基于炎性疾病組織重建的食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)與疾病病理學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、在肥胖與靜脈曲張等慢性炎性疾病的發(fā)病機(jī)制中，包含著血管化、脂肪沉積和蛋白水解等組織重建事件?；谶@些組織重建事件，開展疾病病理學(xué)和食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究，有利于這些疾病的診斷與防治。本論文以此為出發(fā)點(diǎn)，針對(duì)農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程領(lǐng)域的重要科學(xué)問題，深入研究了食品功能因子—木犀草素在肥胖與相關(guān)代謝疾病中的作用;此外，研究了半胱氨酰組織蛋白酶在與肥胖相關(guān)的靜脈曲張發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　第一部分:木犀草素改善小鼠肥胖與胰島素抵抗的機(jī)制研究

2、>　　肥大細(xì)胞(MCs)在飲食誘導(dǎo)的肥胖和糖尿病的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，它可以通過增強(qiáng)血管化作用直接參與肥胖代謝的調(diào)控。一些合成的MCs穩(wěn)定劑，色甘酸鈉(DSCG)和酮替芬可以改善相關(guān)的小鼠代謝失調(diào)。作為一種天然黃酮類MCs穩(wěn)定劑，木犀草素能夠比DSCG和酮替芬更加有效地阻止MCs的脫顆粒和細(xì)胞因子釋放。
　　本研究中，我們以正常飲食C57BL/6雄鼠作為對(duì)照，采用高脂飲食誘導(dǎo)的方式建立肥胖小鼠模型，并在高脂飲食中添加0.00

3、2％或0.01％的木犀草素，來考察兩種低劑量木犀草素干預(yù)對(duì)飲食誘導(dǎo)的小鼠肥胖和胰島素抵抗的影響。根據(jù)研究?jī)?nèi)容，主要采用組織化學(xué)、Real-timePCR、ELISA和Western Blot等技術(shù)，得到以下研究結(jié)果:1）飲食補(bǔ)充0.002％或0.01％木犀草素，顯著抑制了高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠體重增加、脂肪沉積和脂肪細(xì)胞肥大。2）木犀草素飲食干預(yù)，改善了小鼠的葡萄糖不耐受性和胰島素敏感性。3）木犀草素飲食干預(yù)，減少了小鼠附睪脂肪組織的血管生

4、成和相關(guān)的組織蛋白酶表達(dá)和活性，并且激活了細(xì)胞凋亡。4）木犀草素飲食干預(yù)，降低了小鼠附睪脂肪組織中巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，以及組織和循環(huán)中的炎性細(xì)胞因子水平。5）進(jìn)一步研究表明，木犀草素在小鼠體內(nèi)，能夠抑制MCs向附睪脂肪組織的浸潤(rùn)，以及其特異蛋白酶的表達(dá)。
　　總之，本論文研究結(jié)果證明，木犀草素作為一種食品源天然黃酮化合物，其低劑量飲食補(bǔ)充能顯著改善小鼠飲食誘導(dǎo)的肥胖和胰島素抵抗，提示這一方式可以作為一種新型的飲食營(yíng)養(yǎng)干預(yù)和治療方式而緩

5、解上述常見的代謝疾病。
　　第二部分:溶酶體半胱氨酰組織蛋白酶在靜脈曲張中的作用:一個(gè)組織學(xué)的研究
　　靜脈曲張是一種主要的慢性炎性靜脈疾病。原發(fā)性靜脈曲張的形成是一個(gè)復(fù)雜的、多中心的病理過程，其病因和發(fā)病機(jī)制至今仍未能明確，而肥胖是其風(fēng)險(xiǎn)因子之一。病理研究顯示，靜脈曲張血管壁中存在著特征性的胞外基質(zhì)重建和蛋白水解事件，其中基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員已被認(rèn)為參與了曲張靜脈壁的組織重建。但是，對(duì)于其他家族蛋白酶成員，例如在動(dòng)脈疾病

6、組織重建中起重要作用的溶酶體半胱氨酰組織蛋白酶，是否也具有相應(yīng)的作用卻知之甚少。
　　在本研究中，我們收集了18位靜脈曲張病人和9位創(chuàng)傷性截肢病人的大隱靜脈分別作為靜脈曲張組和正常靜脈組，主要采用化學(xué)、免疫化學(xué)和免疫熒光組織學(xué)技術(shù)，系統(tǒng)地研究了幾種主要的溶酶體半胱氨酸蛋白酶，組織蛋白酶B、L、K、S以及它們的內(nèi)源性抑制劑胱蛋白酶抑制劑C在靜脈中的分布和表達(dá)。主要研究結(jié)果如下:1）利用HE染色和Van Gieson-orcein染色

7、，比較了正常靜脈和曲張靜脈的結(jié)構(gòu)差異，顯示曲張靜脈在內(nèi)膜、中膜和外膜均存在不同程度的組織重建和基質(zhì)蛋白紊亂，提示著大量蛋白水解事件的發(fā)生。2）采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，證明在曲張靜脈壁中組織蛋白酶B、L、K和S含量增加，而胱蛋白酶抑制劑C的含量減少;從而，打破了正常靜脈組織中組織蛋白酶與其內(nèi)源性抑制劑間的平衡關(guān)系，并可能由此導(dǎo)致曲張靜脈壁的組織重建。3）為了探討這些蛋白酶表達(dá)的炎性機(jī)制，我們?cè)敿?xì)研究了曲張靜脈壁組成細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞