MicroRNA-143調(diào)控平滑肌表型轉(zhuǎn)化在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤形成中的作用研究.pdf

1、第一部分血流動(dòng)力學(xué)改變對(duì)microRNA-143表達(dá)的影響
　　研究目的:本文旨在通過(guò)建立不同的血流動(dòng)力學(xué)模型，初步探討血流動(dòng)力學(xué)改變對(duì)microRNA-143表達(dá)的影響，為探索顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)病機(jī)制、尋找潛在的藥物治療方法提供線(xiàn)索。
　　研究方法:SD大鼠90只(180-200g)，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組A(n=24)、實(shí)驗(yàn)組B(n=24)、實(shí)驗(yàn)組C(n=24)及對(duì)照組(n=18)。通過(guò)顯微外科技術(shù)建立三種不同的血流動(dòng)力學(xué)模型:A組:

2、結(jié)扎SD大鼠左側(cè)頸外動(dòng)脈起始部及枕動(dòng)脈、左側(cè)翼顎動(dòng)脈、右側(cè)頸總動(dòng)脈末端;B組:結(jié)扎SD大鼠左側(cè)頸外動(dòng)脈起始部及枕動(dòng)脈、右側(cè)頸總動(dòng)脈末端;C組:結(jié)扎SD大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈末端。對(duì)照組不做任何干預(yù)。通過(guò)彩色多普勒超聲儀測(cè)定各組大鼠在術(shù)前、術(shù)后1天、術(shù)后1月、術(shù)后3月左側(cè)頸總動(dòng)脈末端血流流速。獲取實(shí)驗(yàn)組（A、B、C組）及對(duì)照組(n=18)在術(shù)后1天(A:n=6，B:n=6，C:n=6)、術(shù)后1月(A:n=6，B:n=6，C:n=6)、術(shù)后3月(

3、A:n=6，B:n=6，C:n=6)大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈血管標(biāo)本，標(biāo)本取出后立即放入RNALater中以避免RNA的降解。通過(guò)Realtime-PCR技術(shù)測(cè)定上述不同時(shí)間點(diǎn)大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈miR-143的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:A組:左側(cè)頸總動(dòng)脈流速在術(shù)后1天明顯低于術(shù)前(p＜0.001)，術(shù)后1月較1天升高(p=0.027)，術(shù)后3月較1月無(wú)明顯差異。左側(cè)頸總動(dòng)脈miR-143在術(shù)后1天較對(duì)照組降低(p=0.005)，術(shù)后1月較1天升

4、高(p=0.04)，術(shù)后3月較1月降低(p=0.003)。B組:左側(cè)頸總動(dòng)脈流速在術(shù)后1天較術(shù)前降低(p＜0.001)，術(shù)后1月較1天升高(p=0.009)，術(shù)后3月較1月無(wú)明顯差異。左側(cè)頸總動(dòng)脈miR-143在術(shù)后1天較對(duì)照組降低(p=0.001)，術(shù)后1月較1天升高(p=0.02)，術(shù)后3月較1月降低(p=0.01)。C組:左側(cè)頸總動(dòng)脈流速在術(shù)后1天與術(shù)前相比無(wú)明顯差異，術(shù)后1月較1天升高(p=0.009)，術(shù)后3月較1月無(wú)明顯差異

5、。左側(cè)頸總動(dòng)脈miR-143在術(shù)后1天與對(duì)照組無(wú)明顯差異，術(shù)后1月較1天升高(p=0.01)，術(shù)后3月較1月降低(p=0.001)。
　　術(shù)后1天、1月、3月，A、B、C三組在術(shù)后同一時(shí)間點(diǎn)，大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈末端血流流速均互不相同(p＜0.05)。Realtime-PCR結(jié)果顯示:術(shù)后1天: A、B、C三組大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈miR-143表達(dá)兩兩比較顯示A組＜B組＜C組(p＜0.05)。術(shù)后1月:A、B、C三組大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈miR

6、-143表達(dá)兩兩比較顯示A組＜B組＜C組(p＜0.05)。術(shù)后3月: A、B、C三組大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈miR-143表達(dá)兩兩比較顯示A組＜B組＜C組(p＜0.05)。
　　研究結(jié)論:結(jié)扎大鼠頸部血管，僅僅保留左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈向顱內(nèi)供血，可使左側(cè)頸總動(dòng)脈血流流速降低最為顯著。在血流流速降低早期，血管壁miR-143表達(dá)也降低。大鼠頸總動(dòng)脈的血流動(dòng)力學(xué)環(huán)境發(fā)生變化后，血管壁發(fā)生自適應(yīng)改變，其管壁miR-143表達(dá)也發(fā)生相應(yīng)的變化。
　

7、　第二部分:MicroRNA-143對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤生成的影響
　　研究目的:本文旨在研究單純血流動(dòng)力學(xué)誘導(dǎo)的大鼠顱內(nèi)動(dòng)脈瘤模型，其成瘤部位血管在不同時(shí)間點(diǎn)，miR-143及平滑肌細(xì)胞表型的表達(dá)改變。以連續(xù)灌胃給藥辛伐他汀，研究其對(duì)成瘤部位血管miR-143表達(dá)、平滑肌細(xì)胞表型及動(dòng)脈瘤成瘤率的影響。
　　研究方法:SD大鼠138只(180-200g)，隨機(jī)分為動(dòng)脈瘤組(n=48)、干預(yù)組(n=48)、空白組(n=42)。動(dòng)脈瘤組

8、:通過(guò)顯微外科技術(shù)，結(jié)扎SD大鼠的右側(cè)頸總動(dòng)脈末端、左側(cè)頸外動(dòng)脈起始部和枕動(dòng)脈、左側(cè)翼顎動(dòng)脈，以此建立單純血流動(dòng)力學(xué)誘導(dǎo)的大鼠顱內(nèi)動(dòng)脈瘤模型;干預(yù)組:術(shù)前一天以20mg/kg辛伐他汀灌胃給藥，手術(shù)建模方式同動(dòng)脈瘤組，術(shù)后1天至3月繼續(xù)每天以20mg/kg辛伐他汀給藥，每周稱(chēng)量體重并據(jù)此調(diào)整給藥劑量;空白組:不做任何干預(yù)，常規(guī)飼養(yǎng)3個(gè)月。在術(shù)后1天、1月、3月分別取各組大鼠6只，將大鼠處死后對(duì)其左心室灌注生理鹽水至大鼠眼球、耳朵、嘴唇呈蒼

9、白色，剪斷頸椎并咬除頂骨，顯微鏡下小心取下Willis環(huán)血管并放入RNALater中以避免RNA的降解，通過(guò)Realtime-PCR技術(shù)測(cè)定上述不同時(shí)間點(diǎn)大鼠Willis環(huán)血管miR-143的表達(dá)。同時(shí)，術(shù)后1天、1月、3月另取6只大鼠以同樣的方法灌注生理鹽水后繼續(xù)灌注多聚甲醛，對(duì)獲取的顱腦組織進(jìn)行包埋、切片，通過(guò)免疫組化染色檢測(cè)前交通復(fù)合體血管MMP-2、MMP-9、a-SMA表達(dá)。由于顱內(nèi)動(dòng)脈瘤成瘤需要3個(gè)月，因此術(shù)后3月取動(dòng)脈瘤組

10、和干預(yù)組各12只，空白組6只，處死并通過(guò)左心室灌注Batson's＃17鑄型劑，灌注后的大鼠標(biāo)本保存于4℃冰箱，24小時(shí)后取出顱腦標(biāo)本，通過(guò)20％KOH溶液溶解腐蝕12小時(shí)，得到術(shù)后3月各組大鼠腦血管灌注鑄型樹(shù)脂標(biāo)本。通過(guò)掃描電鏡技術(shù)觀察各組大鼠腦血管灌注樹(shù)脂標(biāo)本并評(píng)估動(dòng)脈瘤樣改變。動(dòng)脈瘤的瘤樣改變程度分為四個(gè)等級(jí):0級(jí):正常的血管鑄型;1級(jí):血管管徑均勻擴(kuò)張、迂曲;2級(jí):淺梭樣抬高;3級(jí):囊狀或局部動(dòng)脈瘤樣擴(kuò)張。
　　研究結(jié)果:

11、術(shù)后1天:干預(yù)組Willis環(huán)miR-143表達(dá)較動(dòng)脈瘤組無(wú)明顯差異，動(dòng)脈瘤組較空白組升高(p＜0.001); MMP-2和MMP-9:干預(yù)組較動(dòng)脈瘤組無(wú)明顯差異，動(dòng)脈瘤組較空白組升高(p＜0.001);α-SMA:干預(yù)組較動(dòng)脈瘤組及空白組均無(wú)明顯差異。術(shù)后1月:干預(yù)組Willis環(huán)miR-143表達(dá)較動(dòng)脈瘤組升高(p=0.001)，動(dòng)脈瘤組較空白組降低p=0.002）;MMP-2和MMP-9:干預(yù)組較動(dòng)脈瘤組降低(p＜0.001)，動(dòng)

12、脈瘤組較空白組升高(p＜0.001);α-SMA:干預(yù)組較動(dòng)脈瘤組升高(p＜0.001)，動(dòng)脈瘤組較空白組無(wú)明顯差異。術(shù)后3月:干預(yù)組Willis環(huán)miR-143表達(dá)較動(dòng)脈瘤組升高(p=0.002)，動(dòng)脈瘤組較空白組降低(p＜0.001); MMP-2和MMP-9:干預(yù)組較動(dòng)脈瘤組降低(p＜0.001)，動(dòng)脈瘤組較空白組升高(p＜0.001);α-SMA:干預(yù)組較動(dòng)脈瘤組升高(p＜0.001)，動(dòng)脈瘤組較空白組無(wú)明顯差異。
　　掃

13、描電鏡結(jié)果分析顯示:干預(yù)組動(dòng)脈瘤樣改變程度較動(dòng)脈瘤組輕(p=0.045)(0級(jí)n=2，1級(jí)n=6，2級(jí)n=3，3級(jí)n=1)，但干預(yù)組成瘤較空白組依然明顯(p＜0.001);動(dòng)脈瘤組較空白組，顱內(nèi)動(dòng)脈瘤成瘤明顯(p＜0.001)（0級(jí)n=0，1級(jí)n=3，2級(jí)n=6，3級(jí)n=3）;空白組未見(jiàn)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤形成。
　　研究結(jié)論:在動(dòng)脈瘤形成過(guò)程中，顱內(nèi)Willis環(huán)miR-143表達(dá)降低，平滑肌細(xì)胞分泌型表達(dá)增強(qiáng)。辛伐他汀可以上調(diào)顱內(nèi)Wil