急性髓系白血病細胞熱休克蛋白90的表達及其作用機制研究.pdf

1、目的:本研究檢測HSP90在急性髓系白血病細胞中的表達,分析其在初治、化療緩解期及復發(fā)時基因表達水平的變化,探討HSP90與急性白血病FAB分型及預后的關系。研究HSP90抑制劑對白血病細胞株HL-60的抑制作用及其可能的機制。
　　方法:采用RT-PCR的方法檢測初治、復發(fā)和緩解期急性髓系白血病患者其單個核細胞的HSP90mRNA表達水平,共80例(男45例,女35例),健康人員10人為正常對照組。分析HSP90mRNA表達水平

2、與FAB分型、與預后的關系。同時檢測髓系白血病細胞株HL-60為HSP90mRNA高表達,故將其設為HSP90的陽性對照。應用MTT法檢測HL-60細胞經(jīng)過不同濃度的HSP90抑制劑17-DMAG和不同時間處理而發(fā)生的抑制作用,應用WesternBlot方法檢測HL-60細胞經(jīng)過不同濃度HSP90抑制劑處理后HSP90和Akt蛋白水平的變化。
　　結果:
　　1、HSP90mRNA在急性髓系白血病細胞株HL-60中均有明顯高

3、表達:HSP90/β-actin的表達水平分別為0.523,初治患者中HSP90mRNA的陽性表達率為100％,平均表達水平為(HSP90/β-actin)為0.523±0.225,明顯高于正常對照組(表達率亦為100%,平均表達水平0.193±0.054),結果有顯著性差異(P<0.05)。
　　2、緩解組患者中HSP90mRNA表達水平為0.243±0.087,表達率100%,與正常對照組相比HSP90表達均無顯著性差異(P>

4、0.05)。但緩解組HSP90明顯低于初治組(P<0.05)。復發(fā)組患者中HSP90mRNA在復發(fā)組表達水平為0.875±0.194,高于正常對照組(P<0.05)。且與初治組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
　　3、HSP90mRNA在FAB分型顯示出在M3亞型中低表達,在M5亞型中高表達的趨勢。但各型之間無統(tǒng)計學差異。
　　4、體外研究結果顯示,17-DMAG能抑制HL-60細胞的生長,并且隨著藥物濃度的升高、作用時間

5、的延長抑制率明顯提高,具有濃度、時間依賴性。
　　5、對于不同濃度17-DMAG、48小時處理的HL-60細胞,應用WesternBlot方法檢測細胞中HSP90蛋白和Akt蛋白的表達,HSP90蛋白和Akt蛋白含量隨著17-DMAG濃度的升高而出現(xiàn)下降趨勢。
　　結論:
　　1、在正常人、白血病細胞株HL-60和急性髓系白血病患者中均有HSP90mRNA的表達。在初治患者中有HSP90表達顯著升高,與正常人比較有顯著