腸道病毒71型疫苗免疫應(yīng)答機(jī)制研究.pdf

1、目前對(duì)大多數(shù)疫苗的保護(hù)機(jī)制缺乏了解,新型疫苗的研發(fā)設(shè)計(jì)仍停留在依靠“經(jīng)驗(yàn)”階段,導(dǎo)致疫苗研發(fā)時(shí)間長(zhǎng)且成本高。近年來(lái)系統(tǒng)疫苗學(xué)概念的提出,為疫苗學(xué)發(fā)展開(kāi)辟了新的思路。腸道病毒71型(EV71)疫苗是我國(guó)自主研發(fā)的新型疫苗,目前中國(guó)大陸3個(gè)廠家已完成的III期臨床試驗(yàn),結(jié)果顯示疫苗具有較好的安全性和保護(hù)效果,疫苗對(duì)EV71感染所致手足口病的保護(hù)率達(dá)90％以上,對(duì)EV71感染所引起相關(guān)疾病的保護(hù)率在80%以上。EV71疫苗為我國(guó)領(lǐng)先研發(fā)的創(chuàng)新

2、型疫苗,了解該疫苗的免疫機(jī)制對(duì)促進(jìn)EV71疫苗研發(fā)具有重要意義。本研究目的是探討EV71疫苗誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答機(jī)制,為EV71疫苗研發(fā)和應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　為了探討疫苗免疫應(yīng)答的共同機(jī)制,運(yùn)用薈萃分析(Meta分析)方法,分析自NCBI GEO數(shù)據(jù)庫(kù)和ArrayExpress數(shù)據(jù)庫(kù)中下載的疫苗免疫基因芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù),分別探討疫苗免疫機(jī)體后固有免疫和獲得性免疫在轉(zhuǎn)錄水平上共同的基因和通路,并應(yīng)用EV71疫苗免疫人群樣本采用RT-P

3、CR方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明疫苗誘導(dǎo)固有免疫共同基因和通路為IFN-I相關(guān)的基因和通路;疫苗誘導(dǎo)獲得性免疫共同基因主要為EEF1A1、IL-18,通路為B細(xì)胞和T細(xì)胞受體信號(hào)激活通路。
　　在Meta分析的基礎(chǔ)上,為揭示EV71疫苗的免疫機(jī)制,采用基因芯片和蛋白芯片技術(shù)探討EV71疫苗免疫機(jī)制,獲得了EV71疫苗免疫人群應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄組譜和蛋白組譜。固有免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明,IFN-I信號(hào)通路在EV71疫苗誘導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答中發(fā)揮

4、重要作用,應(yīng)用小鼠及基因缺陷小鼠模型驗(yàn)證該信號(hào)通路結(jié)果顯示, EV71疫苗誘導(dǎo)固有免疫應(yīng)答中存在一條 TLR4→IRF9→IFN-I→Jak-STAT→免疫細(xì)胞活化調(diào)控通路?；蚺c中和抗體水平關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果表明ELL2與中和抗體水平關(guān)聯(lián)性較高,提示該基因有可能作為預(yù)測(cè)中和抗體應(yīng)答的標(biāo)志物。獲得性免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明,差異表達(dá)基因主要參與細(xì)胞因子-細(xì)胞因子相互作用、細(xì)胞粘附作用、抗原加工和提呈作用等通路;基因與中和抗體的關(guān)聯(lián)性分析表

5、明MX1和MX2與抗體持久性應(yīng)答的關(guān)聯(lián)性較高,有可能作為免疫持久性預(yù)測(cè)水平的標(biāo)志物。對(duì)20個(gè)基因應(yīng)用 RT-PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示芯片檢測(cè)結(jié)果可靠。應(yīng)用蛋白芯片檢測(cè)獲得EV71疫苗獲得性免疫應(yīng)答的蛋白組譜,差異表達(dá)上調(diào)蛋白主要為炎癥反應(yīng)蛋白、趨化因子、干擾素相關(guān)蛋白和細(xì)胞間粘附分子;差異表達(dá)下調(diào)蛋白主要為免疫調(diào)節(jié)分子和炎癥前因子。蛋白因子與中和抗體水平關(guān)聯(lián)性分析得到ICAM-1和IP-10與中和抗體水平具有較高的相關(guān)性,提示 IC