性病病原體低密度基因芯片的初步研制.pdf

1、目的 采用聚合酶鏈反應(PCR)結(jié)合反向雜交技術(shù)研制性病病原體低密度基因芯片.方法 將淋病奈瑟菌、解脲脲原體、沙眼衣原體、白色念珠菌以及人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)SF2株env基因的種特異性探針加尾后固定在尼龍膜上.將上述5種性病病原體的標準菌株提取DNA后采用細菌、真菌以及人類免疫缺陷病毒三組通用引物分別行PCR擴增,在擴增過程中用Bio-16-dUTP標記擴增產(chǎn)物,將上述擴增產(chǎn)物變性后分別與點有5種探針的尼龍膜反向雜交;將來

2、源于臨床的性病病原體標本提取DNA后與上述三組通用引物在一個PCR反應體系內(nèi)行PCR擴增,擴增過程中用Bio-16-dUTP標記擴增產(chǎn)物,擴增產(chǎn)物變性后與點有5種探針的尼龍膜反向雜交.結(jié)果 對淋病奈瑟菌、解脲脲原體、沙眼衣原體的標準菌株行PCR擴增,均出現(xiàn)520bp長度的DNA片段,對白色念珠菌標準菌株行PCR擴增出現(xiàn)350bp的條帶,對HIV-1SF2株env基因行PCR擴增出現(xiàn)167bp長度的DNA片段,敏感性試驗可檢出20fg的菌