷徙，如果野生鳥類也可感染和攜帶CAV，就為該病更快速更大范圍的傳播提供了可能條件，導(dǎo)致CAV的防控更加困難。為研究野生鳥類感染或攜帶CAV情況，本實(shí)驗(yàn)于201卜2012年從我國(guó)東北地區(qū)一些主要的野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)站和鳥類環(huán)志站收集到野生鳥類樣品共1199份，其中野生水禽以野鴨為主，共604份；陸生鳥類以雀形目的小型鳥為主，共595份。應(yīng)用特異性PCR方法對(duì)收集樣本進(jìn)行了CAV感染情況的初步檢測(cè)。隨后將陽(yáng)性樣品接種在MDCCMSBI細(xì)胞上進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng)，并應(yīng)用特異性間接免疫熒光法IFA和特異性PCR方法對(duì)所分離的病毒進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，最后對(duì)鑒定為陽(yáng)性的CAV分離株進(jìn)行整個(gè)編碼區(qū)的克隆和測(cè)序，并與GENBANK上已發(fā)表的國(guó)內(nèi)外CAV參考株進(jìn)行了序列比對(duì)和分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所有野生鳥類樣品的CAVPCR陽(yáng)性檢出率為534％，其中野鴨陽(yáng)性率為927％，小型鳥陽(yáng)性率為134％。野生鳥類感染CAV不具明顯的季節(jié)性，不同物種野鳥的CAVPCR陽(yáng)性檢出率不同。其中野鴨中以青頭潛鴨、綠翅鴨陽(yáng)性檢出率最高；小型鳥中以淡腳柳鶯陽(yáng)性檢出率最高。經(jīng)MSBI細(xì)胞分離培養(yǎng)及間接免疫熒光鑒定，成功分離到野生鳥類CAV毒株14株，其中7株來(lái)自于野鴨，另7株來(lái)自于小型鳥，并對(duì)其分別命名。測(cè)序結(jié)果顯示14株分離株編碼區(qū)全長(zhǎng)大小均為1823BP，無(wú)堿基的插入或缺失。VPI大小為1350BP，編碼了449個(gè)氨基酸VP2大小為651BP，編碼了216個(gè)氨基酸VP3大小為366BP，編碼了121個(gè)氨基酸。序列分析表明，14株分離株之間的核苷酸同源性在982％100％之間，野鴨分離株中有3株序列相同，其中硼DNELL0502株與其它分離株相比變異相對(duì)較大，而7株小型鳥分離株序列完全相同。分離株與德國(guó)標(biāo)準(zhǔn)毒株CUXI等國(guó)內(nèi)外參考株的整個(gè)編碼區(qū)核苷酸同源性為952％999％，氨基酸同源性為881％998％，且均與國(guó)內(nèi)毒株HARBIN同源性最高。遺傳進(jìn)化關(guān)系顯示，所有CAV毒株分為兩大分支，本實(shí)驗(yàn)所分離的14株野生鳥類毒株均處在同一大分支上，均與國(guó)內(nèi)毒株HARBIN、C14親緣關(guān)系較近；與另一分支上的澳大利亞毒株CAU2697、3177親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。本研究從野生鳥類中分離出CAV，首次證實(shí)了CAV也可感染野生鳥類，這提示了我們野生鳥類在CAV的傳播中可能起到一定作用。關(guān)鍵詞野生鳥類；雞貧血病毒；分子流行病學(xué)；分離鑒定；序列分析