大連市人腸道病毒71型病原學(xué)特征研究.pdf

1、目的:了解2009～2011年大連地區(qū)EV71流行情況;對(duì)分離出的EV71毒株進(jìn)行部分基因片段的核苷酸和氨基酸序列測(cè)定，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)和同源性分析，以確定其基因型別;對(duì)與毒株毒力相關(guān)基因序列進(jìn)行比較分析，探尋毒株毒力與基因序列之間的關(guān)系，為今后EV71的防治及防控提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:收集大連市手足口病監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院門(mén)診就診病例和手足口樣病例，將來(lái)自監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院的咽拭子和糞便標(biāo)本用熒光RT-PCR方法檢測(cè)為EV71的陽(yáng)性標(biāo)本

2、接種于RD細(xì)胞，經(jīng)傳代培養(yǎng)后分離EV71病毒，提取病毒RNA，利用RT-PCR方法分別擴(kuò)增出VP1、VP4、5'UTR基因片斷，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，用DNAStar軟件與EV71各基因亞型代表株進(jìn)行序列比較，分析其核苷酸序列和氨基酸序列的同源性，以及不同臨床癥狀的毒株與核苷酸和氨基酸序列之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1、2009～2011年期間共檢測(cè)533份樣品，其中EV71陽(yáng)性333份，陽(yáng)性率為62.48

3、％。533份病例中，男317例，女216例，男女比例為1.47∶1。其中男性患者EV71陽(yáng)性率為61.51％，女型患者EV71陽(yáng)性率為63.89％。0～5歲為手足口病高發(fā)年齡，以托幼兒童為主。
　　 2、VP1區(qū)序列分析表明:選取9株RD細(xì)胞分離培養(yǎng)的EV71毒株進(jìn)行VP1序列擴(kuò)增并測(cè)序，其結(jié)果用DNAStar軟件分析，這9株EV71毒株均屬于C4a亞型，其核苷酸之間的同源性為88.7％～99.9％;氨基酸之間的同源性為96.7

4、％～100％。與BRCR-CA-70的核苷酸同源性為79.4％～81.5％;與B型核苷酸同源性為:81.8％～84.7％;與C亞型核苷酸同源性為85.2％～99.2％，而與C4同源性高達(dá)90.0％～99.2％，其中與C4a的同源性最高為93.7％～99.2％，與C4b的同源性為90.0％～94.1％。對(duì)重癥來(lái)源的毒株，在第227位核苷酸發(fā)生了T→C的堿基置換，而輕癥來(lái)源的毒株均未發(fā)生改變。對(duì)于氨基酸序列比較上未發(fā)現(xiàn)一致性改變。
　

5、　 3、VP4區(qū)序列分析表明:9株毒株的VP4氨基酸序列高度一致，只是在第52位dalian1-09株發(fā)生了K→R的改變，第62位氨基酸dalian4-10株發(fā)生了T→S的改變，其余各株氨基酸序列均一致。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)重癥來(lái)源的毒株和輕癥來(lái)源的毒株在氨基酸或核苷酸序列上相應(yīng)固定的變異。
　　 4、5'UTR區(qū)序列分析表明:9株毒株在第208位核苷酸，重癥來(lái)源的樣品發(fā)生了堿基置換(G→A);在第254位核苷酸，重癥來(lái)源的樣品發(fā)生了堿基

6、置換(A→G)。氨基酸序列未發(fā)現(xiàn)一致性改變。
　　 結(jié)論:
　　 1、2009年-2011年大連地區(qū)手足口病的主要病原體為EV71，其基因型別為C4a亞型，這與中國(guó)大陸的大部分地區(qū)流行株相一致。
　　 2、基于VP4的基因分型與VP1的基因分型相一致，均為C4a亞型，且VP4序列高度保守。
　　 3、在毒株的毒力分析上，重癥來(lái)源的毒株，在VP1的第227位核菅酸發(fā)生了T→C的堿基置換，而輕癥來(lái)源的毒株均未