MicroRNA調(diào)控原始卵泡形成的研究.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是一類長度約為21個(gè)核苷酸，主要在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)的非編碼RNA。在多種植物和動(dòng)物中，miRNA已被報(bào)道可調(diào)控個(gè)體發(fā)育、腫瘤發(fā)生、應(yīng)激反應(yīng)等多種重要的生物學(xué)過程。在小鼠中，敲除負(fù)責(zé)miRNA成熟的關(guān)鍵基因Dicerl可導(dǎo)致卵巢、子宮等生殖器官發(fā)育異常和不育。但究竟哪些miRNA以及它們?nèi)绾握{(diào)控生殖器官的發(fā)育，尤其是原始卵泡形成，則尚無報(bào)道。為確定哪些miRNA參與原始卵泡形成的調(diào)控，我們利用miRNA

2、microarray檢測在原始卵泡形成前及形成時(shí)的小鼠卵巢中差異表達(dá)的miRNA，發(fā)現(xiàn)18條在原始卵泡形成過程中差異表達(dá)的miRNA。利用胎鼠卵巢體外培養(yǎng)結(jié)合脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等方法，我們建立了卵泡形成基因/miRNA功能篩選系統(tǒng)。通過miRNAmimics或inhibitors分別轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的胎鼠卵巢，我們對這18條miRNA在卵巢中進(jìn)行超表達(dá)和功能抑制實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其中5條miRNAmimics和6條inhibitors可顯著影響原始卵泡的形成。

3、為進(jìn)一步了解這些miRNA如何調(diào)控原始卵泡的形成，我們開發(fā)了生殖系統(tǒng)專用的miRNA靶基因預(yù)測軟件(SMESE)，并用于對上述功能miRNA的靶基因進(jìn)行了預(yù)測，且通過實(shí)時(shí)定量PCR和熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)對預(yù)測結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證。發(fā)現(xiàn)這些功能miRNA通過多種途徑調(diào)節(jié)原始卵泡的形成，如miR-153通過抑制Caspase-2mRNA的翻譯來減少卵母細(xì)胞的凋亡，從而促進(jìn)原始卵泡的形成；miR-200a*通過抑制Cdh-2的mRNA和蛋白的表達(dá)調(diào)控卵

4、巢細(xì)胞之間的粘附與通訊，進(jìn)而抑制原始卵泡的形成。我們發(fā)現(xiàn)，miR-200a*不但調(diào)控Cdh-2的表達(dá)，其自身也受到雌激素的調(diào)控。利用條件性敲除小鼠模型，我們對卵巢體細(xì)胞和卵母細(xì)胞中的Cdh-2的功能進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵巢體細(xì)胞缺失Cdh-2之后會抑制原始卯泡形成，而Cdh-2在卵母細(xì)胞中的缺失并沒有影響原始卵泡的形成，表明雌激素通過卵巢體細(xì)胞中miR-200a*與其靶基因Cdh-2來抑制原始卵泡形成。我們的研究結(jié)果，不僅第一次系統(tǒng)地證