阻斷熱休克蛋白90分子伴侶功能對(duì)慢性髓系白血病細(xì)胞的影響及其分子機(jī)制研究.pdf

1、熱休克蛋白90(Hsp90)是細(xì)胞內(nèi)最重要的分子伴侶蛋白，在其輔助伴侶分子的協(xié)助下，調(diào)節(jié)眾多底物蛋白的構(gòu)象成熟及穩(wěn)定性。目前發(fā)現(xiàn)與腫瘤細(xì)胞的異常增殖、藥物耐受及抗凋亡信號(hào)通路活化密切相關(guān)的多種激酶蛋白(Bcr/Abl、Src、Akt)、生長(zhǎng)因子受體(EGFR、ErbB2)、轉(zhuǎn)錄因子(突變型p53、低氧誘導(dǎo)因子HIF)等都是Hsp90的底物蛋白。因此Hsp90成為抗腫瘤治療的理想靶點(diǎn)。 目的：①研究Hsp90抑制劑17-AAG、組

2、蛋白去乙?；敢种苿〧K228誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞株K562凋亡及其分子機(jī)制。②研究17-AAG、FK228聯(lián)合多柔比星(DNR)對(duì)K562細(xì)胞的殺傷作用。 方法：采用四氮唑鹽還原法(MTT法)檢測(cè)藥物對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的劑量-時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，瑞氏-姬姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，Hoechst33342熒光染色觀察凋亡細(xì)胞核的變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期變化，Western蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)相關(guān)蛋白分子的變化，免疫共沉

3、淀法觀察蛋白分子之間的關(guān)系。 結(jié)果：①17-AAG、FK228呈時(shí)間和劑量依賴性殺傷K562細(xì)胞，阻斷細(xì)胞周期于G0/G1期，有效清除Hsp90底物蛋白，阻斷Raf/Mek-Erk及PI3K/Akt信號(hào)通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。②FK228使Hsp70發(fā)生乙酰化修飾，但不能影響Hsp90的乙?；潭?。③17-AAG、FK228與DNR聯(lián)合用藥，呈現(xiàn)劑量依賴性殺傷效應(yīng)，藥物濃度比例不同時(shí)其聯(lián)合效應(yīng)不同。 結(jié)論：①17-AAG直接

4、抑制K562細(xì)胞中Hsp90的分子伴侶功能，F(xiàn)K228通過(guò)使Hsp70發(fā)生乙?；揎楅g接影響Hsp90的分子伴侶功能，從而特異性清除其底物蛋白Bcr/Abl、Raf-1、Akt、Cdk4、XIAP、survivin等，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)與增殖和抗調(diào)亡相關(guān)的Raf/Mek-Erk、PI3K/Akt信號(hào)通路被阻斷，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡。②17-AAG、FK228與DNR聯(lián)合用藥，呈現(xiàn)劑量依賴性殺傷效應(yīng)，藥物濃度比例變化會(huì)影響聯(lián)合殺傷效應(yīng)。