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文檔簡介
1、目的:
通過體外細胞實驗探討WISP1在TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細胞異常增殖和膠原釋放中的作用及可能機制。
方法:
首先,分別以TGF-β1、WISP1刺激體外培養(yǎng)的人肺成纖維細胞,MTT法檢測細胞增殖情況,SircolCollagenAssaykit檢測膠原釋放情況,WesternBlot法分析膠原主要成分Col1a1、Fn1的表達水平,以評估WISP1、TGF-β1在人肺成纖維細胞異常增殖和膠原釋放中
2、的作用。與此同時,用Real-timePCR和Westernblot法檢測TGF-β1處理組WISP1的表達情況。然后,用抗WISP1中和抗體和Akt抑制劑在TGF-β1處理前分別對細胞進行預(yù)處理,進一步分析肺成纖維細胞增殖、膠原釋放以及WISP1、PI3K、p-Akt的表達情況。
結(jié)果:
1.TGF-β1和WISP1均可誘導(dǎo)肺成纖維細胞增殖和膠原釋放,并呈時間和劑量依賴性(p<0.05);
2.TGF-β
3、1可誘導(dǎo)肺成纖維細胞WISP1表達,并呈時間依賴性(p<0.05);
3.耗減WISP1后可部分抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細胞增殖和膠原釋放并下調(diào)PI3K和p-Akt水平(p<0.05);
4.SH-5能部分抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細胞增殖及膠原釋放并下調(diào)p-Akt水平(p<0.05),但不能下調(diào)WISP1和PI3K水平;
結(jié)論:
1.在體外,TGF-β1通過WISP1因子誘導(dǎo)人肺成纖維
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