FB1膠體金免疫層析試紙條的研制及應(yīng)用.pdf

1、伏馬菌素是由串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme）所產(chǎn)生的一類水溶性代謝產(chǎn)物，能污染玉米、小麥、水稻等谷類及其制品。伏馬菌素B1（Fumonisin B1，F(xiàn)B1）是串珠鐮刀菌培養(yǎng)物的主要成分，也是導(dǎo)致伏馬菌素毒性作用的主要因素。
　　膠體金免疫層析法是基于單克隆抗體和膠體金材料的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)，已成為目前真菌毒素檢測(cè)的新的研究方向。該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，適應(yīng)于大量樣本的快速檢測(cè)。本試驗(yàn)采用免疫層析

2、法，研制出FB1檢測(cè)用膠體金試紙條，并用于玉米中FB1的快速檢測(cè)。
　　將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，注射入小鼠腹腔，收集腹水并進(jìn)行純化，制備出FB1單克隆抗體，分別通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE）和間接酶聯(lián)免疫法（Ci-ELISA）對(duì)抗體的純度及效價(jià)進(jìn)行檢測(cè)；采用戊二醛一步法對(duì)半抗原FB1與卵清蛋白（OVA）偶聯(lián)，制備完全抗原，通過(guò)SDS-PAGE和質(zhì)譜法（MS）對(duì)FB1與OVA鑒定偶聯(lián)效果。膠體金溶液的制備采用檸檬酸鈉

3、還原法。試驗(yàn)對(duì)金標(biāo)抗體、FB1-OVA包被量及羊抗鼠IgG包被濃度進(jìn)行選擇，并對(duì)試紙條的應(yīng)用性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1．單克隆抗體濃度為1.3 mg·mL-1，經(jīng)過(guò)間接ELISA方法的檢測(cè)，可得單抗的效價(jià)為1:1024。人工抗原FB1-OVA偶聯(lián)成功，F(xiàn)B1與OVA的偶聯(lián)比為6.2:1，濃度為0.8 mg·mL-1。
　　2．本試驗(yàn)制備的膠體金溶液粒徑為25 nm、20 nm、15 nm。制備金標(biāo)抗體最

4、適pH值為7.0，即1 mL膠體金溶液加入15μL0.2 mol·L-1 K2CO3。膠體金與單克隆抗體的最佳結(jié)合量為1 mL膠體金溶液加入7μL抗體。膠體金免疫層析試紙條的金標(biāo)抗體最佳包被量為0.4μg·cm-1，檢測(cè)抗原最佳包被量為0.3μg·cm-1，質(zhì)控線最佳包被濃度為0.10 mg·mL-1。試紙條的靈敏度為2 ng·mL-1，最佳判定濃度為40 ng·mL-1。
　　3.本試驗(yàn)研制的膠體金免疫層析試紙條與AFB1、DO