α-硫辛酸對(duì)氧化應(yīng)激下大鼠睪丸支持細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討α-硫辛酸對(duì)氧化應(yīng)激下大鼠睪丸支持細(xì)胞的氧化損傷是否具有保護(hù)作用，并通過細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)角度研究α-硫辛酸對(duì)氧化應(yīng)激下大鼠睪丸支持細(xì)胞的保護(hù)作用途徑及相關(guān)的機(jī)制。
　　方法：取大鼠睪丸進(jìn)行支持細(xì)胞原代培養(yǎng)，并通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)進(jìn)行細(xì)胞鑒定。將各種濃度的H2O2(0，50，100，200，400，800，1600μmol/L)誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠睪丸支持細(xì)胞氧化損傷，并通過CCK-8法檢測(cè)睪丸支持細(xì)胞的活性及DCFH-DA熒光探

2、針法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平進(jìn)行睪丸支持細(xì)胞氧化損傷模型的鑒定。將原代培養(yǎng)大鼠睪丸支持細(xì)胞按以下四組進(jìn)行處理：對(duì)照組，即正常細(xì)胞培養(yǎng)，不加任何處理因素：α-LA組，僅加入含終濃度200μmol/Lα-LA的培養(yǎng)基；H2O2組，即加入含終濃度400μmol/H2O2的培養(yǎng)基；α-LA+H2O2組，即預(yù)先加入含終濃度200μmol/L，α-LA孵育4h后再加入含終濃度400μmol/L H2O2的培養(yǎng)基。各組處理12h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。采用CCK

3、-8法檢測(cè)各組睪丸支持細(xì)胞的活性及DCFH-DA熒光探針法檢測(cè)各組睪丸支持細(xì)胞內(nèi)活性氧水平；酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)抗氧化酶活性；免疫組織化學(xué)法、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)波形蛋白及微管蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：大鼠睪丸支持細(xì)胞經(jīng)分離、接種后，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，3至4天后細(xì)胞呈現(xiàn)單層融合狀態(tài)生長(zhǎng)。H2O2損傷組較正常對(duì)照組，細(xì)胞活力有所降低，并隨H2O2濃度的升高，細(xì)胞活力降低明顯，同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)ROS水平上升，H2O2作用于細(xì)胞致氧化損傷的適合濃

4、度為400μmol/L。與對(duì)照組比較，H2O2刺激后支持細(xì)胞存活率下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，)；細(xì)胞內(nèi)ROS水平上升(P<0.05)；總抗氧化能力、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽還原酶的活性均降低(P<0.05)；波形蛋白及微管蛋白的表達(dá)也明顯降低(P<0.05)，而α-LA干預(yù)后可提高細(xì)胞存活率，降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平，提高抗氧化酶的活性，并提高波形蛋白及微管蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：氧化應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠睪丸支持細(xì)胞波