堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)性能的影響.pdf

1、目的：間充質(zhì)干細(xì)胞具有自我復(fù)制、高度增殖和多向分化的能力，在組織與器官的修復(fù)再生方面有重要的作用。牙齦組織具有很強(qiáng)的組織愈合能力，取材容易、方便，并且愈合后無(wú)疤痕形成。牙齦組織中也存在著間充質(zhì)干細(xì)胞，和其他間充質(zhì)干細(xì)胞一樣，具有基本的干細(xì)胞特性，并且具有免疫調(diào)節(jié)功能。本課題旨在體外研究堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，為組織再生提供合適的種子細(xì)胞和細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
　　方法：
　　第一部分 GMSC的分離培

2、養(yǎng)和鑒定
　　1、GMSC的分離培養(yǎng)：在家長(zhǎng)知情同意下，取臨床中全身健康的接受冠延長(zhǎng)手術(shù)患者，術(shù)中切去的牙齦組織，采用酶消化法進(jìn)行分離、培養(yǎng)。
　　2、GMSC的鑒定：通過(guò)檢測(cè)GMSC的克隆形成能力、多向分化潛能（成骨分化能力、成脂分化能力）、間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物（STRO-1、CD146、CD90、CD105、CD45、CD34），對(duì)分離、培養(yǎng)的GMSC進(jìn)行鑒定。
　　第二部分 bFGF對(duì)GMSC生物學(xué)特性的影響<

3、br>　　1、GMSC的分離培養(yǎng)鑒定：在家長(zhǎng)知情同意下，取臨床中全身健康的接受冠延長(zhǎng)手術(shù)患者，術(shù)中切去的牙齦組織，采用酶消化法進(jìn)行分離、培養(yǎng)。通過(guò)檢測(cè)GMSC的克隆形成能力、多向分化潛能（成骨分化能力、成脂分化能力）、間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物（STRO-1、CD146、CD90、CD105、CD45、CD34），對(duì)分離、培養(yǎng)的GMSC進(jìn)行鑒定。
　　2、bFGF對(duì)GMSC生物學(xué)特性的影響的研究：通過(guò)繪制生長(zhǎng)曲線、CCK-8法研究bF

4、GF對(duì)GMSC增殖能力的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)bF GF對(duì)GMSC表達(dá)S TRO-1的影響。成骨誘導(dǎo)后通過(guò)檢測(cè)磷酸酶活性、茜素紅染色及鈣離子濃度測(cè)定、Rea l Time RT-PCR在mRNA水平檢測(cè)成骨分化相關(guān)基因BSP、OCN、ALP的表達(dá)，研究bFGF對(duì)GMSC成骨分化能力的影響。成脂誘導(dǎo)后通過(guò)油紅O染色、Real Time RT-PCR在mRNA水平檢測(cè)成脂分化相關(guān)基因LPL、PPARG的表達(dá)，研究bFGF對(duì)GMSC的成脂分化能

5、力的影響。
　　結(jié)果：
　　第一部分 GMSC的分離培養(yǎng)和鑒定
　　1、GMSC的分離培養(yǎng)：從人牙齦組織中分離出的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞成梭形，部分區(qū)域形成克隆。
　　2、GMSC的鑒定：GMSC具有克隆形成能力，成骨分化、成脂分化等多向分化潛能，表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞特異性表面標(biāo)記物，S TRO-1、CD146、CD90、CD105，不表達(dá)內(nèi)皮及造血干細(xì)胞的表面標(biāo)記物CD45、CD34，表明細(xì)胞具有間充質(zhì)干細(xì)胞的特征。<

6、br>　　第二部分 bFGF對(duì)GMSC生物學(xué)特性影響的研究
　　1、GMSC的分離培養(yǎng)鑒定：同上
　　2、bFGF對(duì)GMSC生物學(xué)特性影響的研究：細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及CCK-8結(jié)果顯示bFGF促進(jìn) GMSC的增殖能力，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。堿性磷酸酶活性、茜素紅染色、鈣離子定量分析、Real Time RT-PCR結(jié)果顯示bFGF抑制了GMSC的成骨分化能力。油紅O染色、Real Time RT-PCR結(jié)果顯示bFGF促進(jìn)GMSC的