昆明山海棠藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的:本課題應(yīng)用雞紅細(xì)胞(CRBC)分別免疫小鼠，并進(jìn)行其血清溶血素的測定，觀察昆明山海棠根提取物對雞紅細(xì)胞致小鼠溶血素抗體生成的影響。進(jìn)一步證明昆明山海棠藥材中具有免疫抑制作用。并采用了現(xiàn)代分析技術(shù)手段液相-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)分析對昆明山海棠藥材中的有效部位進(jìn)行了表征分析與鑒定，指紋圖譜研究，含量測定。為昆明山海棠藥材的質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。
　　方法:(1)應(yīng)用雞紅細(xì)胞(CRBC)分別免疫小

2、鼠，并進(jìn)行其血清溶血素（抗體積數(shù)）的測定，進(jìn)一步觀察昆明山海棠根提取物對雞紅細(xì)胞致小鼠溶血素抗體生成的影響。
　　(2)用高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地昆明山海棠藥材中有效成分的高效液相指紋圖譜，利用中藥指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)軟件分析昆明山海棠指紋圖譜及不同產(chǎn)地昆明山海棠各成分的差異。
　　(3)采用液質(zhì)(LC-MS/MS)聯(lián)用技術(shù)，正離子檢測模式，對昆明山海棠中有效成分進(jìn)行多級質(zhì)譜裂解分析。以對照品及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)為對照，通過對各成

3、分的MS1+和MS2+譜圖的解析對各成分進(jìn)行指認(rèn)。
　　(4)采用液質(zhì)(LC-MS/MS)聯(lián)用技術(shù)測定昆明山海棠藥材中雷公藤吉堿及雷公藤次堿的含量。
　　結(jié)果:(1)小鼠經(jīng)雞紅細(xì)胞免疫后，可使血清抗體增多，即模型組HC值明顯較正常組增大，差異有顯著性(P＜0.01);環(huán)磷酰胺組則抑制其抗體的增加，與模型組比較HC值明顯減少，差異有顯著性（P＜0.01）;昆明山海棠水提取物、乙醇提取物、環(huán)已烷提取物，乙酸乙酯提取物組HC值均大

4、于環(huán)磷酰胺組，差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）。其中昆明山海棠乙醇提取物組的HC值增加尤為明顯。
　　(2)初步建立了昆明山海棠藥材乙醇部位指紋圖譜，通過對指紋圖譜中峰的位置、保留時(shí)間、峰面積、整體圖貌等特征對照譜圖進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)5個(gè)產(chǎn)地的昆明山海棠藥材相似度達(dá)到0.9以上，但貴州雷山的昆明山海棠藥材相似度小于0.85，存在差異。指紋圖譜共有特征峰峰面積總和大于85％，可以作為昆明山海棠藥材鑒定的標(biāo)志峰。
　　(3

5、)通過液質(zhì)(LC-MS/MS)聯(lián)用分析給出的準(zhǔn)分子離子峰，得到化合物相應(yīng)的相對分子質(zhì)量信息，再通過與參考文獻(xiàn)報(bào)道的昆明山海棠藥材中化合物的相對分子質(zhì)量比對，結(jié)合部分對照品及質(zhì)譜裂解規(guī)律分析，初步推斷昆明山海棠藥材中的20個(gè)生物堿類成分。
　　(4)不同產(chǎn)地不同部位的昆明山海棠藥材中雷公藤次堿與雷公藤吉堿的含量有一定差異，其中根皮部位中雷公藤次堿與雷公藤吉堿之和是四個(gè)部位中最高的，含量順序?yàn)楦ぃ救厩o＞葉。
　　結(jié)論:(1

6、)通過灌胃給予不同部位的昆明山海堂根提取物對雞紅細(xì)胞致小鼠溶血素抗體生成的影響的實(shí)驗(yàn)可以證明昆明山海棠有增強(qiáng)體液免疫功能作用。
　　(2)建立了6個(gè)不同產(chǎn)地昆明山海棠藥材乙醇部位指紋圖譜，相關(guān)指紋圖譜的研究數(shù)據(jù)，為昆明山海棠藥材的鑒定、藥效評估等質(zhì)量控制提供了數(shù)據(jù)。
　　(3)采用LC-MS/MS技術(shù)，通過高效液相的高分離能力分離樣品中的化學(xué)成分，再利用質(zhì)譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，可有效地表征其鑒定特征，適合昆明山海棠藥材有效成分的鑒