急性脊髓損傷后pERK、PCNA、GFAP的表達(dá)和意義以及U0126對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過觀察大鼠急性脊髓損傷后磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（pERK）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）及膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）的表達(dá)及分析相互的相關(guān)性，并進(jìn)一步觀察MEK抑制劑U0126干預(yù)后pERK、PCNA及GFAP表達(dá)的變化，探索MEK/ERK通路在急性脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕形成的作用及意義，為臨床治療脊髓損傷提供新的思路。
　　 方法：選擇雌性SD大鼠78只，質(zhì)量250～300g。隨機(jī)取6只作為假損傷組，余72只隨機(jī)分為三組

2、：?jiǎn)渭儞p傷組、DMSO組（損傷后注射二甲基亞砜（DMSO）組）和U0126治療組（損傷后注射U0126組），每組24只。單純損傷組、DMSO組和U0126治療組均取1天，4天，7天及14天時(shí)間段，每組每時(shí)間段均6只，行T12椎體水平后路椎板切除開窗。假損傷組只打開椎板，不打擊脊髓；單純損傷組、DMSO組和U0126治療組均采用改良Allen's法以10g×6cm力撞擊脊髓，制造急性脊髓損傷模型。U0126治療組傷后給予腹腔注射MEK抑制

3、劑U0126（20μg/只，每天1次，連續(xù)7天，用DMSO溶解后注射），DMSO組給予腹腔注射等量的DMSO溶液，假損傷組、單純損傷組不予注射藥物。傷后當(dāng)天、術(shù)后1天、4天、7天及14天對(duì)每組大鼠行BBB評(píng)分；術(shù)后1天、4天、7天及14天取脊髓標(biāo)本行HE染色、pERK、PCNA及GFAP免疫組化染色等，光鏡下觀察，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)量。所得數(shù)據(jù)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：1、行為學(xué)評(píng)分：大鼠脊髓傷后當(dāng)天，雙后

4、肢運(yùn)動(dòng)能力明顯受限，BBB 評(píng)分達(dá)到最低的0分。隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)，單純損傷組、DMSO組和U0126 治療組大鼠雙后肢運(yùn)動(dòng)功能表現(xiàn)出不同程度的恢復(fù)，U0126 治療組恢復(fù)速度較單純損傷組、DMSO組更快(P<0.05)，單純損傷組、DMSO組之間無明顯差異性差異（P>0.05）。術(shù)后14天單純損傷組、DMSO組大鼠BBB 評(píng)分最高達(dá)到10分，而U0126 治療組可達(dá)到13分；2、假損傷組大鼠脊髓pERK、PCNA 僅少量表達(dá)，單純損傷

5、組pERK、PCNA的表達(dá)水平與假損傷組相比存在顯著差異(P<0.05)，兩者均為脊髓損傷l天后表達(dá)水平顯著增高，7天后達(dá)到高峰，14天末回落；3、假損傷組大鼠脊髓GFAP 僅在星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體及突起中表達(dá)，單純損傷組GFAP的表達(dá)水平與假損傷組相比存在顯著差異(P<0.05)，脊髓損傷后1-14天內(nèi)其表達(dá)呈進(jìn)行性增高趨勢(shì)；4、脊髓損傷后pERK與PCNA 之間、PCNA與GFAP 之間、pERK與GFAP 之間的表達(dá)均呈正相關(guān)(r1=

6、O.907，P<0.05；r2=0.823，P<0.05；r3=0.807，P<0.05)；5、單純損傷組與DMSO組相比pERK、PCNA及GFAP的表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)沒有顯著性差異（P>0.05）。U0126 治療組與單純損傷組、DMSO組相比損傷后7天及14天pERK、PCNA及GFAP的表達(dá)下調(diào)，并有顯著性差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：1、大鼠急性脊髓損傷后pERK、PCNA及GFAP表達(dá)明顯增多，表達(dá)數(shù)量相互間成正相關(guān)

7、，表明急性脊髓損傷后可能通過激活MEK/ERK信號(hào)通路使ERK磷酸化而活化，并促使膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期，引起膠質(zhì)細(xì)胞過度增殖從而參與膠質(zhì)瘢痕的形成；2、MEK 抑制劑U0126 可促進(jìn)大鼠急性脊髓損傷后大鼠雙后肢行為學(xué)的恢復(fù)；3、大鼠急性脊髓損傷后應(yīng)用MEK 抑制劑U0126 可減少星型膠質(zhì)細(xì)胞的增殖，抑制膠質(zhì)瘢痕的形成，其機(jī)制可能為通過抑制MEK/ERK信號(hào)通路使ERK 磷酸化減少，抑制其對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期的促進(jìn)作用，從而減少星型