CXCR4-CXCL12生物學(xué)軸對人胰腺癌細胞系生物學(xué)特性的影響.pdf

1、背景與目的：CXCL12-CXCR4生物學(xué)軸是指由趨化因子CXCL12與其特異性受體CXCR4相互作用而構(gòu)成的一個與細胞間信息傳遞、細胞遷移有密切關(guān)系的偶聯(lián)分子對，其實質(zhì)在于CXCR4對其配體CXCL12的高度親和力和絕對特異性，即CXCR4作為CXCL12的專屬受體而存在。研究已經(jīng)證實CXCL12能促進腫瘤的生長和分化，增強腫瘤的血管生成，參與腫瘤的轉(zhuǎn)移過程，并促進腫瘤內(nèi)免疫抑制微環(huán)境的形成，而其受體CXCR4也在多種腫瘤中高表達。<

2、br>　　 Walser等發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細胞中CXCR4表達異常增高，應(yīng)用CXCR4抑制劑（合成14肽TN140）可以明顯下調(diào)乳腺癌細胞中CXCR4表達，從而抑制動物模型中乳腺癌轉(zhuǎn)移發(fā)生。Liang等在體外試驗中發(fā)現(xiàn)，CXCL12在20秒內(nèi)可使乳腺癌細胞內(nèi)的絲狀肌動蛋白（F2肌動蛋白）增加2.2倍，使細胞形成明顯的偽足，并呈劑量依賴性誘導(dǎo)乳腺癌細胞定向遷移和侵襲，抗CXCR4抗體可阻斷這一效應(yīng)。Kato等對79例手術(shù)切除的乳腺浸潤性導(dǎo)管

3、癌組織進行的研究表明，所有患者的癌組織均表達CXCR4，其中高表達尤其是局灶性高表達者伴有廣泛的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示CXCR4可能在乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移中起促進作用。最近采用RT-PCR法對乳腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12高表達可增加細胞的侵襲和遷移，其表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與生存時間呈負相關(guān)。研究表明成纖維細胞釋放的CXCL12和ICC中CXCR4的表達的相互作用，可能在ICC的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用；腫瘤壞死因子一α可能通過增加CXCR4的表達

4、，增強ICC細胞的侵襲。Yasumoto等研究發(fā)現(xiàn)，伴有腹膜轉(zhuǎn)移的晚期胃癌患者體內(nèi)的腹水中含有高濃度的CXCL12（4.67μg/L）；CXCR4在胃癌中的陽性表達率為67％（22/33），并與腹膜轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，從而表明CXCL12-CXCR4生物學(xué)軸在胃癌腹膜播散進展中起重要作用。
　　 手術(shù)切除的胰腺癌標本比正常胰腺組織表達更高水平的CXCR4，而CXCR4也常在轉(zhuǎn)移性胰腺癌中表達。CXCL12誘導(dǎo)CXCR4陽性的胰腺癌細胞

5、株趨化，可通過CXCR4單克隆抗體和對抗物AMD3100抑制。我們試圖在此基礎(chǔ)上進一步探討CXCR4-CXCL12生物學(xué)軸對人胰腺癌細胞系生物學(xué)特性的影響
　　 方法：購買ATCC來源的四種胰腺癌細胞株（AsPC，BxPC，CFPAC-1,PANC-1），分別進行傳代培養(yǎng)。westernblot檢測并篩選四種胰腺癌細胞株趨化因子受體CXCR4陽性表達較高的細胞株。MTT法測定細胞增殖率：將待測細胞分別按2.5×104/100ul

6、和5×104/100ul加入96孔板，各設(shè)置4組，細胞數(shù)的不同作為效果對比。在酶聯(lián)免疫檢測儀上，550nm波長處測定各孔吸光度值（OD值），以反映細胞增殖的情況。細胞存活率=實驗組吸光度值/對照組吸光度值×100％。Transwell法進行細胞遷移和侵襲實驗，測量OD值。
　　 結(jié)果：四種胰腺癌細胞株趨化因子受體CXCR4mRNA陽性表達較高的細胞株為PANC-1,其相對表達量為2.25±1.19，MD3100在低濃度時具有刺激