齊墩果酸改善高果糖所致大鼠脂肪肝的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討齊墩果酸(Oleanolic acid, OA)對(duì)果糖所致大鼠脂肪肝的作用效果并闡明其可能的作用機(jī)制。
　　方法:將24只SPF級(jí)雄性SD大鼠(體重210～230g)適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，按照體重大小隨機(jī)分為4組（n=6）:(1)正常對(duì)照組(controlgroup，CON):自由飲食，正常飲水;(2)果糖對(duì)照組(fructose controlgroup，F(xiàn)RU):自由飲食，飲用10％果糖水(w/v,每天配制);(3)果糖

2、齊墩果酸低劑量組（fructose-OA-low-dose group，F(xiàn)OL）:自由飲食，飲用果糖水，OA5mg/kg;(4)果糖齊墩果酸高劑量組(fructose-OA-high-dose group，F(xiàn)OH):自由飲食、飲用果糖水，OA25mg/kg。每三天記錄一次體重，并根據(jù)體重變化調(diào)整用藥組大鼠給藥量。用藥組起始果糖水濃度均為10％，每天記錄飲用果糖水量，并對(duì)果糖水濃度作相應(yīng)調(diào)整，使用藥組大鼠果糖攝入量與FRU組一致。各組大鼠

3、飼養(yǎng)10周末，夜間禁食14h后，隔日稱體重，乙醚麻醉下摘除眼球取血，分離血漿檢測(cè)TG、TC、NEFA、GLU、INSULIN濃度;處死大鼠，取肝臟，同時(shí)對(duì)附睪脂肪（epididymal adipose）和腎周脂肪(peri-renal adipose)稱重，行肝臟HE染色和油紅O染色，同時(shí)檢測(cè)肝臟TG、TC含量;提取肝組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄mRNA獲得cDNA，用Real-Time PCR方法檢測(cè)肝臟脂質(zhì)合成轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c、Ch

4、REBP及其下游相關(guān)基因FAS、ACC-1、SCD-1、LPK、MTTP和脂質(zhì)氧化相關(guān)基因PPARα、CPT1a、ACO及PPARγ、CD36、G6Pase的mRNA水平;提取肝細(xì)胞核蛋白，用Western blot方法檢測(cè)調(diào)節(jié)脂質(zhì)合成的兩個(gè)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c和ChREBP的蛋白表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用StatView統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(x±SEM)表示，t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組數(shù)據(jù)的差異比較。
　　結(jié)果:
　　1

5、.相對(duì)于CON組，F(xiàn)RU組、FOL組、FOH組的能量攝入量要顯著高于CON組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　2.相對(duì)于CON組，飲用果糖水的FRU組、FOL組、FOH組大鼠內(nèi)臟脂肪量，即附睪脂肪和腎周脂肪重量(e+p WAT)增加明顯(P＜0.05);OA用藥組相對(duì)FRU組大鼠e+p WAT下降趨勢(shì)不明顯(P＞0.05);同樣，相對(duì)于CON組，F(xiàn)RU組大鼠肝臟重量增加明顯(P＜0.05)，但用藥組大鼠肝臟重量下降趨勢(shì)不

6、明顯(P＞0.05);
　　3.相對(duì)于CON組，F(xiàn)RU組大鼠血清生化指標(biāo)TC、TG、GLU、INSULIN濃度升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);相對(duì)FRU組，OA用藥組大鼠血清GLU下降明顯(P＜0.05)，且FOL組、FOH組大鼠血清TC、TG、NEFA和INSULIN相對(duì)于FRU組都呈劑量依賴性下降，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);
　　4.與CON組相比，F(xiàn)RU組大鼠肝臟TC沒有明顯變化，但TG增高顯著

7、(P＜0.05)，且油紅O染色結(jié)果顯示，F(xiàn)RU組大鼠肝臟脂質(zhì)沉積嚴(yán)重(P＜0.05);相對(duì)于FRU組，OA高劑量用藥組FOH大鼠肝臟TG下降明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);油紅O染色結(jié)果提示，F(xiàn)OH組大鼠肝臟脂質(zhì)沉積情況明顯輕于FRU組(P＜0.05);
　　5.Real-Time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與CON組相比，F(xiàn)RU組大鼠肝臟SREBP-1c、ChREBP、FAS、ACC-1、SCD-1等脂質(zhì)合成基因mRNA顯著

8、升高(P＜0.05);相對(duì)于FRU組，F(xiàn)OH用藥組大鼠肝臟SREBP-1c、ChREBP、FAS、ACC-1、SCD-1 mRNA水平顯著降低(P＜0.05);
　　6.Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與CON組相比，F(xiàn)RU組大鼠肝臟脂質(zhì)合成基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子SREBP-1c和ChREBP蛋白表達(dá)量增高(P＜0.05)，相對(duì)于FRU組，F(xiàn)OH組大鼠肝細(xì)胞核SREBP-1c蛋白表達(dá)水平顯著降低(P＜0.05)，而FOH組大鼠肝臟