山莨菪堿對急性心肌梗死缺血-再灌注損傷的防治效應及其對心肌細胞凋亡影響的機制研究.pdf

1、本研究以前期研究為基礎，著重探討預防性應用山莨菪堿對急性心肌梗死后缺血/再灌注損傷的防治作用。本系列研究共分為五個部分:
　　第一部分 預防性冠脈內應用山莨菪堿對急性ST段抬高心肌梗死直接PCI術后心肌灌注的保護效應
　　目的:觀察急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)行直接經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(pPCI)中，在梗死相關動脈(IRA)預防性冠脈內應用山莨菪堿，對患者心肌再灌注及心功能的影響。
　　方法:入選2012年10

2、月至2014年2月收入河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院心內科的發(fā)病12h內行直接PCI治療的ST段抬高型心肌梗死患者納入本研究。將入選患者隨機分為山莨菪堿組（ANI group），IRA開通前預防性冠脈內給予山莨菪堿2000μg/10 ml;對照組(CON group)冠脈內給予等容積生理鹽水。所有患者均經(jīng)前臂動脈入徑行冠狀動脈造影(CAG)檢查及PCI介入治療。由兩名以上經(jīng)驗豐富的心臟病專家進行量化的冠脈造影灌注指標判定，包括初始及術后TIMI血

3、流，TIMI心肌灌注分級(TMPG)，校正的TIMI血流計幀(CTFC)。術前及術后每6小時檢查心肌壞死標記物，以峰值CK-MB間接評估患者心肌梗死面積。術前及術后90 min記錄患者心電圖，以ST段回落(STR)評價術后心肌再灌注水平，計算兩組完全STR(術后90min時心電圖ST段抬高之和較入院時下降≥70％)比例。隨訪觀察兩組患者3個月主要不良心血管事件(MACEs)發(fā)生的差異。使用SPSS16.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，以P值＜0.0

4、5認為有統(tǒng)計學意義。
　　結果:共計入選患者118例，其中ANI組58例，CON組60例。兩組患者在術前血栓積分分布以及基線TIMI血流分級無顯著差異，但PCI術后ANI組TIMI3及TMPG3比例顯著高于CON組(TIMI血流3級:91％ vs.75％，P=0.039; TMPG3級:84％ vs.65％，P=0.044)。ANI與CON兩組患者入院時基線CK-MB水平無統(tǒng)計學差異，但冠脈內給予山莨菪堿后，患者術后CK-MB峰值

5、顯著降低，曲線下面積(AUC)較CON組減少24.18％，有統(tǒng)計學意義。兩組患者入院基線LVEF無統(tǒng)計學差異，而術后7天時，ANI組LVEF為57.22±8.19％， CON組LVEF為53.17±6.18％，兩組統(tǒng)計學差異顯著(P=0.003)。術后30天時，ANI組LVEF為62.52±8.27％，CON組LVEF為59.12±9.31％，有統(tǒng)計學差異(P=0.038)。隨訪3個月結果顯示，ANI組共2例患者MACEs事件，而CON

6、組共計5例，兩組均無死亡患者，且兩組間比較無顯著統(tǒng)計學差異(P=0.433)。
　　結論:預防性冠脈內應用山莨菪堿可顯著改善STEMI患者pPCI術后心肌灌注水平，減少心肌梗死面積，改善患者預后。
　　第二部分 預防性應用山莨菪堿對大鼠心肌缺血/再灌注損傷后心肌保護作用及凋亡影響的研究
　　目的:觀察預防性應用山莨菪堿對心肌缺血/再灌注大鼠的心肌保護作用及心肌細胞凋亡的影響。
　　方法:將54只Sprague-D

7、awley(SD)大鼠隨機分為三組，分別為假手術(SO)組，缺血/再灌注(I/R)組，缺血/再灌注山莨菪堿(ANI)組。SO組僅在大鼠心臟前降支起點2-3 mm處穿線不結扎;I/R組結扎大鼠心臟前降支40min后，松解結扎線再灌注3 h;ANI組再灌注前靜脈給予山莨菪堿。所有大鼠再灌注結束后，使用TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）染色計算大鼠心肌梗死面積，取靜脈血檢測心肌壞死標志物LDH，CK-MB含量，測量梗死后心肌ATP、MDA

8、及SOD濃度，并使用透射電鏡觀察心肌超微結構改變。使用Westem-blot分析法觀察梗死心肌凋亡相關因子caspase-3，caspase-8及caspase-9的蛋白表達。
　　結論:預防性應用山莨菪堿可顯著減少缺血/再灌注大鼠心肌梗死面積，減輕心肌超微結構損傷，降低心肌損傷標志物水平，增加心肌梗死后ATP能源供給，并可顯著減少caspase-3，caspase-8凋亡因子蛋白表達，減少大鼠急性心肌梗死后細胞凋亡。
　　

9、第三部分 預防性應用山莨菪堿對H9c2心肌細胞缺氧/復氧后凋亡的影響及其機制研究
　　目的:探討使用山莨菪堿預處理缺氧/復氧大鼠H9c2心肌細胞時，山莨菪堿對其凋亡的影響及相關機制。
　　方法:H9c2心肌細胞接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，待長滿至融合度約90％時，隨機分為三組，分別為對照(CON)組:心肌細胞正常培養(yǎng);缺氧/復氧(H/R)組，心肌細胞缺氧培養(yǎng)3小時后，正常培養(yǎng)基復氧培養(yǎng)12小時;山莨菪堿(ANI)組:缺氧培養(yǎng)3

10、小時后，換入含山莨菪堿的培養(yǎng)基復氧培養(yǎng)12小時。使用磺酰羅丹明B比色法（SRB）檢測心肌細胞活性，原位末端標記法(TUNEL)染色觀察細胞凋亡，瓊脂糖凝膠電泳檢測凋亡后DNA片段斷裂情況。磷脂肽結合蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)聯(lián)合碘化丙啶(PI)雙染法和流式細胞學技術分析各組H9c2心肌細胞缺氧/復氧后凋亡變化。提取細胞總蛋白，使用BCA法測定細胞蛋白質濃度，使用Western-blot法測定細胞凋亡蛋白caspase-3，caspase

11、-8，Bcl-2及Bax的蛋白表達水平，并使用實時定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)測定相關caspase-3，caspase-8，Bcl-2及Bax的mRNA水平。
　　結論:山莨菪堿預處理可明顯減少H9c2心肌細胞H/R損傷后的細胞凋亡，其機制可能通過下調caspase-3，caspase-8及Bax的蛋白和mRNA水平，上調Bcl-2蛋白及mRNA表達水平來實現(xiàn)。
　　第四部分 預防性應用山莨菪堿聯(lián)合rhBNP對ST段

12、抬高心肌梗死患者早期PCI心肌灌注改善作用的研究
　　目的:探討在急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)合并心力衰竭患者行直接經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(pPCI)中，預防性聯(lián)合應用山莨菪堿及rhBNP對患者心肌再灌注及心功能的作用。
　　方法:入選2014年2月至2015年2月收入河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院心內科的發(fā)病12h內行直接PCI治療的ST段抬高型心肌梗死患者共計96例納入本研究。將入選患者隨機分為對照組（單純PCI組）、山莨菪

13、堿組（ANI組）組、重組人腦利鈉肽組（rhBNP組）和山莨菪堿聯(lián)合重組人腦利鈉肽組（ANI+rhBNP組）。山莨菪堿給藥方式為:IRA開通前預防性冠脈內給予山莨菪堿2000μg/10ml; rhBNP給藥方式為術前及靜脈給予1.5μg/kg負荷量，以0.0075μg/kg/min低劑量維持靜脈泵點至術后72h。所有患者均經(jīng)前臂動脈入徑行冠狀動脈造影(CAG)檢查及PCI介入治療。由兩名以上經(jīng)驗豐富的心臟病專家進行量化的冠脈造影灌注指標判

14、定，包括初始及術后TIMI血流，TIMI心肌灌注分級(TMPG)，校正的TIMI血流計幀(CTFC)。術前及術后每6小時檢查心肌壞死標記物，以峰值CK-MB間接評估患者心肌梗死面積。術前及術后90 min記錄患者心電圖，以ST段回落(STR)評價術后心肌再灌注水平，計算兩組完全STR（術后90min時心電圖ST段抬高之和較入院時下降≥70％）比例。使用SPSS16.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，以P值＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　結論:

15、PCI前預防性應用山莨菪堿及rhBNP均可改善冠脈微循環(huán)及心肌灌注;山莨菪堿和rhBNP在減少心肌梗死面積方面可能存在協(xié)同作用。
　　第五部分 重組人腦利鈉肽在接受急診PCI治療的急性心肌梗死心力衰竭伴輕度腎功能不全患者中應用腎功能的安全性研究
　　目的:探討重組人腦利鈉肽對急性ST段抬高心肌梗死心力衰竭（STEMI-HF）伴輕度腎功能不全患者急診經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(pPCI)后的腎功能的影響。
　　方法:連續(xù)入選于

16、河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院心內五科行急診PCI的急性ST抬高心肌梗死心力衰竭伴輕度腎功能不全患者。術前隨機應用重組人腦利鈉肽(rhBNP group)或硝酸甘油(NIT group)，觀察PCI術前及術后患者血清肌酐(SCr)、估測腎小球濾過率(eGFR)、胱抑素-C(Cys-C)，β2微球蛋白水平變化以及計算術后72小時內患者CIN的發(fā)生率。CIN定義為接觸對比劑的72小時內，血清肌酐絕對值升高≥44.2μmol/L或與基礎值相比升高≥25