廣州地區(qū)耐多藥結(jié)核分枝桿菌katG及rpoB基因突變的分子特征研究.pdf

1、為了解廣州地區(qū)耐多藥結(jié)核分枝桿菌rpoB基因及katG基因突變的分子特征，并進(jìn)一步探討耐多藥的產(chǎn)生機(jī)制。本研究運(yùn)用PCR-直接測序法，對來自廣州地區(qū)的100例耐多藥結(jié)核分枝桿菌株的rpoB及katG基因進(jìn)行序列測定并進(jìn)行分析。其中，katG引物：上游引物：5’-GAAACAGCGGCGCTGATCGT-3’；下游引物：5’-GTTGTCCCATTTCGTCGGGG-3’。目的片段長度約210bp，由261至330位密碼子。rpoB引物：

2、上游引物：5’-CGTACGGTCGGCGAGCTGATC-3’；下游引物：5’-AGGGGTTTCGATCGGGCACATC-3’。目的片段長度約333bp，由453至564位密碼子，包含利福平耐藥決定區(qū)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：100例耐多藥菌株中，成功擴(kuò)增出rpoB基因或katG基因者各有95例，其中94例為重疊菌株。95例耐多藥菌株katG基因總體突變率為73.68％，均為單位點(diǎn)突變，未見插入或缺失。突變位點(diǎn)100%位于315位點(diǎn)，包含3種突

3、變類型：AGC（Ser）→ACC（Thr）占94.28%；AGC（Ser）→ATC（Ile）占2.86%；AGC（Ser）→AAC（Asn）占2.86%。廣州地區(qū)katG基因突變中S315T占主導(dǎo)地位。95例耐多藥菌株rpoB基因突變率為91.58%。86例為點(diǎn)突變，1例插入突變，未發(fā)現(xiàn)缺失突變。所見突變位點(diǎn)包括：481、504、509、511、512、515、518、526、531、541位點(diǎn)，最常見位點(diǎn)為531（62.07%），其次

4、526（21.84%），再次516（10.35%）。其中：單位點(diǎn)突變69例（80.23%），雙位點(diǎn)突變16例（18.60%），其中一例合并同義突變，三位點(diǎn)突變1例（1.17%）。511位點(diǎn)突變常同時(shí)伴有其他位點(diǎn)突變（57.14%）。廣州地區(qū)耐多藥菌株rpoB基因主要突變位點(diǎn)與國內(nèi)外報(bào)道基本相同，但各位點(diǎn)所占比例具有地域差異,聯(lián)合突變率較高,占19.54%。512位點(diǎn)插入（AGGAGC）突變可能為新突變類型。而在94例重疊菌株中，72.3