Sry核酸疫苗作用途徑初探.pdf

1、核酸疫苗是由抗原編碼基因和真核表達(dá)載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒,將其導(dǎo)入機(jī)體后可誘導(dǎo)機(jī)體全面的免疫應(yīng)答。與傳統(tǒng)的蛋白免疫相比具有制作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)安全、易于貯存運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn),自發(fā)現(xiàn)以來已越來越引起人們的重視,成為第三代疫苗,被廣泛用于各種感染性疾病的防治研究中,我們實(shí)驗(yàn)室將核酸疫苗引入了性別控制領(lǐng)域。 在性別決定和性別分化過程中,SRY/Sry基因是公認(rèn)的哺乳動(dòng)物性別決定基因。研究表明,基因正常表達(dá)個(gè)體就發(fā)育成雄性；相反,如果基因缺失或突變個(gè)體

2、就發(fā)育成雌性。小鼠的性別決定發(fā)生在10.5～12.5 dpc,Sty基因也僅在此時(shí)表達(dá)。所以,性別控制可以圍繞著SRY/Sry基因展開。 我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過對(duì)小鼠進(jìn)行肌肉注射Sty核酸疫苗的方法初步實(shí)現(xiàn)了XY胚胎向雌性反轉(zhuǎn)的性別控制,獲得了XY雌性個(gè)體。本實(shí)驗(yàn)就Sry核酸疫苗的作用途徑進(jìn)行了初步探索,以便對(duì)此疫苗進(jìn)行更深入的研究。 實(shí)驗(yàn)中,首先檢測(cè)了核酸疫苗的體外、體內(nèi)表達(dá)情況。在體外實(shí)驗(yàn)中,將pCR3.1-Sry瞬時(shí)轉(zhuǎn)

3、染HeLa細(xì)胞,分別用RT-PCR和間接免疫熒光法檢測(cè)質(zhì)粒在細(xì)胞中的表達(dá)；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,用pCR3.1-Sry肌肉注射小鼠,一周后分別提取小鼠肝臟、脾臟、肌肉、子宮組織的RNA,RT-PCR的方法檢測(cè)質(zhì)粒在這些組織處的表達(dá)；其次,對(duì)小鼠進(jìn)行肌肉注射pCR3.1-Sry,隔一周后進(jìn)行二免,二免后一周眼眶取血制備抗血清；構(gòu)建pET2lb-Sry重組質(zhì)粒并原核表達(dá)Sry蛋白做為抗原,用夾心法ELISA對(duì)獲得的抗血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明：不管在體內(nèi)