成年公兔生精細胞和支持細胞的純化及體外培養(yǎng).pdf

1、為了研究生精細胞和支持細胞在體外的生長特性、形態(tài)特征以及這兩種細胞之間的相互關(guān)系，本實驗以成年公兔的睪丸為實驗材料，采用不同的酶處理方法對睪丸精細管進行消化，然后利用低滲液進行處理和選擇性貼壁培養(yǎng)，對支持細胞進行純化，并且還對支持細胞進行培養(yǎng)和鑒定；同時，本實驗還通過Percoll密度梯度離心和選擇性貼壁培養(yǎng)的方法，對生精細胞進行純化；最后，將純化的生精細胞單獨培養(yǎng)，同時還將純化的生精細胞與支持細胞進行共培養(yǎng)。結(jié)果如下： 1 采

2、用兩種消化方法，均能得到單細胞懸液，并且單個睪丸所獲細胞總數(shù)分別為5.68×10<'8>個和4.07×10<'8>個，二者之間差異不顯著(P>0.05)；所得細胞懸液中圓形細胞比率分別為86.66％和79.21％，兩者之間差異也不顯著(P>0.05)：就細胞存活率而言，兩者差異顯著(95.28％VS 82.91％，P<0.05)。 2 利用20 mM nis-HC1對細胞懸液進行低滲處理后，支持細胞的比率升高，與處理前相比，差異

3、顯著(23.31％VS 16.01％，P<0.05)；但細胞的存活率降低，與處理前相比差異極顯著(80.98％VS 95.96％，P<0.01)。 3 將低滲處理后的支持細胞懸液和未經(jīng)處理的細胞懸液都進行選擇性貼壁培養(yǎng)，結(jié)果表明，兩種細胞懸液中的支持細胞比率都顯著升高。經(jīng)低滲處理的細胞懸液培養(yǎng)后與培養(yǎng)前相比，支持細胞的比率二者間差異極顯著(76.01％VS 23.31％．P<0.01)，細胞存活率二者間差異顯著(88.02％VS

4、 80.89％，P<0.05)：未經(jīng)處理的細胞懸液培養(yǎng)后，支持細胞的比率也升高了，與培養(yǎng)前相比差異顯著(42.86％VS 16.01％，P<0.05)，而細胞存活率有所下降，但差異不顯著(90.48％VS 95.96％，P>0.05)。此外，將這兩種細胞懸液培養(yǎng)后的支持細胞比率進行比較發(fā)現(xiàn)，二者間差異極顯著(76.01％VS 42.86％，P<0.01)。 4．消化得到的細胞懸液經(jīng)Percoll密度梯度離心后，檢測發(fā)現(xiàn)，生精細胞主要在2