探討HSP90在主動(dòng)脈夾層過程中對(duì)平滑肌表型轉(zhuǎn)化的作用.pdf

1、研究背景及目的:
　　熱休克蛋白(HSPs)作為一種含量極其豐富同時(shí)在生物進(jìn)化過程中高度保守的蛋白質(zhì)家族，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境紊亂或受到外界刺激時(shí)會(huì)顯著上調(diào)以增強(qiáng)細(xì)胞應(yīng)激能力及適應(yīng)能力。熱休克蛋白90(HSP90)作為HSPs家族中的成員之一，在眾多生理及病理過程中均起到重要的作用，近些年隨著HSP90抑制劑的研究逐步深入，目前以17-AAG為代表藥物的格蘭德霉素衍生物已經(jīng)進(jìn)入諸多血液病及實(shí)體瘤單藥治療Ⅱ期臨床實(shí)驗(yàn)。而HSP90在心血管領(lǐng)

2、域的作用機(jī)制也在逐步深入進(jìn)行，目前已有研究表明，HSP90抑制劑17-AAG對(duì)于穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊有一定的作用，相關(guān)的研究也在肺動(dòng)脈高壓及腹主動(dòng)脈瘤中看到了一定的成效，但其在主動(dòng)脈夾層發(fā)生發(fā)展過程中的作用目前尚無報(bào)道。
　　主動(dòng)脈夾層(AD)最為危重的急癥之一，盡管目前的診療水平已有了明顯提升，但因夾層急性破裂而導(dǎo)致的院外死亡率仍居高不下，目前對(duì)于主動(dòng)脈夾層的機(jī)制性研究認(rèn)為，除了彈力纖維的退行性變外，血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)

3、生物學(xué)特性的改變是參與大動(dòng)脈疾病中的重要部分，因此，針對(duì)平滑肌細(xì)胞的機(jī)制研究也正在逐步成為了解大動(dòng)脈疾病的突破點(diǎn)。
　　本實(shí)驗(yàn)首先旨在明確HSP90在AD疾病發(fā)生發(fā)展中血清及組織的表達(dá)水平并推測(cè)其是否與平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化存在一定的相關(guān)性，接下來在細(xì)胞水平明確HSP90抑制劑是否對(duì)VSMCs的表型轉(zhuǎn)化具有影響，同時(shí)驗(yàn)證其對(duì)VSMCs生物學(xué)特性的影響，最后在AD的動(dòng)物模型中應(yīng)用HSP90抑制劑觀察其對(duì)疾病的治療效果。
　　方法:

4、
　　收集20例從2014年9月至2015年3月在長海醫(yī)院心血管外科因急性Stanford A型胸主動(dòng)脈夾層行急診手術(shù)患者的血清及術(shù)中胸主動(dòng)脈組織，同期選取20例志愿者血清及8例心臟移植供體正常主動(dòng)脈組織作為對(duì)照。液氮標(biāo)本用于提取組織RNA行定量PCR、提取組織蛋白行Western blot;多聚甲醛固定后的標(biāo)本行常規(guī)染色及免疫組化染色。
　　膠原酶消化法獲得SD大鼠原代胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，通過PDGF-bb誘導(dǎo)大鼠VSMC

5、s發(fā)生生物學(xué)性狀的改變，用HSP90抑制劑17-DMAG進(jìn)行干預(yù)，對(duì)VSMCs的生物學(xué)功能進(jìn)行檢測(cè)，包括平滑肌細(xì)胞表型相關(guān)標(biāo)志物RNA及蛋白水平的改變、CCK8法測(cè)定增殖、平板劃線法測(cè)定遷移、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡。
　　選取60只4周齡雄性FVB小鼠，通過β-BAPN喂養(yǎng)聯(lián)合血管緊張素Ⅱ建立主動(dòng)脈夾層小鼠模型，并利用HSP90抑制劑17-DMAG干預(yù)模型，通過建模成功率及死亡率的比較以期獲得HSP90抑制劑是否能防治主動(dòng)脈

6、夾層，并對(duì)不同組中主動(dòng)脈組織提取組織蛋白行Western blot;多聚甲醛固定標(biāo)本行常規(guī)HE染色及彈力纖維染色。
　　結(jié)果:
　　1、大體標(biāo)本中，主動(dòng)脈夾層患者主動(dòng)脈組織中HSP90明顯升高，且表達(dá)定為于血管壁中膜層平滑肌細(xì)胞，并且推測(cè)HSP90的表達(dá)升高與平滑肌細(xì)胞合成型標(biāo)志物呈正相關(guān);2、在細(xì)胞水平上，HSP90抑制劑17-DMAG能抑制由PDGF-bb誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化，同時(shí)能抑制由PDGF-bb誘導(dǎo)的平滑肌