諾如病毒P結(jié)構(gòu)域與EV71中和表位的嵌合蛋白及其特征研究.pdf

1、腸道病毒71型(Enterovirus71，EV71)是導(dǎo)致5歲以下兒童患手足口病(hand-foot-and-mouth disease，HFMD)的主要病原體之一，同時該病毒具有嗜神經(jīng)組織的特性，致死率和致殘率都很高。諾如病毒(Norovirus，NoV)是造成兒童和成人非細菌性急性胃腸炎流行的重要原因。這兩種病毒都對人類的健康構(gòu)成了不可忽視的威脅，研制有效的疫苗是防治它們最有效的途徑之一。
　　本研究的目的是獲得含有EV71

2、線性中和表位和諾如病毒P結(jié)構(gòu)域的嵌合蛋白，并對其進行初步的免疫原性評價，主要包括了3個部分的研究內(nèi)容。第一部分，運用基因克隆的技術(shù)，將文獻報道的3個EV71線性中和表位以單個或串聯(lián)的形式分別克隆到含諾如病毒P結(jié)構(gòu)域的原核表達質(zhì)粒中，經(jīng)測序驗證重組質(zhì)粒;第二部分，將構(gòu)建正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到大腸桿菌表達系統(tǒng)中，通過IPTG誘導(dǎo)嵌合蛋白表達，并用親和純化的方式對嵌合蛋白進行純化;第三部分，用純化后的嵌合蛋白免疫小鼠，通過免疫印跡、ELISA以

3、及中和試驗對嵌合蛋白的免疫原性進行初步的評價。
　　通過以上3個部分的研究，我們?nèi)〉昧巳缦陆Y(jié)果:1）成功構(gòu)建了含EV71的3個單表位、4個串聯(lián)表位與諾如病毒P結(jié)構(gòu)域嵌合的重組質(zhì)粒;2）這些重組質(zhì)粒在大腸桿菌中所表達的7個嵌合蛋白都以部分可溶的形式存在;3）通過親和純化獲得的P結(jié)構(gòu)域和Pm+SP55-70-28嵌合蛋白都能夠自發(fā)形成直徑約20nm的顆粒，用這兩種蛋白免疫小鼠后獲得的血清抗體滴度分別是1∶32，000、1∶1，024，

4、000;4)免疫印跡分析表明，(i)7個嵌合蛋白都能與抗諾如病毒P結(jié)構(gòu)域的抗血清發(fā)生反應(yīng);(ii)除了含單表位SP55和SP28的嵌合蛋白外，其它嵌合蛋白均能與抗EV71的抗血清反應(yīng);(iii)除了P結(jié)構(gòu)域蛋白、含單表位SP55和SP70以及含串聯(lián)表位SP55-70的嵌合蛋白外，其它嵌合蛋白都能與抗Pm+SP55-70-28的抗血清發(fā)生反應(yīng);5）中和試驗結(jié)果表明，抗Pm+SP55-70-28小鼠血清的中和抗體效價約為1∶4。