Rhipilin-1基因雙鏈RNA對(duì)鐮形扇頭蜱抑制及殺滅效果.pdf

1、蜱是常見的人和動(dòng)物體表寄生蟲，作為嗜血性節(jié)肢動(dòng)物，蜱在分類學(xué)上屬于節(jié)肢動(dòng)物門、蛛形綱、蜱螨目、蜱總科，其生活史復(fù)雜，繁殖率高，經(jīng)歷卵、幼蟲、若蟲、成蟲四個(gè)發(fā)育階段，屬于不完全變態(tài)發(fā)育。作為多種人獸共患病病原的儲(chǔ)存宿主和傳播媒介，蜱可傳播和感染病原引發(fā)原蟲病、森林腦炎、新疆出血熱、回歸熱、萊姆病、Q熱、立克次體病等。威脅人類健康，對(duì)畜牧經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來巨大危害。因此，預(yù)防和控制蜱的傳播十分重要。鐮形扇頭蜱屬于硬蜱的一種，廣泛分布于我國長江以南

2、，是我國南方的優(yōu)勢(shì)蜱種。
　　目前對(duì)殺蜱除蜱的主要方法是化學(xué)藥物殺滅，這種方法對(duì)蜱的殺傷效果雖好，但環(huán)境污染嚴(yán)重，毒性藥物對(duì)宿主危害性大，隨著生物技術(shù)研究的深入，新型環(huán)保的預(yù)防控制蜱的策略不斷發(fā)展，如抗蜱疫苗研究等，但還未取得成功，新的防治技術(shù)需求還十分迫切。RNA干擾技術(shù)作為新興的研究技術(shù)，在蜱研究中得到廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)室已克隆鑒定了鐮形扇頭蜱抗凝血分子Rhipilin-1，并發(fā)現(xiàn)通過顯微注射證明RNA干擾該基因可有效降低蜱的吸

3、血能力。
　　本研究根據(jù)RNA干擾原理，將Rhipilin-1 dsRNA直接浸泡蜱體，通過脂質(zhì)體浸染傳遞途徑達(dá)到RNA干擾效果，從而實(shí)施如殺蟲劑滅蜱的新型防治技術(shù):其一，以重組質(zhì)粒pGEM-T-Rhipilin-1和pGEM-T-Luciferase為模板，根據(jù)T7試劑盒的操作說明，在蜱體外合成目的基因Rhipilin-1 dsRNA和對(duì)照基因Luciferase dsRNA;其二，在浸泡過程中篩選蜱各階段最佳脂質(zhì)劑、浸泡時(shí)間以

4、及dsRNA與脂質(zhì)劑浸泡比例并通過熒光標(biāo)記dsRNA的浸泡觀察dsRNA分布;其三，以最佳脂質(zhì)劑、浸泡時(shí)間、浸泡比例對(duì)鐮形扇頭蜱幼蜱、若蜱和成蜱三個(gè)階段浸泡，以Luciferase基因的dsRNA作為對(duì)照，進(jìn)行動(dòng)物體實(shí)驗(yàn)觀察。
　　結(jié)果顯示，最佳浸泡條件篩選為幼蜱脂質(zhì)劑Lipofectamine2000、浸泡24h、dsRNA與脂質(zhì)劑體積比為2∶1;若蜱脂質(zhì)劑DMRIE-C、浸泡12h、dsRNA與脂質(zhì)劑體積比為1∶1;幼蜱脂質(zhì)劑