骨髓微環(huán)境介導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞化療耐藥及機(jī)制研究.pdf

1、【目的】部分模擬AML的骨髓微環(huán)境，以研究M3 型AML 系細(xì)胞HL-60 暴露于骨髓基質(zhì)細(xì)胞MSC后對(duì)化療藥柔紅霉素藥物敏感性的改變，并探討白血病骨髓微環(huán)境中骨髓骨髓基質(zhì)細(xì)胞MSC 介導(dǎo)HL-60 化療耐藥的部分機(jī)制。
　　 【方法】在體外用AML 病人的骨髓基質(zhì)細(xì)胞MSC與AML 系的HL-60細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),以此建立MSC與HL-60的共培養(yǎng)化療耐藥模型；流式細(xì)胞術(shù)檢測單獨(dú)HL-60細(xì)胞和共培養(yǎng)模型的HL-60細(xì)胞對(duì)化療藥

2、柔紅霉素的藥物敏感性；CCK8 檢測MSC的條件培養(yǎng)基影響HL-60細(xì)胞對(duì)柔紅霉素的藥物敏感性；Elisa 檢測MSC 及共培養(yǎng)體系能分泌FN；流式細(xì)胞術(shù)檢測FN 影響HL-60細(xì)胞對(duì)柔紅霉素的敏感性；CCK8 檢測FN 影響HL-60細(xì)胞對(duì)柔紅霉素的藥物敏感性；流式細(xì)胞術(shù)分析MSC和FN 對(duì)HL-60細(xì)胞周期的影響；Western Blot 探討MSC和FN 介導(dǎo)HL-60細(xì)胞的耐藥機(jī)制。
　　 【結(jié)果】MSC 能增加HL-6

3、0細(xì)胞周期G1 期的比率且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在柔紅霉素藥物的不同濃度、不同的時(shí)間點(diǎn)作用下，部分模擬骨髓微環(huán)境的MSC細(xì)胞顯示出介導(dǎo)HL-60細(xì)胞化療耐藥；MSC細(xì)胞的條件培養(yǎng)基也能顯著性減少柔紅霉素對(duì)HL-60的抑制率；Elisa 實(shí)驗(yàn)檢測到MSC和共培養(yǎng)耐藥模型中能分泌大量的FN；進(jìn)一步研究FN 對(duì)柔紅霉素誘導(dǎo)HL-60 凋亡的影響，F(xiàn)N 通過與HL-60 粘附減少柔紅霉素誘導(dǎo)HL-60的凋亡率和細(xì)胞生長抑制率，結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異； We

4、stern Blot 結(jié)果顯示在MSC與HL-60細(xì)胞共培養(yǎng)耐藥模型中，P-AKT、ILK、蛋白明顯比單獨(dú)HL-60 加柔紅霉素組明顯上調(diào)，與細(xì)胞凋亡及抑制腫瘤的相關(guān)蛋白P-P38 則明顯下調(diào)；在FN 介導(dǎo)的耐藥模型中P-AKT、ILK 明顯上調(diào)。
　　 【結(jié)論】在骨髓微環(huán)境中骨髓基質(zhì)細(xì)胞以上調(diào)HL-60細(xì)胞的ILK、P-AKT，同時(shí)下調(diào)P-P38 介導(dǎo)了HL-60 對(duì)柔紅霉素的耐藥，MSC分泌的細(xì)胞外基質(zhì)FN 部分參與了這個(gè)過