綠原酸體外抑制腸道病毒71型的效應(yīng)機(jī)制.pdf

1、目的：探討綠原酸對(duì)腸道病毒71型（EV71）的抑制作用及分子機(jī)制。
　　方法：（1）斑塊形成試驗(yàn)檢測(cè)不同濃度綠原酸對(duì)EV71感染的抑制作用；（2）噻唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)不同濃度綠原酸和利巴韋林對(duì)RD細(xì)胞的細(xì)胞毒作用；病毒斑塊減少試驗(yàn)分析綠原酸對(duì)EV71吸附作用的影響；（3）時(shí)間過(guò)程試驗(yàn)檢測(cè)綠原酸抑制效用與病毒生命周期的相關(guān)性；（4）綠原酸處理 RD細(xì)胞后，采用 RT-PCR和Western-Blotting法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)EV71

2、/VP1、2A、3C和3D mRNA及蛋白酶的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）綠原酸在5、10和20μg/mL劑量時(shí)對(duì)EV71具有良好的抑制率，分別為83.4±3.0%、88.7±1.9%和94.7±1.8%，其半數(shù)抑制濃度（IC50）=45.7μg/mL。利巴韋林在20、40和80μg/mL劑量時(shí)對(duì)EV71具有良好的抑制率，分別為84.5±1.1%、95.6±2.2%和85.4±4.6%，其IC50=195.2μg/mL；（2）綠原酸低

3、于50μg/mL劑量處理時(shí)，細(xì)胞活率與空白對(duì)照組相比較并沒(méi)有顯著下降，其半數(shù)細(xì)胞毒性濃度（CC50）=143.5μg/mL。而利巴韋林低于150μg/mL時(shí)對(duì)RD細(xì)胞的存活率亦無(wú)明顯影響，其CC50=1187.2μg/mL；（3）20μg/mL綠原酸與病毒同時(shí)加入或病毒吸附1 h后加入，兩種方法不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞裂解液上清病毒滴度的降低差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）；（4）綠原酸在EV71感染RD細(xì)胞后0-8 h加入，能顯著抑制EV71復(fù)制

4、；而在EV71感染后10-24 h加入綠原酸，僅有部分或輕微抑制EV71復(fù)制效應(yīng)；（5）EV71感染RD細(xì)胞后4h和8h綠原酸可阻礙EV71/2A mRNA表達(dá)，但未影響EV71/VP1、3C和3D mRNA表達(dá)；（6）綠原酸處理EV71感染RD細(xì)胞后4h和8h，未能檢測(cè)出EV71/2A蛋白酶，但EV71/VP1、3C和3D蛋白表達(dá)未受影響。
　　結(jié)論：（1）綠原酸具有良好的抑制EV71病毒復(fù)制效用；（2）綠原酸對(duì)EV71感染的抑