Btk抑制劑對急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞生物學(xué)的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　急性髓系細(xì)胞白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是成人最為常見的一類急性白血病，其異質(zhì)性較高[1]，目前，其治療上仍然首選聯(lián)合化療的方法，然而，除急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)之外，其余分型的AML在采用聯(lián)合化療治療一段時(shí)間后，患者便對治療具有一定程度的耐藥傾向，總體治療效果較差。Btk抑制劑，又名布魯頓酪氨酸激酶抑制劑。Ibrutinib（中文名為依魯替尼）為一種小分子Btk抑制劑，它作為目

2、前治療B細(xì)胞系血液腫瘤的新藥[2-3]，已經(jīng)應(yīng)用于套細(xì)胞及慢性淋巴細(xì)胞白血病的臨床治療，而在AML細(xì)胞中研究較少，其機(jī)制也不甚明確，本課題旨在研究Btk抑制劑Ibrutinib對AML細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及部分機(jī)制的研究。
　　方法：
　　分別用不同濃度的Ibrutinib作用于AML細(xì)胞系U937、OCI-AML3后，采用CCK8的方法及流式細(xì)胞術(shù)分別來檢測Ibrutinib對AML細(xì)胞系的細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影

3、響，用Western-Blot的方法分別檢測Ibrutinib對CleavedCaspase-3、P-Akt、NF-KB(p65)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　不同濃度的Ibrutinib（0，2.5，5，10，15，20，25，30，50 umol/L）作用于U937、OCI-AML3細(xì)胞系24h、48h、72h后，可見細(xì)胞活力下降，細(xì)胞增殖受到抑制，抑制作用的強(qiáng)度與藥物濃度-劑量、作用時(shí)間呈正相關(guān)。
　　根據(jù)細(xì)

4、胞增殖實(shí)驗(yàn)的檢測結(jié)果，選取接近24h和48h時(shí)IC50對應(yīng)的Ibrutinib濃度作為兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(24h、48h)的實(shí)驗(yàn)組濃度，以不加藥為對照組。進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測，其結(jié)果如下:
　　(1)Ibrutinib作用24h:對照組、實(shí)驗(yàn)組U937細(xì)胞凋亡率分別為:7.41％±1.08％，30.76±1.30％(P＜0.001);對照組、實(shí)驗(yàn)組OCI-AML3細(xì)胞凋亡率分別為:12.08％±1.36％,23.54％±1.14％(P＜0.0

5、01)。
　　(2)Ibrutinib作用48h:對照組、實(shí)驗(yàn)組U937細(xì)胞凋亡率分別為:23.74％±2.50％，44.21％±1.32％(P＜0.001);對照組、實(shí)驗(yàn)組OCI-AML3細(xì)胞凋亡率分別為:28.62％±1.4％,57.63％±3.10％(P＜0.001)。
　　分別以不同濃度的（0、20、30um/L）Ibrutinib作用于U937、OCI-AML3細(xì)胞24h小時(shí)后，兩細(xì)胞系的G0/G1期細(xì)胞比例升高，

6、S期、G2/M期細(xì)胞比例下降。
　　Ibrutinib作用于U937細(xì)胞系24h，提取蛋白，用western-blot方法檢測蛋白表達(dá)情況，結(jié)果示:P-Akt、NF-KB(p65)此兩種蛋白在實(shí)驗(yàn)組表達(dá)減少;與之相反，Cleaved Caspase-3蛋白在實(shí)驗(yàn)組表達(dá)增多。
　　結(jié)論：
　　Ibrutinib對AML細(xì)胞系（U937、OCI-AML3）有抑制增殖的作用，且抑制作用的強(qiáng)度具有濃度-劑量依賴性和時(shí)間依賴性。

7、
　　Ibrutinib對AML細(xì)胞系(U937、OCI-AML3)有促進(jìn)凋亡的作用。
　　Ibrutinib作用于AML細(xì)胞系(U937、OCI-AML3)，能使G0/G1期細(xì)胞比例增高，S期、G2/M期細(xì)胞比例降低，使細(xì)胞從G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變過程存在阻滯。
　　Ibrutinib作用后，P-Akt、NF-KB(p65)蛋白表達(dá)下調(diào); Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)，考慮Ibrutinib能抑制A