PRP基因在睪丸中的表達(dá)及其生物學(xué)功能初步研究.pdf

1、目的:
　　 Proliferin related protein(PRP)最初被認(rèn)為是小鼠胎盤血管生成抑制因子,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道PRP僅表達(dá)于雌性胎盤組織。因此,盡管此基因發(fā)現(xiàn)至今已有20多年,但一直被排除在雄性之外,直接的實(shí)驗(yàn)研究?jī)H見于幾篇文獻(xiàn)報(bào)道。我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)中偶然發(fā)現(xiàn)PRP表達(dá)于睪丸,因此本研究擬探索PRP在睪丸中的表達(dá)定位,PRP是否在雄性動(dòng)物表達(dá),及其在雄性生殖功能中的作用,PRP對(duì)人類腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　

2、 方法:
　　 采用原位雜交和免疫組化方法對(duì)PRP進(jìn)行組織學(xué)定位,Real-TimeRT-PCR方法研究PRP在大鼠睪丸表達(dá)水平與年齡的關(guān)系以及人參皂苷對(duì)PRP表達(dá)的影響。
　　 利用BLOCK-iTTM HiPerformTM Lentiviral PolⅡ miR RNAiExpression System with EmGFP試劑盒制備和包裝PRP-RNAi慢病毒,以miRNA方式干擾PRP表達(dá)。用Real-Tim

3、e RT-PCR方法檢測(cè)PRP沉默后對(duì)睪酮分泌相關(guān)基因的影響,及對(duì)HCG誘導(dǎo)睪酮分泌是否有影響,ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞睪酮產(chǎn)生情況。
　　 構(gòu)建PRP基因熒光表達(dá)載體,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染TM3細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分析TM3細(xì)胞周期分布。為了研究PRP對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的影響,轉(zhuǎn)染SGC-7901腫瘤細(xì)胞,分析腫瘤細(xì)胞增殖改變和周期分布。
　　 結(jié)果:
　　 1免疫組化和原位雜交結(jié)果顯示PRP陽性免疫染色位于睪丸間質(zhì)細(xì)胞。

4、免疫熒光染色顯示PRP在TM3細(xì)胞胞漿中表達(dá)。
　　 2 PRP在大鼠睪丸中的表達(dá)模式為隨年齡增加而增加。有趣的是,人參皂苷可以顯著下調(diào)老年大鼠睪丸PRP表達(dá)水平。HCG通過PKA途徑顯著上調(diào)TM3細(xì)胞中PRP表達(dá)水平。
　　 3慢病毒介導(dǎo)PRP沉默減弱HCG刺激睪酮產(chǎn)生的作用。另外,PRP沉默后抑制HCG刺激PRLR mRNA增加的作用,且PRL促進(jìn)HCG誘導(dǎo)睪酮產(chǎn)生的作用也因?yàn)镻RP沉默而減弱,表明了PRP可能通過影