鎘致體外培養(yǎng)雞支持-生精細胞凋亡機理的研究.pdf

1、鎘是一種工業(yè)上應用廣泛的具有潛在毒性的重金屬，已逐漸成為環(huán)境中重要的污染物之一。大量研究表明，鎘能夠引起雄性動物和人生殖機能減退，誘導生殖細胞凋亡、壞死等不可逆變化。但大多數試驗集中于對嚙齒類動物和人的研究，對于禽類的研究較少。本試驗以體外培養(yǎng)雞原代支持-生精細胞為研究對象，在培養(yǎng)液中加入不同濃度CdCl2，通過對雞支持-生精細胞活性、貼壁性能、細胞凋亡、抗氧化功能、DNA損傷、細胞內游離鈣離子濃度及細胞內bcl-2、Fas、FasL、

2、CaM、caspase-3mRNA表達水平等的檢測，探討了鎘致雞支持-生精細胞凋亡的機理。研究結果表明： 1.應用臺盼藍拒染試驗、MTT比色法、二硝基苯肼比色法檢測了支持-生精細胞的活性和培養(yǎng)上清液中LDH活性，并觀察了細胞貼壁性能，結果表明鎘能夠抑制體外培養(yǎng)雞支持-生精細胞的活性，影響支持細胞的貼壁性能及支持細胞與生精細胞之間的黏附力，同時測定了染鎘24h對支持-生精細胞的半數抑制濃度為28.41±0.42μmol/L，表明鎘

3、對雞支持-生精細胞具有毒性作用。 2.應用AO/EB雙熒光染色法測定了染鎘后支持-生精細胞的凋亡率和壞死率，結果表明，低濃度鎘主要引起細胞凋亡，而高濃度鎘使細胞凋亡和細胞壞死同時發(fā)生。 3.應用堿性單細胞凝膠電泳測定了鎘對支持-生精細胞DNA的損傷效應，結果表明鎘能夠誘導雞生殖細胞DNA損傷，這可能是其致禽類生殖細胞損傷的機制之一。 4.通過對細胞內抗氧化功能的檢測，結果表明鎘能夠導致支持-生精細胞內SOD、GS

4、H-Px活性下降，MDA含量增加，細胞抗氧化功能降低，發(fā)生氧化應激，這可能是鎘誘導禽類生殖細胞凋亡的機制之一。 5.應用半定量RT-PCR法和熒光探針法檢測細胞內CaMmRNA表達水平和游離鈣離子濃度，結果表明鎘能夠引起細胞內CaMmRNA表達水平下降，游離鈣離子濃度升高，干擾細胞鈣離子的轉運，導致細胞鈣穩(wěn)態(tài)失衡，這可能是鎘誘導禽類生殖細胞凋亡的機制之一。 6.應有半定量RT-PCR法檢測了雞支持-生精細胞內bcl-2、

5、Fas、FasL、caspase-3mRNA表達水平，結果表明鎘能夠降低了支持-生精細胞內bcl-2mRNA的表達水平，增加Fas/FasL和caspase-3mRNA的表達水平，進而誘導生殖細胞的凋亡。 本試驗從細胞、分子水平上探討鎘致禽類生殖細胞毒性作用，揭示了鎘能夠降低生殖細胞的活性、誘發(fā)氧化應激、損傷細胞DNA、干擾細胞鈣穩(wěn)態(tài)、影響細胞內基因表達、誘導細胞凋亡，闡明了鎘致禽類生殖細胞毒性機制，為畜禽鎘中毒的防治提供了理論