長(zhǎng)鏈非編碼RNAMEG3對(duì)急性髓細(xì)胞白血病生長(zhǎng)的影響及其分子機(jī)制.pdf

1、目的:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是最常見(jiàn)的血液腫瘤，預(yù)后差，長(zhǎng)期存活率僅5-16％。目前，研究發(fā)現(xiàn)AML的發(fā)病與許多因素有關(guān)，如復(fù)發(fā)性的體細(xì)胞突變及基因表達(dá)與表觀遺傳學(xué)的改變，然而AML發(fā)病的分子機(jī)制尚不清楚，因此迫切的需要對(duì)AML的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)是一種長(zhǎng)度大于200bp，沒(méi)有編碼功能的RNA，能夠調(diào)控染色質(zhì)重構(gòu)、組蛋白修飾和DNA甲基化等，深刻影響著腫

2、瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展。長(zhǎng)鏈非編碼RNA MEG3是新近發(fā)現(xiàn)的一種具有抑癌功能的長(zhǎng)鏈非編碼RNA，在多種腫瘤的的形成和進(jìn)展中發(fā)揮著非常重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)MEG3在急性髓細(xì)胞白血病(AML)中的表達(dá)明顯下降，但其對(duì)AML腫瘤生物學(xué)行為的影響至今還不清楚。本研究旨在應(yīng)用功能獲得（基因過(guò)表達(dá)）手段闡明MEG3對(duì)AML腫瘤生長(zhǎng)的影響，希望能進(jìn)一步揭示AML發(fā)病的分子機(jī)制，為AML的診斷提供新的靶標(biāo)。
　　方法:1、利用RT-qPCR檢測(cè)

3、AML細(xì)胞系中MEG3的表達(dá)水平。2、構(gòu)建MEG3慢病毒過(guò)表達(dá)載體。3、建立穩(wěn)定過(guò)表達(dá)MEG3的U937細(xì)胞株，RT-qPCR檢測(cè)MEG3的表達(dá)。4、MTT檢測(cè)MEG3對(duì)AML細(xì)胞增殖的影響。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MEG3對(duì)AML細(xì)胞凋亡及周期的影響。6、在穩(wěn)定表達(dá)MEG3的U937細(xì)胞株中用RT-qPCR和Western Blot檢測(cè)MEG3下游靶標(biāo)MDM2、Rb、DNMT3A的變化。
　　結(jié)果:1、RT-qPCR檢測(cè)AML細(xì)胞系，

4、發(fā)現(xiàn)AML細(xì)胞系普遍低表達(dá)或不表達(dá)MEG3。2、成功構(gòu)建MEG3慢病毒過(guò)表達(dá)載體，并篩選出穩(wěn)定表達(dá)MEG3的U937細(xì)胞株。3、利用MEG3過(guò)表達(dá)載體處理AML細(xì)胞48h后，用MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)MEG3組細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組明顯下降。4、利用MEG3過(guò)表達(dá)載體處理AML細(xì)胞48h后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡及周期，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，處理組細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞停滯在G0/G1期，且S期明顯降低。5、利用穩(wěn)定表達(dá)MEG3的U937