PC-B2抗AFB1對(duì)L-02肝細(xì)胞氧化損傷及CYP1A2、3A4酶活力及其基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本研究通過對(duì)PC-B2抗AFB1對(duì)L-02肝細(xì)胞氧化損傷和I相代謝酶CYP1A2、3A4活力及基因表達(dá)影響的研究，探討PC-B2干預(yù)AFB1致肝細(xì)胞損傷的效果及機(jī)理，初步明確PC-B2對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用，為今后進(jìn)一步開展保肝防癌的治療和預(yù)防提供科研基礎(chǔ)。
　　方法：采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，以含PC-B2或/和AFB1的培養(yǎng)液對(duì)生長(zhǎng)狀態(tài)良好且處于對(duì)數(shù)期的人胚肝細(xì)胞（L-02細(xì)胞）體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照、溶劑對(duì)照、AFB1染毒、PC

2、-B2處理和PC-B2干預(yù)共五組。用30μg/ml為AFB1實(shí)驗(yàn)染毒濃度；3、10、30μg/ml為PC-B2實(shí)驗(yàn)處理和干預(yù)濃度。倒置熒光顯微鏡觀察并拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，噻唑藍(lán)法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力的變化，吸光度法測(cè)定脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量及抗氧化酶系中SOD、GSH-PX活性，熒光酶標(biāo)法測(cè)定細(xì)胞的CYP1A2、CYP3A4酶活力，熒光定量PCR法測(cè)定CYP1A2、CYP3A4基因表達(dá)水平。數(shù)據(jù)資料錄入SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分

3、析。
　　結(jié)果：與溶劑對(duì)照組相比，以30μg/ml AFB1染毒后，L-02細(xì)胞胞膜結(jié)構(gòu)不清，漂浮細(xì)胞增多，細(xì)胞活力（％）（69.9±2.46）明顯受到抑制（P＜0.05）；以PC-B2施加干預(yù)，在30μg/ml PC-B2干預(yù)劑量下，L-02細(xì)胞活性較AFB1染毒組顯著升高（P＜0.05）。
　　AFB1染毒后，誘導(dǎo)L-02細(xì)胞MDA生成量較溶劑對(duì)照組增多明顯（P＜0.05），用不同濃度PC-B2干預(yù)處理后，MDA生成量較

4、AFB1染毒組明顯減少（P＜0.05）。
　　AFB1染毒組L-02細(xì)胞SOD和GSH-PX活力（U/mgprot）分別為35.96±0.83和211.16±9.98，較溶劑對(duì)照組40.01±0.54，287.10±6.96均明顯降低（P＜0.05）；與AFB1染毒組相比，用30μg/ml PC-B2干預(yù)可顯著抑制AFB1所致L-02細(xì)胞SOD和GSH-PX活力的降低（P＜0.05），數(shù)值分別為42.2±1.32，263.04±1

5、3.94。
　　相對(duì)空白對(duì)照組，PC-B2單獨(dú)處理組L-02細(xì)胞CYP1A2、CYP3A4酶活力均略有降低，其中以30μg/ml PC-B2處理劑量降低明顯（P＜0.05）；AFB1染毒組L-02細(xì)胞CYP1A2、CYP3A4酶活力較溶劑對(duì)照組明顯升高（P＜0.05）；而PC-B2干預(yù)組CYP1A2、CYP3A4酶活力較AFB1染毒組降低（P＜0.05），且高劑量PC-B2干預(yù)對(duì)酶活性的影響更明顯（P＜0.05）。
　　與溶

6、劑對(duì)照組比較，30μg/ml AFB1作用24h后，L-02細(xì)胞CY P1A2、CYP3A4基因表達(dá)升高，分別為溶劑對(duì)照組的9.42、8.38倍（P＜0.05）。PC-B2干預(yù)組細(xì)胞CYP1A2、CYP3A4基因表達(dá)較AFB1染毒組明顯降低，且隨PC-B2干預(yù)濃度增大作用越明顯（P＜0.05）。PC-B2處理組基因表達(dá)水平有所升高，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，30μg/ml AFB1能明顯抑制L-02細(xì)胞

7、生長(zhǎng)，而3~30μg/ml PC-B2能夠促進(jìn)L-02細(xì)胞生長(zhǎng)，且能夠減輕AFB1染毒所致的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。2. PC-B2能減輕AFB1致L-02細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)的損傷，一方面抑制AFB1誘導(dǎo)的MDA生成，另一方面升高SOD、GSH-PX酶的活力。3. AFB1染毒后，L-02細(xì)胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其基因表達(dá)升高，PC-B2干預(yù)可抑制這兩種酶活力及基因表達(dá)，提示PC-B2可能通過干預(yù)AFB1在體內(nèi)的代謝發(fā)揮作用。4. PC