人類早期卵裂胚胎凍融過(guò)程中卵裂球丟失對(duì)子代安全性的影響.pdf

1、1984年，人類首例凍融胚胎移植(frozen-thawedembryotransfer，F(xiàn)ET)后的小孩在英國(guó)出生。此后，胚胎冷凍技術(shù)迅速發(fā)展，大量人類合子、卵裂期胚胎、囊胚被用于冷凍保存。FET可提高積累妊娠率、降低多胎率，同時(shí)預(yù)防重度卵巢過(guò)度刺激綜合征的發(fā)生，已成為現(xiàn)代輔助生殖技術(shù)(assistedreproductivetechnology，ART)的一項(xiàng)常規(guī)操作。目前，歐洲國(guó)家1-4％的新生兒來(lái)自ART，而FET周期數(shù)已占AR

2、T周期數(shù)的20％，F(xiàn)ET子代已成為ART子代不容忽視的重要組成部分。由于ART各項(xiàng)技術(shù)均缺乏實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)研究及其非自然生殖的特性，ART的安全性一直是大家關(guān)注的焦點(diǎn)，現(xiàn)關(guān)于FET子代的健康研究已有一些報(bào)導(dǎo)。研究指出，與新鮮胚胎移植出生的新生兒相比，F(xiàn)ET新生兒的結(jié)局相對(duì)令人欣慰，單胎平均出生體重較前者高，早產(chǎn)(pretermbirth，PTB)和低出生體重(lowbirthweight，LBW)的風(fēng)險(xiǎn)有所降低。
　　 在卵裂期胚胎

3、冷凍和解凍過(guò)程中，一部分會(huì)經(jīng)受住凍融的考驗(yàn)，卵裂球保持完整；一部分會(huì)因細(xì)胞溶解或壞死丟失部分卵裂球；還有部分胚胎會(huì)在這個(gè)過(guò)程中退化。由于胚胎早期的卵裂細(xì)胞均為干細(xì)胞，具有全能性，即使丟失部分卵裂球，胚胎仍有能力發(fā)育成一個(gè)完整的個(gè)體。目前認(rèn)為解凍后至少50％的卵裂球保持完整，且具有分裂能力的凍融胚胎適合于移植。卵裂球丟失是卵裂期胚胎凍融過(guò)程中的一種常見(jiàn)現(xiàn)象，約50％的冷凍胚胎會(huì)發(fā)生不同程度的卵裂球損傷，以往的研究?jī)H關(guān)注于此種現(xiàn)象對(duì)胚胎種植

4、潛能的影響。在對(duì)人類和小鼠胚胎的研究中均發(fā)現(xiàn)與卵裂球完整的凍融胚胎相比，卵裂球丟失胚胎的種植能力顯著降低。移除了損壞的細(xì)胞物質(zhì)后，胚胎的種植率和妊娠率均得到了一定程度的提高。
　　 胚胎植入前階段是其發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，包括基因組的激活、基因印記狀態(tài)的維持、非印記基因第二次去甲基化和甲基化的重建都發(fā)生于此階段。一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明發(fā)生于此期的不良事件，例如胚胎體外培養(yǎng)、卵裂球活檢、胚胎冷凍保存，都會(huì)對(duì)其后續(xù)的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響，甚至影

5、響子代成年后的健康。而卵裂球丟失的冷凍胚胎就經(jīng)受了一系列不良事件，除了凍融程序本身導(dǎo)致胚胎細(xì)胞的形態(tài)和代謝的改變外，胚胎尚經(jīng)歷了部分物質(zhì)的減少，且損傷細(xì)胞釋放的物質(zhì)可能對(duì)余下卵裂球產(chǎn)生毒性作用，干擾胚胎的正常種植和發(fā)育。因此，卵裂球丟失現(xiàn)象對(duì)FET子代的短期和長(zhǎng)期影響不容忽視，但目前尚無(wú)此方面的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。
　　 所以，本研究致力于探索人類早期卵裂胚胎凍融過(guò)程中卵裂球丟失對(duì)FET子代安全性的影響，以卵裂球完整的凍融胚胎移植后

6、出生的子代為對(duì)照。先對(duì)卵裂球丟失胚胎移植后的妊娠周期的早期妊娠結(jié)局和單胎新生兒結(jié)局進(jìn)行臨床分析；接著對(duì)卵裂球丟失胚胎發(fā)育而來(lái)的單胎子代的生長(zhǎng)發(fā)育和智力發(fā)育情況進(jìn)行評(píng)估。從而在新生兒和幼年兒童兩個(gè)層面系統(tǒng)評(píng)估卵裂球丟失胚胎的子代安全性。
　　 第一部分:卵裂球丟失和卵裂球完整的凍融胚胎移植后早期妊娠結(jié)局和單胎新生兒結(jié)局比較
　　 目的：研究人類早期卵裂胚胎凍融過(guò)程中卵裂球丟失是否會(huì)對(duì)早期妊娠結(jié)局和單胎的新生兒結(jié)局產(chǎn)生影響。

7、
　　 對(duì)象與方法：回顧性分析2001年1月至2010年4月在我院生殖中心行FET并妊娠的病例，所有移植胚胎均為卵裂球丟失胚胎的周期納入實(shí)驗(yàn)組(n=220)，所有移植胚胎均為卵裂球完整胚胎的周期納入對(duì)照組(n=687)。比較兩組之間早期妊娠結(jié)局及活產(chǎn)單胎的新生兒結(jié)局是否存在差異。并進(jìn)一步分析了影響單胎新生兒出生體重的因素。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組220例妊娠周期與對(duì)照組687例妊娠周期相比，前者生化妊娠率顯著增高(8.6％比

8、4.1％，P=0.008)，出生子代的多胎比率顯著降低(28.2％比48.6％，P<0.001)。校正一些干擾因素的影響后，實(shí)驗(yàn)組125例單胎的平均出生體重顯著低于對(duì)照組338例單胎的平均出生體重(3229.6±510.1g比3338.5±473.8g，P=0.014)。但兩組單胎的孕周無(wú)顯著差異，實(shí)驗(yàn)組單胎早產(chǎn)兒、低出生體重兒、小于胎齡兒的風(fēng)險(xiǎn)等也未見(jiàn)增高。
　　 結(jié)論：我們的研究進(jìn)一步證明了卵裂球丟失會(huì)降低胚胎的發(fā)育潛能，且

9、影響胚胎的后續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致單胎子代的較低出生體重。
　　 第二部分:卵裂球丟失和卵裂球完整凍融胚胎發(fā)育而來(lái)的單胎子代兒童期生長(zhǎng)發(fā)育和智力發(fā)育的比較
　　 目的：
　　 研究人類早期卵裂胚胎凍融過(guò)程中卵裂球丟失對(duì)單胎子代生長(zhǎng)發(fā)育及智力發(fā)育的影響。
　　 對(duì)象和方法：
　　 研究對(duì)象為2001年8月-2008年8月在我院生殖中心行FET后出生的單胎子代，卵裂球丟失胚胎發(fā)育而來(lái)的子代納入實(shí)驗(yàn)組，卵裂球

10、完整胚胎發(fā)育而來(lái)的子代納入對(duì)照組。通過(guò)信件或電話聯(lián)系，動(dòng)員其父母參加我院的試管嬰兒隨訪工作。測(cè)量?jī)和纳砀摺Ⅲw重，以WHO(2006年)新發(fā)布的參考值及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)給予體格發(fā)育評(píng)估。對(duì)于不同年齡的兒童，選擇最適合的測(cè)試量表，包括Gesell發(fā)育量表、中國(guó)-韋氏幼兒智力量表、中國(guó)-韋氏兒童智力量表，計(jì)算各自的發(fā)育商或智商，以評(píng)估其生長(zhǎng)發(fā)育和智力發(fā)育情況。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)組42個(gè)、對(duì)照組75個(gè)單胎子代參加隨訪，兩組兒童

11、的體格發(fā)育參數(shù)無(wú)明顯差異。共22例實(shí)驗(yàn)組單胎和48例對(duì)照組單胎進(jìn)行了Gesell發(fā)育指數(shù)測(cè)試，校正父母學(xué)歷、是否為低出生體重等干擾因素的影響后，發(fā)現(xiàn)兩組兒童的適應(yīng)性、精細(xì)動(dòng)作、大運(yùn)動(dòng)和語(yǔ)言發(fā)育商均無(wú)顯著差異，實(shí)驗(yàn)組子代個(gè)人-社交能力顯著低于對(duì)照組。共20例實(shí)驗(yàn)組單胎和27例對(duì)照組單胎進(jìn)行了韋氏智力測(cè)試，校正上述干擾因素的影響后，兩組兒童的言語(yǔ)智商、操作智商和總智商也無(wú)顯著差異。多元線性回歸分析顯示，母親文化水平顯著影響適應(yīng)性發(fā)育商，父親