LncRNA UCHL1-AS1對肝癌細胞生物學行為的影響及其相關蛋白網(wǎng)絡分析.pdf

1、目的:通過RNA干擾技術轉染人肝癌細胞株Bel-7402，進一步運用體外實驗觀察過表達UCHL1-AS1基因對肝癌細胞株增殖、凋亡、侵襲、遷移能力的影響，最后運用生物信息學分析UCHL1-AS1相關蛋白及其蛋白作用網(wǎng)絡。
　　方法:
　　1、按慢病毒轉染說明書進行操作，對人肝癌細胞株Bel-7402進行UCHL1-AS1基因過表達轉染，轉染后用嘌呤霉素篩選穩(wěn)定轉染細胞株。將細胞分為三組，分別命名為實驗組(LV-UCHL1-A

2、S1)、陰性對照組(LV-NC)和空白組（Control）進行實驗操作。qRT-PCR方法檢測實驗組、陰性對照組的轉染效果。
　　2、MTT法、平板克隆形成實驗檢測細胞增殖能力;流式細胞技術比較各組細胞的凋亡情況;Transwell實驗觀察細胞運動能力。
　　3、運用Starbase2.0在線軟件分析UCHL1-AS1基因及UCHL1基因的相關蛋白，再通過STRING在線軟件分析其蛋白基因的作用網(wǎng)絡圖，最后利用DAVID軟件

3、對網(wǎng)絡圖中相關基因進行KEGG通路分析和GO富集分析。
　　結果:
　　1、qRT-PCR方法檢測細胞UCHL1-AS1基因在實驗組的表達情況明顯高于陰性組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2、MTT法結果顯示實驗組細胞生長速度慢于陰性對照組和空白組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。平板克隆形成實驗顯示，實驗組細胞克隆形成率（8.0±1.7）％明顯低于陰性對照組（18.7±1.8）％和空白組（19.13±1

4、.19）％的克隆形成率，差異有統(tǒng)計學意義(F=47.201，P＜0.001)。
　　3、流式細胞技術結果，實驗組細胞的凋亡率為（0.51±0.07）％，陰性對照細胞的凋亡率（0.87±0.2）％，空白組細胞的凋亡率（4.95±0.84）％，實驗組和陰性對照組分別與空白組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(F=72.323，P＜0.001)，實驗組和陰性對照組相比，差異不具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4、侵襲實驗結果顯示，實驗組

5、穿過聚碳酸酯膜的細胞數(shù)為（10±4.3個），空白組和陰性組分別為（86.3±5.5個）、（79.3±11.9個）。與其他兩組細胞相比，實驗組細胞的侵襲能力減弱，差異有統(tǒng)計學意義(F=83.605，P＜0.001)。
　　5、遷移實驗結果顯示，實驗組穿過聚碳酸酯膜的細胞數(shù)為（52.33±4.36個），空白組和陰性組分別為(97.11±14.41個)、(87.78±4.76個)。實驗組比其他兩組細胞的侵襲能力減弱，差異有統(tǒng)計學意義(F

6、=20.13，P=0.002)。
　　6、Starbase v2.0在線軟件分析結果顯示，elF4Alll基因分別與UCHL1-AS1基因和UCHL1基因存在相互作用。
　　7、STRING在線軟件作elF4Alll基因和UCHL1基因的蛋白作用網(wǎng)絡圖結果顯示:elF4Alll、CWC22、UBC、UPF3A、MAGOH、CASC3、SMG1、UPF1、EIF4G1、RNPS1、UPF3B基因存在相互作用;UCHL1、COP

7、S5、CDKN2A、TP53、UBA52、UBC、USP21、 UCHL1、KRT4、HSPA8、SP90AA1、SNCA基因存在相互作用。
　　8、elF4Alll基因相關蛋白KEGG通路分析結果顯示MAGOH、EIF4A3基因參與剪接體相關通路的過程，GO分析結果顯示elF4Alll、CWC22、UBC、UPF3A、MAGOH、CASC3、SMG1、UPF1、EIF4G1、RNPS1、UPF3B基因參與mRNA轉錄、mRNA核

8、運輸、細胞大分子分解過程等生物進程，定位于核漿和剪接體等細胞內，具有RNA結合、依賴ATP的解螺旋酶活性等分子功能。UCHL1、COPS5、CDKN2A、TP53、UBA52、UBC、USP21、UCHL1、KRT4、HSPA8、SP90AA1、SNCA基因的KEGG通路分析顯示參與膀胱癌、非小細胞肺癌、膠質瘤等疾病相關通路過程，GO分析結果顯示這些基因參與蛋白去泛素化、轉錄調控、基因表達調控等生物進程，定位于細胞中的胞液、細胞器等部位

9、，具備泛素巰基酯酶活性和硫醇酯水解酶活性等分子功能。
　　結論:
　　1.UCHL1-AS1基因可抑制人肝癌細胞株Bel-7402的增殖及侵襲遷移能力，對細胞株凋亡無明顯影響。
　　2.UCHL1-AS1基因和UCHL1基因分別與elF4Alll基因存在相關作用。
　　3.elF4Alll基因與UCHL1基因分別同多個蛋白基因相互作用并構成網(wǎng)絡圖，對下游基因進行調控。
　　4.elF4Alll基因網(wǎng)絡圖中的