siRNA沉默HIF-1α、HIF-2α、HIF-1β在不同缺氧狀態(tài)下對BGC-823胃癌細胞VEGF表達的影響.pdf

1、目的：觀察不同缺氧條件下胃腺癌細胞系BGC-823中HIF-1α、HIF-2α、HIF-1β和VEGF的表達，探討三種HIF因子在低氧條件下調(diào)控胃癌血管生成的作用差異。
　　方法：分別用150、200、250、275μmol/L CoCl2模擬腫瘤內(nèi)部缺氧，缺氧時間分別為：2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h。采用實時定量聚合酶鏈反應（Real-time PCR）和Western blot法檢測HIF-1α、HIF-2

2、α、HIF-1β和VEGF的mRNA及蛋白表達情況。進一步運用RNA干擾(RNA interference, RNAi)技術采用小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）沉默BGC-823細胞，比較三者沉默VEGF的效果。
　　結果：⑴與常氧時比較，缺氧后HIF-1α、HIF-2α、VEGF的mRNA及蛋白表達均隨CoCl2濃度增加、時間延長而增加，但三者變化趨勢不一致， HIF-1α在缺氧早期迅速升高

3、，之后快速下降；HIF-2α和VEGF則在缺氧晚期表達最高，之后保持穩(wěn)定。HIF-1βmRNA和蛋白在常氧或缺氧下表達均無明顯變化（P>0.05）。⑵細胞分別特異性轉(zhuǎn)染 HIF-1α、HIF-2α和HIF-1βsiRNA后均能有效沉默各自基因的表達，同時VEGF的表達水平也隨之降低，且隨HIF-2α的下調(diào)幅度最顯著（P<0.05）。
　　結論：①BGC-823胃癌細胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-1β對乏氧刺激表現(xiàn)出不同的