鈍頂節(jié)旋藻Arthrospira platensis FACHB341藻藍蛋白基因上游序列功能研究.pdf

1、在本實驗室先前的工作中已經(jīng)證實，鈍項節(jié)旋藻(Arthrospira platensisFACHB341)藻藍蛋白操縱子上游的419bp中有6條啟動子序列，本文研究了該上游序列各啟動子中與啟動強度有關(guān)的因素。我們選擇6條啟動子中表達水平較高的3條啟動子promoter 3、promoter 4和promoter 6，對其中3號啟動子的-10元件和-35元件、4號啟動子的-10元件及6號啟動子的-35元件進行不同位點多種形式的誘變處理，流式

2、細胞儀分析GFP的表達水平檢測啟動子強度。通過-35元件與-10元件中單堿基的改變對報告基因的表達的影響，分析不同堿基在啟動子中所起作用的主次和強弱。 TaKaRa MutanBEST Kit用來進行定點突變，結(jié)果表明，3號啟動子的-10元件突變后，各突變株GFP表達量明顯上升，達原表達量的2-4倍；3號啟動子的-35元件突變后，GFP表達量均下降，減少到原表達量的2-4％；而4號啟動子的-10元件與6號啟動子的-35元件突變后

3、，不同突變株的表達量有上升也有下降。實驗證明了-35區(qū)與-10區(qū)在保持啟動子功能方面的重要作用，對闡明藻藍蛋白基因啟動子的作用機理提供了實驗數(shù)據(jù)，并為藍藻基因工程提供了強有力的啟動元件。 啟動子是基因表達調(diào)控中重要的順式元件，其結(jié)構(gòu)與功能的研究成為分子生物學的研究熱點之一。但目前的啟動子研究還存在許多問題，很多啟動子上的序列功能我們到現(xiàn)在為止還不完全清楚，特別是國內(nèi)外有關(guān)藻類啟動子方面的研究很少，尚未見到有關(guān)藻類啟動子研究進展的

4、綜述性報道。如果能了解其研究現(xiàn)狀，找出不足，指導(dǎo)未來啟動子研究的方向，將會對基因表達調(diào)控的研究起到促進作用?；诖四康?，我們整理了一篇綜述文章，介紹了植物基因啟動子的研究方法與概況，重點綜述了藻類基因啟動子的研究現(xiàn)狀，介紹了本實驗室對節(jié)旋藻藻藍蛋白基因啟動子的研究情況，并就啟動子在基因工程中應(yīng)用價值進行了討論。 另外，先前工作證明，將節(jié)旋藻FACHB341品系于25℃，光照強度40μmlo.m<'-2>.s<'-1>條件下培養(yǎng)，

5、進行轉(zhuǎn)錄分析，結(jié)果只有一條啟動子，即1號啟動子參加了轉(zhuǎn)錄調(diào)控。另外，通過以大腸桿菌DH5α和聚球藻(Synechococcus sp.PCC7942)為表達載體分別證明了溫度、光強的變化會影響啟動子驅(qū)動的GFP報告基因的表達。為了進一步分析其作用機制，我們在極端溫度、光強條件下培養(yǎng)節(jié)旋藻，采用SmartRace技術(shù)進行轉(zhuǎn)錄分析，看特定的條件下該基因的轉(zhuǎn)錄特征是否變化。結(jié)果證明在溫度分別為15℃、35℃，光強分別為10μmol.m<'-2