真姬菇SK-01胞外多糖與胞內(nèi)多糖的提取及其抗氧化活性.pdf

1、真姬菇（Hypsizigus marmoreus）又名蟹味菇、海鮮菇、玉覃、斑玉覃等，屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota）、擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes）、傘菌目(Agaricales)、白蘑科（Tricholomataceae）、玉覃屬（Hypsizigus），是一種大型木質(zhì)腐生真菌。富含多糖、蛋白質(zhì)、微量元素、維生素等多種生物活性物質(zhì)，是一種高蛋白、低脂肪、低熱量的保健食品，具有抗氧化、提高免疫力、預(yù)防衰老、延長壽命

2、的獨特功效。
　　 本課題以真姬菇SK-01為出發(fā)菌株，采用Plackett-Burman(PB)試驗和響應(yīng)面（response surface methodology, RSM）試驗等方法優(yōu)化了真姬菇胞外多糖(exopolysaccharide，EPS)和胞內(nèi)多糖（intracellular polysaccharide，IPS）的提取條件，并對EPS和IPS進(jìn)行了體外和體內(nèi)抗氧化活性的檢測，得到結(jié)論如下:
　　 (1

3、) EPS提取條件
　　 通過PB試驗及RSM優(yōu)化，得到EPS最佳提取條件為濃縮倍數(shù)2.72倍，pH值8.26，乙醇倍數(shù)2.85倍。在此條件下，EPS的提取量理論值達(dá)到4.72mg/mL。考慮到實際的操作性，將最佳提取條件調(diào)整為:濃縮倍數(shù)3倍，pH值8.3，乙醇倍數(shù)3倍。在此條件(下)，EPS的提取量理論值為4.71mg/mL，而實際值為4.66mg/mL，實際值和理論值基本相符。
　　 (2) IPS提取條件
　

4、　 通過PB試驗及RSM優(yōu)化，得到IPS最佳提取條件為pH7.57，超聲波時間618.07s，提取溫度84.53℃。在此條件下，IPS的提取率理論值達(dá)到6.84％。考慮到實際的操作性，將最佳提取條件調(diào)整為:pH7.6，超聲波時間620s，提取溫度85℃。在此條件下，IPS的提取率理論值為6.85％，而實際值為6.93％，實際值和理論值基本相符。
　　 (3) EPS和IPS的體外抗氧化活性
　　 EPS在1g/L時，還

5、原力為1.02，比對照BHT高54.55％，對·OH、O2-·和DPPH自由基的清除率分別為92.31％、71.12％和69.11％，分別比BHT高122.38％、39.97％和54.3％。EPS對·OH、O2-·和DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度(EC50)分別為0.19g/L、0.53g/L和0.47g/L。
　　 IPS在1g/L時，還原力為0.74，比對照BHT高12.12％，對·OH、O2-·和DPPH自由基的清除率分別為

6、52.63％、68.21％和63.43％，分別比BHT高26.79％、34.25％和41.62％。IPS對·OH、O2-·和DPPH自由基的EC50值分別為0.85g/L、0.47g/L和0.62g/L。
　　 體外抗氧化結(jié)果表明，真姬菇EPS和IPS可顯著抑制·OH、O2(-)和DPPH自由基，并具有較強(qiáng)的還原力，且在一定程度上，EPS抗氧化性高于IPS。
　　 (4) EPS和IPS的體內(nèi)抗氧化活性
　　 通

7、過測定小鼠血液、心、肝、脾、腎組織中抗氧化酶及脂質(zhì)過氧化物的含量，觀察了多糖對機(jī)體各組織及全血抗氧化能力的影響。結(jié)果表明，EPS和IPS能明顯提高各組織及全血中谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidsade，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過氧化氫酶(catalase，CAT)等抗氧化酶的活性，同時能顯著降低體內(nèi)丙二醛(malondialdehyde，MDA)和脂質(zhì)

8、過氧化物(lipid peroxidation,LPO)的含量，提高了機(jī)體抗活性氧損傷的能力，為防止或減輕人體內(nèi)脂質(zhì)過氧化損傷提供了實驗依據(jù)，是潛在的抗氧化劑。隨著EPS和IPS濃度的增加，小鼠各組織及全血中GSH-Px、SOD及CAT活性升高，MDA及LPO含量降低;在一定程度上，當(dāng)灌胃相同濃度的多糖溶液時，EPS組中GSH-Px、SOD和CAT活性高于IPS組(P＜0.05)，MDA和LPO含量低于IPS組(P＜0.05)。

9、　　 (5) EPS和IPS分離純化
　　 EPS經(jīng)過DEAE-Cellulose柱層析分離，得到三個組分:EPS-Ⅰ、EPS-Ⅱ、EPS-Ⅲ。經(jīng)Sephadex G-100柱層析分離EPS-Ⅱ，得到單一對稱的窄峰。
　　 IPS經(jīng)過DEAE-Cellulose柱層析分離，得到四個組分:IPS-Ⅰ、IPS-Ⅱ、IPS-Ⅲ、IPS-Ⅳ。經(jīng)Sephadex G-100柱層析分離IPS-Ⅰ，得到2個組分:IPS-Ⅰa、 IP