鼻腔交感神經(jīng)或副交感神經(jīng)抑制對鼠變應(yīng)性鼻炎Th1-2平衡的影響.pdf

1、目的:變應(yīng)性鼻炎是臨床常見疾病，在發(fā)展中國家發(fā)病率有逐年升高趨勢，長沙10-17歲中小學(xué)生發(fā)病率約為17％。其發(fā)病機(jī)制仍未闡明，治療對策還需進(jìn)一步完善。本研究通過建立小鼠變應(yīng)性鼻炎模型，分別使用交感神經(jīng)抑制劑6-羥基多巴胺及副交感神經(jīng)抑制劑異丙托溴銨處理變應(yīng)性鼻炎小鼠，觀察這些藥物是否改變了鼻粘膜Th1、Th2，Treg等免疫細(xì)胞的細(xì)胞因子表達(dá)水平，進(jìn)一步探素自主神經(jīng)系統(tǒng)對鼻粘膜免疫及炎癥反應(yīng)的影響。
　　方法:將24只6-8周B

2、alb/c小鼠，隨機(jī)分為四組:正常對照組(A)，變應(yīng)性鼻炎模型無處理組(B)、模型異丙托溴銨處理組(C)、模型6-羥基多巴胺處理組(D)，每組6只。運(yùn)用卵清蛋白腹腔注射聯(lián)合鼻腔攻擊的方法對B、C、D組小鼠進(jìn)行處理，建立小鼠變應(yīng)性鼻炎模型;采用標(biāo)準(zhǔn)的臨床癥狀評分方法對小鼠變應(yīng)性鼻炎癥狀進(jìn)行評估;使用常規(guī)病理組織學(xué)方法對鼻粘膜形態(tài)及細(xì)胞類型進(jìn)行檢查;運(yùn)用ELISA方法檢測血清中OVA-sIgE的濃度;采用免疫組化技術(shù)觀察鼻粘膜中IL-4、I

3、FN-γ、 FoxP3、VIP以及SP細(xì)胞數(shù)目的變化。
　　結(jié)果:1、應(yīng)用小鼠變應(yīng)性鼻炎癥狀評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評估，其結(jié)果顯示，經(jīng)卵清蛋白抗原攻擊后，B、C、D組的18只小鼠中，17只小鼠符合鼠變應(yīng)性鼻炎的診斷，表明了鼠變應(yīng)性鼻炎模型成功建立。B組中1只小鼠沒有表現(xiàn)出變應(yīng)性鼻炎的癥狀，被剔除進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。其平均積分分別是:A組，0.8±0.75;B組，6.4±1.14;C組，6.8±1.17;D組，6.3±1.21。各組經(jīng)相應(yīng)處理14天后

4、，積分分別是:A組，0.7±0.81;B組，6.2±1.09;C組，3.8±0.98;D組，7.0±1.09。C組經(jīng)異丙托溴銨處理后積分顯著下降(p＜0.01)。2、血清ELISA檢測結(jié)果顯示，經(jīng)卵清蛋白抗原攻擊后的B、C、D組，血清中OVA-sIgE濃度分別為112.5±16.3ng/ml，123.5±16.6ng/ml，124.4±17.1 ng/ml，都顯著高于A組(22.1±4.33 ng/ml)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.0

5、1)。而B、C、D組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。各組經(jīng)相應(yīng)處理14天后，其A、B、C、D各組OVA-sIgE的濃度分別為26.1±4.13ng/ml，120.3±16.1 ng/ml，74.4±9.87ng/ml，130.7±16.1 ng/ml。異丙托溴銨的處理顯著降低了變應(yīng)性鼻炎小鼠血清的OVA-sIgE濃度(p＜0.01)。3、病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，與對照組比較，變應(yīng)性鼻炎組的鼻粘膜纖毛稀少，排列不規(guī)則，并且可見許多血

6、管及腺體的增生和擴(kuò)張，組織水腫，嗜酸性粒細(xì)胞及其他炎癥細(xì)胞的浸潤。異丙托溴銨的處理顯著減少了嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤及腺體和血管的增生和擴(kuò)張。而6-羥基多巴胺沒有使鼠變應(yīng)性鼻炎的病理組織學(xué)發(fā)生改變。4、變應(yīng)性鼻炎模型及對照組經(jīng)各種處理后，A、B、C、D各組中，鼻粘膜IL-4陽性細(xì)胞數(shù)分別為，8.2±1.45％，28.2±8.41％，12.4±3.12％，31.7±9.13％;INF-γ的陽性細(xì)胞數(shù)分別為6.1±0.35％，2.8±0.63％，

7、3.9±0.42％，3.6±0.51％; Foxp3的陽性細(xì)胞數(shù)分別為9.5±1.81％，2.0±0.52％，7.8±0.98％，2.7±0.47％;變應(yīng)性鼻炎小鼠模型組的鼻粘膜IL-4陽性細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(p＜0.01)，經(jīng)異丙托溴銨處理后變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻粘膜的IL-4陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低(p＜0.01)，而6-羥基多巴胺的處理沒有改變IL-4的陽性細(xì)胞數(shù)(p＞0.05)。另一方面，小鼠模型組的Foxp3陽性細(xì)胞數(shù)顯著低于對照組(p

8、＜0.01)，經(jīng)異丙托溴銨處理后Foxp3的陽性細(xì)胞數(shù)顯著升高(p＜0.01)，而6-羥基多巴胺處理沒有改變Foxp3的表達(dá)。盡管變應(yīng)性鼻炎小鼠的INF-γ陽性細(xì)胞數(shù)顯著低于對照組，但異丙托溴銨及6-羥基多巴胺的處理沒有改變其表達(dá)水平(p＞0.05)。5、變應(yīng)性鼻炎模型及對照組經(jīng)各種處理后，ABCD各組鼻粘膜中VIP的陽性細(xì)胞及陽性纖維數(shù)分別為5.8±0.21％，26.6±6.34％，16.2±1.83％，33.5±5.51％; SP的

9、陽性細(xì)胞及陽性纖維鼠分別為6.9±1.53％，23.5±6.02％，12.6±1.31％，25.6±8.32％。變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻粘膜的SP和VIP的表達(dá)水平均顯著高于對照組(p＜0.01)，異丙托溴銨的處理顯著降低了他們的表達(dá)水平，而8-羥基多巴胺沒有改變他們的表達(dá)水平(p＞0.05)。
　　結(jié)論:1、運(yùn)用卵清蛋白的腹腔注射聯(lián)合鼻粘膜抗原攻擊的方法建立小鼠變應(yīng)性鼻炎模型的成功率高;2、膽堿能抑制劑不僅能有效的緩解變應(yīng)性鼻炎小鼠的流