人腸道病毒71型的構(gòu)象中和表位的定位研究.pdf

1、EV71近年來在全球廣泛流行,在中國大陸地區(qū)的流行形勢尤其嚴(yán)重。其傳染途徑多樣、隱形感染彤勢嚴(yán)重、傳播速度快、感染斂病機制復(fù)雜、致病重癥患者和死亡患者數(shù)目較高。因此,迫切需要行之有效的疫苗和治療藥物來有效控制EV71的流行和感染。但日前有關(guān)EV71中和表位和抗原性的認(rèn)識還十分不足,嚴(yán)重制約了疫苗和治療藥物的研究。本研究通過構(gòu)建EV71特異的單克隆抗體庫,進而建立了一套中和單抗盤,并應(yīng)用于EV71抗原性質(zhì)研究,為疫苗株的選擇提供了新的評估

2、工具;同時探索建立了逃逸病毒方法學(xué)以鑒定EV71構(gòu)象中和表位,并系統(tǒng)地研究了EV71主要抗原性區(qū)域的組成和分布特征,為疫苗研制和抗體治療奠定了基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容如下:
　　 首先,利用分子進化分析和免疫原性分析方法,從18株EV71代表株中選擇病毒株Jiangsu作為免疫原制備出186株EV71特異性單抗,為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 其次,對EV71單抗庫進行了全面的性質(zhì)鑒定,發(fā)現(xiàn)大量構(gòu)緣型中和單抗,通過鑒定中和單抗中

3、和能力等性質(zhì),建立由11株代表株構(gòu)成的抗EV71中和單抗盤(mAbpanel)。
　　 第三,為系統(tǒng)認(rèn)識構(gòu)象型中和單抗的表位結(jié)構(gòu)特征,本研究探索了逃逸病毒鑒定EV71中和表位的可行性。以線性中和單抗K8G2為模型,探索建立逃逸突變相關(guān)的方法學(xué),并證實利用逃逸突變分析方法對K8G2識別表位的鑒定結(jié)果與利用表位步移方法的鑒定結(jié)果基本一致,表明該方法用于鑒定EV71中和表位是有效可行的。
　　 第四,利用已建立的逃逸病毒方法學(xué)

4、平臺,對單抗盤各代表性中和單抗識別表位進行系統(tǒng)鑒定。結(jié)合逃逸突變病毒與單抗的反應(yīng)性變化和同源模建研究結(jié)果,確定了EV71三個主要的構(gòu)象型中和表位區(qū),分別是Site1(VP1:215,217,218,220;VP2:141;VP3:182),Site2(VP1:292;VP2:223,224,225;VP3:59,60,63,64,67,74,210)和Site3(VP1:97,99,104,108,166,167,242),因而闡明了E